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2种粒径PLGA纳米粒细胞摄取动力学的比较
目的:比较包载有荧光香豆素-6(coumarin-6,C6)的2种粒径聚乳酸-羟基乙酸共聚物(plylactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA)纳米粒,经肿瘤细胞的摄取动力学的差异.方法:以生物可降解材料PLGA为载体,采用乳化溶剂挥发法制备2种不同粒径的载有C6的PLGA纳米粒,以黑色素肿瘤细胞(B16)和脑胶质瘤细胞(U87)为细胞模型,分别与2种粒径的纳米粒孵育0.5,1,4,6和17 h,用荧光光度计检测细胞裂解液中C6的荧光值,计算得出2种细胞摄入的载药PLGA纳米粒的量(以C6的量表示),绘制入胞动力学曲线.应用GraphPad Prism程序处理2种细胞得出的数据,并应用T检验法分析各组数据之间的差异.结果:孵育0.5h后,2种粒径纳米粒在2种细胞中的摄取量均表现出显著差异;且随着时间延长,该差异加大.细胞摄取时间在6 ～17h时,粒径约为150 nm的PLGA纳米粒的入胞速率明显变缓.结论:在相同的给药浓度下,小粒径纳米粒入胞速率要快于较大粒径的纳米粒.大粒径的纳米粒比小粒径纳米粒的入胞量到达平衡快,且总的入胞量要少.
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超声辐照微泡增强病毒载体转染的细胞内吞行为研究
目的：探索超声辐照微泡介导腺相关病毒(AAV)对不同细胞的转染和细胞内吞活动。方法以不同梯度浓度的携增强型绿色荧光基因的重组腺相关病毒2型(rAAV2-EGFP)转染人宫颈癌细胞(HeLa)和小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)细胞,分别获得佳可提高基础浓度。以此浓度,超声辐照微泡介导 rAAV2-EGFP 转染 HeLa 和 NIH/3T3细胞后48 h 荧光显微镜观察和流式细胞仪检测 EGFP 基因转染效率,并采用 CCK-8检测其安全性。超声辐照微泡介导 AAV 转染后45 min,采用免疫荧光的方法共聚焦显微镜和透射电镜观察细胞膜内网格蛋白包裹的内吞泡的数量和分布。结果 rAAV2-EGFP 转染 HeLa和 NIH/3T3细胞的佳可提高浓度分别为2000 v.g./cell 和10000 v.g./cell。超声辐照微泡可显著提高rAAV2-EGFP 对 HeLa 和 NIH/3T3细胞的转染效率(P <0.01),而细胞活性无显著下降(P >0.05)。共聚焦显微镜和电镜显示,超声辐照微泡介导后,细胞膜内侧面网格蛋白包裹的内吞泡明显增多。结论超声辐照微泡可提高有赖于细胞转运的 AAV 病毒颗粒对两种不同细胞的基因转染,激活细胞内吞活动可能是超声辐照微泡促进 AAV 转运的机制之一。
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金匮肾气丸防治创伤后应激障碍综合征孕鼠胎损的基因表达谱机制研究
背景孕期应激所致胎损与先天受损所致的肾气受损密切相关，而金匮肾气丸补肾后可改善母代孕期创伤后应激障碍综合征（PTSD）所损之肾气，改善母代 PTSD 导致的子代生长发育异常。目的研究金匮肾气丸防治PTSD 孕鼠所致胎损的基因表达谱机制。方法2014年7月—2015年3月，将首次受孕的36只 SD 孕鼠按照随机数字表法分为空白对照组、PTSD 组、中药组，每组12只。PTSD 组和中药组大鼠于孕中期（妊娠第7~13天）进行 PTSD造模。空白组和 PTSD 组正常实验条件下常规饲料喂养，中药组造模同时予以金匮肾气丸饲料至分娩。采用表达谱芯片检测30日龄子鼠的基因表达情况。结果 PTSD 组与空白对照组子鼠基因表达谱分析显示，共有112条基因差异表达，其中高表达70条，低表达42条。金匮肾气丸可使得其中的53条差异表达基因恢复正常，这53条基因主要参与胞吞通路与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。结论金匮肾气丸防治孕鼠 PTSD 胎损的分子生物学机制与53条基因的差异表达有关，主要涉及胞吞通路与 MAPK 信号通路。
关键词： 金匮肾气丸 创伤后应激障碍综合征 基因表达谱 MAPK 信号通路 细胞内吞 -
Megalin在胚胎期小鼠肾脏中的表达
目的 观察胞吞受体megalin在胚胎发育不同时期小鼠肾脏中的表达.方法 采用免疫组织化学技术及体视学方法检测胚龄9.5、11、14、16、18d小鼠肾脏megalin的表达.结果 Megalin在胚龄9.5d小鼠表达于中肾管上皮细胞游离面,胚龄11d表达于输尿管芽的上皮细胞游离面,胚龄14d megalin表达量逐渐增多,主要分布于输尿管芽的壶腹部和发育中的肾近端小管上皮细胞游离面及较成熟的近端小管刷状缘.胚龄16d至胚龄18d megalin主要表逸于近端小管的刷状缘,肾小球内也有微量表达.结论 Megalin在胚胎肾发生中的表达存在着时空顺序,可能与肾小管,乃至肾单位的分化及成熟有关.
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阳离子聚合物介导的基因治疗细胞内途径和主要屏障研究进展
阳离子聚合物作为一种非病毒基因载体,携带目的基因形成聚合复合物,在达到靶器官或靶细胞之前要克服使复合物解离、DNA降解或被清除的各种胞外屏障,到达靶细胞后还要克服胞膜、内涵体/溶酶体、胞浆和核膜等胞内屏障,才能成功转染靶细胞并终发挥治疗作用.本文对阳离子聚合物介导的基因治疗的细胞内途径、胞内胞外屏障及阳离子聚合物的设计展望等进行综述.
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聚乙二醇修饰的阳离子脂质体作为siRNA传递系统的处方优化
研究摩尔分数为0% ～5%的聚乙二醇(PEG)修饰的阳离子脂质体作为siRNA传递系统的优劣.制备了两组高低电荷的空白阳离子脂质体,分别含有摩尔分数为40%和20%的1,2-二油酰基-3-三甲氨基丙烷(DOTAP),以人胰腺癌细胞株Hs-766T作为细胞模型,比较了细胞膜表面结合量及内吞量分别随时间和细胞外给药浓度变化的动力学曲线；结果显示4h时细胞表面结合达到稳态,高电荷脂质体组与细胞的结合量明显高于低电荷脂质体组,PEG的加入使脂质体与细胞表面的不饱和型结合转变为可饱和型.采用共聚焦显微镜定性观察载siRNA的阳离子脂质体在6h的细胞内分布情况,结果表明摩尔分数为40% DOTAP与0%～2% PEG组合有效地将siRNA转运至细胞质,而40% DATAP与5% PEG组合对转运无效.
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CIN85在细胞生理病理活动中作用的研究进展
CIN85是信号接头蛋白家族中的一员,与细胞的各种生理及病理活动相关.CIN85通过其氨基端代表性的SH3结构域与其他蛋白质相互作用,参与控制某些特定细胞的信号转导;参与细胞内吞及囊泡运输,并与其他多种蛋白相互作用介导受体酪氨酸激酶的信号传导;通过不同方式促进恶性肿瘤的发生及癌细胞的迁移、侵袭,并参与其他细胞凋亡过程.因CIN85主要通过N端SH3结构域与其他蛋白相互作用而发挥功能,所以SH3结构域可能成为抗肿瘤治疗有潜力的靶点.
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结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用
目的 探讨癌基因EMS1表达产物皮层蛋白(cortactin)与结肠癌细胞内吞运动的关系.方法 采用共聚焦显微镜检测人结肠癌细胞株HT29细胞内cortactin与内吞过程功能蛋白Rab5及Rab11的分布情况,以及cortactin和组成性内吞标记转铁蛋白(Tfn)的关系.采用病毒转染的方法 .将外源性全长cortactin及其突变体转入结肠癌细胞内,观察过表达皮层蛋白及其变异体对细胞内吞活动的影响.进一步采用Western blot和免疫荧光分析方法 检测cortactin磷酸化与Tfn内吞在时间和剂量上的关系.结果 cortactin与Rab5/11及Tfn在HT29细胞内共定位.当HT29细胞过表达皮层蛋白氨基端或羧基端缺失的突变体时,细胞的内吞活动受到削弱,而表达全长皮层蛋白或载体的对照组未受明显影响.同时发现cortactin的磷酸化与Tfn内吞呈时间和剂量依赖关系.结论 cortactin在结肠癌细胞HT29的内吞活动中发挥作用,其功能的发挥可能依赖其氨基端和羧基端结构区域.在内吞过程中,皮层蛋白发生磷酸化.
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高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出
为了研究高密度脂蛋白3介导大鼠腹腔巨噬细胞内胆固醇流出的机理,用N-乙酰咪唑修饰高密度脂蛋白3,阻断其与细胞表面受体的结合,观察细胞内胆固醇流出.用异硫氰酸荧光素酯标记高密度脂蛋白3,示踪其在细胞内的代谢.结果发现牛血清白蛋白(对照组)介导2.87%细胞内胆固醇流出,高密度脂蛋白3组和N-乙酰咪唑-高密度脂蛋白3组分别为40.68%和8.69%.异硫氰酸荧光素酯-高密度脂蛋白3与细胞在37℃共育3 h后,细胞内吞荧光强度占结合的65.0%,细胞在37℃继续培养2 h后,细胞释放的荧光强度占内吞的78.4%,并且内吞和释放的荧光强度均主要存在于三氯醋酸沉淀部分.结果提示高密度脂蛋白3通过与细胞表面受体作用进入细胞,在细胞内不经过溶酶体途径降解,而是接受细胞内胆固醇后通过逆胞饮形式释放到细胞外.
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细胞内吞在VEGFR2信号转导中的作用
近期研究发现细胞内吞在VEGFR2信号转导中发挥了重要的作用，这种调控作用能够直接影响由VEGF引起的血管生成。由胞膜转运介导 VEGF/VEGFR2信号转导的机制和EGFR相类似，本文就细胞内吞在VEGFR2信号转导中的调控作用作一概述。
关键词： 细胞内吞 胞膜转运 VEGFR2信号转导
