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标本配穴法电针对慢性心肌缺血大鼠心肌线粒体结构及线粒体DNA相关调控因子表达的影响
目的:以线粒体DNA为切入点,观察标本配穴法电针对慢性心肌缺血模型大鼠心肌线粒体结构及线粒体相关DNA调控因子PGC-1α、NRF-1和mtTFA表达的影响,探讨其防治慢性心肌缺血的可能作用机制.方法:将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、电针组,每组各10只.每日以异丙肾上腺素(5mL/kg)皮下注射法复制模,连续7d.电针组在每日造模前,取双“内关”、双“足三里”和“关元”穴电针处理10min,疏密波,2-100Hz,1mA,1次/d,连续21d.运用透射电镜观察心肌线粒体结构变化,采用Western blot和Real-time PCR技术检测大鼠心肌组织PGC-1α、NRF-1和mtTFA的表达水平.结果:与正常组比较,模型组线粒体结构破坏明显,大部分线粒体出现肿胀变形,甚至空泡化;而与模型组比较,电针组线粒体结构损伤程度明显减轻.模型组PGC-1α、NRF-1和mtTFA的表达水平均明显低于正常组(P＜0.01);而经过“标本配穴”电针干预后PGC-1α、NRF-1和mtTFA的表达水平明显回升,与模型组之间比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:“标本配穴”法电针可能是通过调节线粒体DNA调控因子PGC-1α、NRF-1和mtTFA的途径防治慢性心肌缺血.
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miR-211通过靶向调控 TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖
目的 探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响.方法 用miR-211及TFAM作为研究对象.首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5′端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pcDNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;后,检测pcDNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖.结果 miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P<0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P<0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pcDNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P<0.01,蛋白质P<0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P<0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P<0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P<0.05).结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖.
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线粒体转录因子A的研究进展
线粒体转录因子A是HMG蛋白家族中的成员,目前已知除了可以调控线粒体DNA的拷贝数和转录活性、参与细胞凋亡外,还可对人的寿命和疾病产生影响,如甲状腺功能减退性肌病和线粒体脑病等.近来研究还发现mtTFA也可在细胞核内发挥作用,提示核及线粒体基因表达调控的机制上存在偶联或协同作用.本文主要总结近年来关于线粒体转录因子A的研究进展,从其基因学定位和结构、蛋白质结构、基因表达调控及其主要功能做一概述,同时总结不同研究过程中提出的未知问题,并对进一步的研究方向做一展望.
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姜黄素对大鼠大脑皮质缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究
目的 探讨姜黄素预处理对大鼠大脑局灶性缺血再灌注损伤后皮质梗死区线粒体解偶联蛋白2(UCP2)和线粒体转录因子A(TFAM)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠80只,随机均分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、姜黄素高剂量组和低剂量组(简称高、低剂量组).假手术组仅分离暴露右侧颈总、颈外及颈内动脉,其他3组均建立右侧大脑中动脉阻塞模型,缺血2h再灌注24h后处死大鼠,其中高、低剂量组于缺血前5d连续每天分别经腹腔注射姜黄素100、50mg/kg预处理.采用尼氏染色观察大脑中动脉供应皮质区神经元的损伤情况,电镜观察皮质梗死区神经元内线粒体的形态,免疫组化染色和RT-PCR观察UCP2和TFAM在相应皮质区的表达.结果 与假手术组相比,I/R组皮质区神经元水肿,尼氏小体数目减少,神经元内线粒体肿胀,线粒体嵴断裂甚至溶解.缺血前用姜黄素预处理后,神经元丢失及线粒体损伤明显减轻,UCP2和TFAM表达增加(P＜0.05),且以高剂量组增加更明显(P＜0.05).结论 姜黄素可能通过上调UCP2和TFAM的表达来减轻缺血再灌注引起的神经元损伤,调控线粒体生物合成可能成为姜黄素发挥脑保护作用的新靶点.
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力竭运动后不同时相大鼠心肌线粒体转录因子A的变化
目的:探讨力竭运动后不同时相大鼠心肌线粒体转录因子A(mtTFA)表达的变化特点.方法:90只健康成年雄性SD大鼠,分为一次力竭游泳运动组(n=40)、2周反复力竭游泳运动组(n=40)及安静对照组(n=10),分别于力竭运动后0、6、12及24小时取材,应用免疫荧光技术和图像分析方法研究大鼠心肌mtTFA含量的变化.结果:在一次力竭和反复力竭运动后,大鼠心肌各部位mtTFA表达含量均显著低于对照组(P＜0.01).一次力竭运动后,大鼠心肌室间隔、右心室mtTFA含量在运动后12小时达到低(P＜0.01),左心室mtTFA含量在运动后24小时达到低;反复力竭运动后,室间隔、右心室mtTFA含量在运动后12小时达到低(P＜0.01),而左心室mtTFA含量在运动后6小时达到低.结论:一次力竭运动和反复力竭运动可导致mtTFA表达明显降低,直接影响心肌纤维线粒体的氧化能力和能量产生,可能是运动性心肌微损伤和心律失常发生的诱导因素和重要机制之一.此外,上述改变在运动后24小时出现不同程度的回升也提示急性大强度运动后心肌mtTFA的改变是可恢复性的,有别于病理性心肌损伤.
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以miRNA为基础的RNA干扰线粒体相关基因TFAM和POLG的研究
目的 通过慢病毒介导的RNA干扰技术干扰线粒体相关基因TFAM和POLG,为研究线粒体和干细胞提供资料.方法 选取线粒体相关因子TFAM和POLG,分别设计三条干扰序列,构建以miRNA为基础的RNA干扰病毒载体.在293FT细胞中包装病毒液,并转染原代成纤维细胞,通过定量PCR和western blot检测干扰效率.结果 两个基因的1号序列都能有效干扰相应基因表达,POLG下调了75%,而TFAM下调了85%.结论 慢病毒介导的miRNA为基础的干扰病毒载体成功干扰了TFAM和POLG基因的表达.
关键词： RNA干扰 慢病毒 线粒体转录因子A 线粒体DNA特异性聚合酶G -
线粒体转录复合物相关蛋白原核表达与纯化
目的 获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.方法 设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入E.coli BL21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定.结果 获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致.SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56000、67000、69000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白.结论 成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白.
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糖尿病小鼠心肌组织中线粒体转录因子A的表达
目的 观察db/db糖尿病小鼠与正常小鼠心肌组织中线粒体转录因子A(TFAM)的表达水平. 方法 9只雄性db/db糖尿病小鼠,随机分为6周组(db/db 6 week),12周组(db/db 12 week),18周组(db/db 18 week);正常雄性小鼠9只,随机分为6周组(wt6 week),12周组(wt 12 week),18周组(wt 18 week),每组3只.分别用实时定量PCR、Western blot法检测心肌组织中TFAM的表达.利用实时定量PCR检测心肌组织中线粒体拷贝数. 结果 db/db糖尿病小鼠TFAM的表达及线粒体拷贝数低于正常组,且随年龄的增长表达逐渐降低,同时研究还发现,db/db小鼠心肌组织中心肌组织ATP的生成明显低于正常组水平,且随着周龄的增长,ATP的生成逐渐降低. 结论 糖尿病小鼠心肌组织中TFAM表达进行性降低.
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乙醇通过干预PGC-1α表达水平调节AC16心肌细胞线粒体生成
目的：探究不同浓度乙醇干预下AC16心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC?1α）及其下游蛋白核呼吸因子1（NRF?1）、线粒体转录因子A（TFAM）表达水平的变化以及心肌细胞线粒体结构功能的改变。方法应用MTT法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞线粒体膜电位改变，电镜下观察细胞超微结构改变，应用实时定量PCR、Western blotting技术分别在基因及蛋白水平检测细胞PGC?1α、NRF?1、TFAM表达水平的变化。结果低浓度乙醇组（50 mmol/L）线粒体数量增加，线粒体膜电位升高，PGC?1α、NRF?1、TFAM表达上调；高浓度乙醇组（200 mmol/L）线粒体数量减少、畸变，线粒体膜电位下降， PGC?1α、NRF?1、TFAM表达下调。结论乙醇对心血管疾病的影响主要是通过调节心肌细胞中PGC?1α、NRF?1、TFAM表达水平从而影响心肌细胞线粒体生成实现的。
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线粒体转录因子A在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系
线粒体转录因子A(TFAM)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达鲜有报道.本研究通过免疫组化方法检测TFAM在70例NSCLC中的表达情况,并进行Kaplan-Meier生存分析.结果提示TFAM高表达与NSCLC淋巴结转移相关,且可以作为1个生物学标记用于预测肿瘤的预后,为NSCLC的治疗提供了新的思路.
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氡暴露致小鼠肺组织线粒体转录因子A及核因子-κB表达的改变
[目的]观察氡对小鼠肺组织线粒体转录因子A(TFAM)及核因子(NF)-κB表达的影响,为探讨氡致肺损伤的机制提供实验依据. [方法] 20只健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组及3个染氡组,每组5只,染氡组氡暴露剂量分别为30、60、120工作水平月.末次染毒后lh内处死小鼠,取肺组织进行HE染色以及TFAM和NF-κB p65免疫组化染色,Western blot检测肺组织中TFAM和NF-κB p65的蛋白表达. [结果]免疫组化结果显示,染氡后TFAM、NF-κB p65阳性细胞数显著增加,其中120工作水平月组的TFAM和NF-1B p65阳性细胞率[(0.521±0.081)％、(0.260±0.068)％]高于对照组[(0.093±0.011)％、(0.069士0.016)％,P＜0.05],Western blot结果显示其蛋白表达也显著上升.[结论]氡暴露小鼠肺组织中TFAM和NF-κB的表达上调,提示NF-κB的信号通路被激活.
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γ-synuclein及mtTFA在子宫内膜癌中的表达及临床意义
目的：检测乳腺癌特异性基因1(γ-synuclein)与线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A, mtTFA)在不同子宫内膜组织中的表达，探讨其与子宫内膜癌发生、发展和侵袭转移的关系。方法：采用S-P免疫组化法检测γ-synuclein与mtTFA在子宫内膜癌组织、非典型增生子宫内膜组织中的表达情况，同时选择16例正常子宫内膜组织作为对照。结果：γ-synuclein和mtTFA在子宫内膜癌组织中的阳性表达率均明显高于非典型增生子宫内膜组织和正常子宫内膜组织，差异有统计学意义(P＜0.05)。γ-synuclein和mtTFA在子宫内膜癌组织中的表达与不同临床-病理分期、肌层浸润深度及淋巴结有无转移均有明显相关性，且差异有统计意义(P＜0.05)。结论：γ-synuclein和mtTFA的表达与子宫内膜癌的发生、发展及侵袭转移有关，可能成为子宫内膜癌的临床诊断、治疗及预后评估的新指标。
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线粒体转录因子A在肿瘤细胞中的作用
线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factorA ,TFAM或mTFA)是由核基因编码的高迁移率族类蛋白因子,定位于线粒体内.TFAM是影响线粒体DNA (mtDNA)复制和转录的重要调节因子.近年来许多研究已表明,TFAM基因表达水平与多种肿瘤相关.全文介绍了近年来国内外关于TFAM与多种类型肿瘤的发生、发展及预后关系的研究进展.提示TFAM可作为潜在的生物标志物用于预测肿瘤的发生及预后,也可以作为肿瘤治疗的可能靶点,为肿瘤治疗提供新的思路.
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膝眼穴针灸对大鼠膝关节软骨细胞表型以及PGC-1α信号通路的影响
目的 研究膝眼穴针灸疗法对膝关节软骨细胞表型改变及其参与线粒体生成氧自由基(ROS)的过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子1α(PGC-1α)信号通路变化的影响.方法 通过免疫组化技术检测膝眼穴针灸后大鼠膝关节软骨细胞表型的主要特征分子指标 (col 1、col 2、aggrecan)以及 PGC-1α、线粒体转录因子A(TFAM)、解耦联蛋白2(UCP 2)和NADPH氧化酶1/4(NOX 1/4)因子的表达变化.进一步检测向大鼠膝关节腔内注射ZN005L(PGC-1α激活剂)激活PGC-1α表达后大鼠软骨细胞表型特征分子指标的表达变化,以及软骨细胞内ROS生成量的改变.结果 对大鼠进行膝眼穴针灸后,PGC-1α表达增加;UCP 2以及软骨细胞表型主要指标aggrecan表达下降.激活PGC-1α表达后,软骨细胞内ROS的生成量降低,并且软骨细胞表型丢失现象被抑制.结论 膝眼穴针灸疗法不能改善大鼠膝关节软骨细胞的功能,相反会促进软骨细胞表型特征分子的丢失,并损害软骨细胞功能.
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柠檬酸合成酶对卵巢癌线粒体DNA相对拷贝数的影响
目的:探讨柠檬酸合成酶(CS)对卵巢癌线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数的影响.方法:Real-time PCR法检测卵巢良性肿瘤组织、卵巢癌组织及人正常卵巢上皮细胞(HOSE)和卵巢癌细胞株SKOV3、A2780中CS mRNA水平,Western blot法检测标本中CS蛋白水平.siRNA干扰SKOV3和A2780中CS表达,Real-time PCR检测干扰前后mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和线粒体转录因子A(TFAM)的变化,Western blot法检测p-ERK和p-p38水平.结果:卵巢癌组织中CS、mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和TFAM水平高于良性卵巢肿瘤组织;SKOV3和A2780细胞株中CS高于正常卵巢上皮细胞.siRNA干扰SKOV3、A2780中CS后,mtDNA相对拷贝数和TFAM水平降低,p-ERK和p-p38也降低.结论:CS在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中呈高表达,其水平影响卵巢癌细胞中mtDNA相对拷贝数,其机制可能与ERK/p38通路相关.
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粟米草皂甙对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制探讨
目的 观察粟米草皂甙对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,并探讨其机制.方法 将原代培养大鼠胸主动脉VSMCs分为两组,观察组加入不同浓度(1、3、9、27 μmol /L)粟米草皂甙,对照组加入等体积稀释后的DMSO培养24、48、72 h.采用MTT法检测VSMCs的增殖抑制率,采用RT-PCR法检测VSMCs中的线粒体转录因子A(mtTFA)mRNA.结果 与对照组比较,观察组VSMCs增殖抑制率明显升高(P均＜0.05),mtTFA mRNA表达下降(P均＜0.05),且呈一定浓度、时间依赖性.结论 粟米草皂甙对大鼠VSMCs细胞增殖有显著的抑制作用,其机制可能与下调mtTFA mRNA表达有关.
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线粒体转录因子A在肾细胞癌中的表达
目的 检测线粒体转录因子A (TFAM)在肾细胞癌中的表达,探讨其与肾细胞癌发生发展的关系.方法 选取2009年1月至2010年6月在我院行肾细胞癌手术患者97例.采用免疫组织化方法对肾细胞癌及癌旁组织中TFAM蛋白的表达进行检测,观察TFAM的表达与肾细胞癌病理分级、临床分期、淋巴结转移及预后的关系.结果 TFAM在肾细胞癌中的表达率(38.1％)明显高于癌旁组织(5.0％),差异有统计学意义(P＜0.01).TFAM蛋白异常表达与肾细胞癌临床分期、病理分级、淋巴结转移有关,即肾细胞癌临床分期越高、病理分级越高、淋巴结转移时,TFAM表达越明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TFAM的表达异常可能是肾细胞癌发生发展的分子机制之一.
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MicroRNA-200a/TFAM通路调控紫杉醇对乳腺癌细胞的化疗敏感性
目的 探讨MicroRNA-200a/TFAM在MCF-7细胞对紫杉醇化疗敏感性中的作用.方法 分别采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测不同浓度紫杉醇处理MCF-7细胞后miR-200a、TFAM蛋白的表达差异;转染miR-200a(或anti-miR-200a)联合紫杉醇处理MCF-7细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)观察细胞增殖活力的变化;转染pcDNA3.1-TFAM质粒联合紫杉醇处理MCF-7细胞后,MTT和BrdU法检测细胞增殖活力的变化.结果 在MCF-7细胞中,miR-200a的表达量随紫杉醇浓度增加逐渐升高,而TFAM的表达量随紫杉醇浓度升高逐渐下降.紫杉醇与miR-200a共同作用于MCF-7细胞,可增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;紫杉醇与anti-miR-200a共同作用于MCF-7细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;而紫杉醇与TFAM共同孵育MCF-7细胞时,可减弱紫杉醇对细胞增殖的抑制作用.结论 miR-200a及TFAM参与调控紫杉醇对MCF-7细胞的化疗敏感性.
关键词： 乳腺癌 microRNA-200a 线粒体转录因子A 紫杉醇 -
线粒体转录因子A与神经系统疾病关系的研究进展
线粒体转录因子A(TFAM)是由核基因编码的一种多功能的线粒体mtDNA蛋白,在线粒体拟核中与mtDNA结合,广泛参与mtDNA转录,复制和损失修复,维持线粒体的稳定.线粒体功能障碍是包括帕金森病、阿尔茨海默病在内的多种神经变性疾病的特点,TFAM基因突变和蛋白水平的变化在疾病中起重要作用.本文总结了国内外学者针对TFAM及与其相关的神经系统疾病新研究进展.
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线粒体转录因子A在子宫内膜癌中的表达与意义
目的 检测线粒体转录因子A(mtTFA)基因及蛋白在不同子宫内膜组织中的表达,探讨其与子宫内膜癌发生发展的关系.方法 采用RT-PCR方法,对36例子宫内膜癌组织,11例非典型增生子宫内膜组织和20例正常子宫内膜组织中的mtTFA mRNA的表达进行检测.同时采用S-P免疫组化方法,对41例子宫内膜癌组织,23例非典型增生子宫内膜组织和21例正常子宫内膜组织中的mtTFA蛋白的表达进行检测.结果 mtTFA在子宫内膜癌组织中的表达明显高于非典型增生子宫内膜及正常子宫内膜组织,差异具有显著性(P＜0.05),且从正常内膜组织到非典型增生子宫内膜组织,再到子宫内膜癌组织其表达有上升趋势.mtTFA蛋白的表达与子宫内膜癌的病理分级,临床分期,肌层浸润,淋巴结转移有关(均P＜0.05).mtTFA的表达与雌激素受体(ER)的表达有明显相关性,其差异有显著性(P＜005).结论 mtTFA的表达异常可能是子宫内膜癌发生发展的分子机制之一,有望成为反映子宫内膜癌生物学行为的一项指标.因其与ER受体相关,可能为雌激素依赖性子宫内膜样腺癌的治疗提供新的靶点.
关键词： 子宫内膜癌 线粒体转录因子A 逆转录-聚合酶链反应 免疫组化
