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钨酸钠促进新生猪胰岛细胞体外增殖、分化及分泌功能
目的 观察钨酸钠在体外对新生猪胰岛细胞增殖及功能活性的影响.方法 分离和纯化新生猪胰岛细胞后,与钨酸钠共育,隔天进行细胞计数、MTT实验,取佳浓度300μmol/L钨酸钠与细胞共同培养3d,收集细胞进行葡萄糖刺激实验,并分别用Western blot、RT-PCR方法检测细胞内胰岛素蛋白(INSULIN)、细胞增殖核抗原(PCNA)和胰十二指肠同源框蛋-1(PDX-1)mRNA、葡萄糖转运子-2(GLUT-2)mRNA的表达.结果 300 μmol/L钨酸钠处理后胰岛细胞增殖活性及葡萄糖刺激实验中胰岛素分泌明显高于对照组(P＜0.05),钨酸钠干预组PCNA蛋白和IN-SULIN蛋白表达分别为2.24 ±0.19和1.62 ±0.17,显著高于对照组的1.17±0.13和0.37±0.08 (P＜ 0.05,P ＜0.01);PDX-1和GLUT-2 mRNA表达分别为0.34±0.05和1.06±0.10,显著高于对照组的0.11±0.03和0.13±0.02(P＜0.01).结论 低浓度(300 μmol/L)钨酸钠具有促进新生猪胰岛细胞增殖分化、增强胰岛细胞功能、促进胰岛素分泌的作用.
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微囊化新生猪胰岛细胞异种移植生物相容性和疗效的研究
目的：研究微囊化新生猪胰岛细胞异种移植影响生物相容性的因素以及对1型糖尿病的疗效。方法：注射链脲霉素诱发糖尿病大鼠模型后，将不同组微囊化新生猪胰岛细胞、未微囊化新生猪胰岛细胞及空微囊，经腹腔植入1型糖尿病大鼠体内，移植后不应用任何免疫抑制剂，测量移植后大鼠血糖、体重、胰岛素C肽的变化。结果：移植后6～8周实验组、对照组3糖尿病大鼠血糖、体重逐渐恢复正常水平；移植后实验组、对照组1、2、3血清C肽水平升高，对葡萄糖刺激实验反应明显；胰岛素释放试验显示葡萄糖可刺激胰岛细胞释放胰岛素实验组与对照组比较有统计学意义（ p＜0．01）。结论：微囊周围细胞过度增生是导致移植物功能丧失的主要原因；微囊化新生猪胰岛细胞可以纠正糖尿病大鼠高血糖状态，在体内可以生长、分化，并增加胰岛素分泌水平。
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新生猪胰岛细胞的聚鸟氨酸微囊体外试验研究
微囊化技术为异种细胞的移植提供免疫屏障,可有效隔离移植体内的免疫排斥反应[1].微囊化胰岛细胞的移植在治疗糖尿病方面取得了很大的进展,但由于制备微囊所用材料不同,对移植后囊中细胞的生理功能影响也不同,目前,经常制备的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊,而海藻酸钠-聚鸟氨酸-海藻酸钠(ALA)微囊很少有报道.
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AAV 体外介导hCTLA4-Ig 在新生猪胰岛细胞中的表达与生物学活性
目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性.方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达.转染后的新生猪胰岛细胞与人淋巴细胞共孵育,通过ELISA法检测培养基中IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子水平的变化.并观察转染组与对照组葡萄糖刺激后的胰岛素释放反应.结果:转染组NIPs可检测到hCTLA4-Ig基因及蛋白表达;与人淋巴细胞共孵育后IL-2,TNF-α,IFN-γ浓度明显低于对照组(P＜0.01);且葡萄糖刺激胰岛素释放反应与对照组无明显差异(P＞0.05).结论:AAV-CTLA4-Ig体外转染的胰岛细胞能够表达具有生物学活性的hCTLA4-Ig,可抑制T细胞激活,而胰岛细胞生理功能不受影响.
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小分子RNA干扰组织因子在新生猪胰岛细胞中的表达
目的:利用小分子RNA(siRNA)在基因水平对新生猪胰岛细胞进行修饰,抑制细胞组织因子的表达.方法:设计5对siRNA转染新生猪胰岛细胞,用real-time PCR方法筛选组织因子基因沉默效果好的siRNA或组合,同时流式细胞仪检测siRNA转染对细胞活性的影响,real-time PCR和流式细胞仪分别检测细胞组织因子的基因及蛋白沉默水平.结果:根据real-time PCR结果筛选出组织因子基因沉默效果好的3对siRNA组合,转染新生猪胰岛细胞后,real-time PCR及流式细胞仪检测新生猪胰岛细胞组织因子的基因沉默效率达60％,蛋白表达水平降低约50％,同时流式细胞仪检测结果提示siRNA转染对新生猪胰岛细胞的活性没有明显的影响.结论:3对siRNA组合在体外特异性抑制新生猪胰岛细胞组织因子的表达.
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人类间充质干细胞来源的外泌体对猪胰岛抗缺氧能力的影响
目的 探讨来自人类脐带源间充质干细胞条件培养基(human umbilical cord-derived MSC-conditioned medium,Hu - MSC-CM)中的外泌体能否增加新生猪胰岛细胞(neonatal porcine islet cell clusters, NICCs)在缺氧环境下的生存和功能.方法 NICCs在低氧条件下(1% O2)分别用含外泌体的条件培养基、去除外泌体的条件培养基和常规培养基进行培养.荧光激活细胞分选仪和细胞外通量测定法分别检测外泌体对细胞活性和功能的影响,实时定量PCR检测NICCs中缺氧耐受相关基因HIF-1α、PDH2及VEGF的表达.结果 与常规培养基组和去除外泌体的条件培养基组相比,含外泌体的条件培养基组培养的NICCs其存活率、活性和功能均有所提高〔IEQ :7 800±210比5 894±188、4 740±273,P＜0.001 ;β细胞存活率(%):77.2±7.0比68.8±1.8、61.5±5.1,P＜0.05〕.含外泌体的条件培养基组孵育的NICCs细胞中HIF-1α、PDH2及VEGF基因表达均显著高于另外两组.结论 人类脐带源MSC -条件培养基可以减轻NICCs在缺氧过程中导致的功能障碍,外泌体在诱导低氧抵抗方面发挥重要作用.
