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柠檬酸合成酶对卵巢癌线粒体DNA相对拷贝数的影响
目的:探讨柠檬酸合成酶(CS)对卵巢癌线粒体DNA(mtDNA)相对拷贝数的影响.方法:Real-time PCR法检测卵巢良性肿瘤组织、卵巢癌组织及人正常卵巢上皮细胞(HOSE)和卵巢癌细胞株SKOV3、A2780中CS mRNA水平,Western blot法检测标本中CS蛋白水平.siRNA干扰SKOV3和A2780中CS表达,Real-time PCR检测干扰前后mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和线粒体转录因子A(TFAM)的变化,Western blot法检测p-ERK和p-p38水平.结果:卵巢癌组织中CS、mtDNA相对拷贝数(mtND2/HBB)和TFAM水平高于良性卵巢肿瘤组织;SKOV3和A2780细胞株中CS高于正常卵巢上皮细胞.siRNA干扰SKOV3、A2780中CS后,mtDNA相对拷贝数和TFAM水平降低,p-ERK和p-p38也降低.结论:CS在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中呈高表达,其水平影响卵巢癌细胞中mtDNA相对拷贝数,其机制可能与ERK/p38通路相关.
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基因沉默缺氧诱导因子-1α对BxPC-3细胞株糖酵解基因表达的影响
目的 观察沉默缺氧诱导因子(HIF)-1α基因表达对于缺氧微环境下人胰腺癌BxPC-3细胞株中糖酵解相关基因表达的影响.方法 通过合成小于扰RNA((siRNA))转染沉默BxPC-3细胞株中HIF-1α基因表达.将细胞分为空白对照组(BxPC-3)、空白质粒转染对照组(GFP)和HIF-1α基因沉默组(sh-HIF-1α),分别在正常环境(21.0％O2)和缺氧环境(0.5％～1.0％ O2)中培养48 h后,检测各组细胞中糖酵解相关基因[如丙酮酸激酶1(PDK-1)、乳酸脱氢酶A(LDH-A)和柠檬酸合成酶(CS)]的表达以及细胞糖酵解产物乳酸含量的改变.结果 与正常环境比较,缺氧培养后sh-HIF-1α组细胞内HIF-1αmRNA增加了12.4％,蛋白增加了1.6倍,显著低于BxPC-3组和GFP组(P＜0.05),PDK-1和LDH-A的表达也明显低于两个对照组(P＜0.05).相应的sh-HIF-1α组的乳酸含量为(4.8 ±0.3)nmol/106个细胞,明显低于BxPC-3组(9.1±0.5)nmol/106个细胞和GFP组(9.2±0.5) nmol/106个细胞(P＜0.05).相反,缺氧时BxPC-3组和GFP组细胞中与线粒体氧化磷酸化相关的CS基因表达明显下降,低于其在sh-HIF-1α组细胞中的表达(P＜0.05).结论 缺氧可以诱导BxPC-3细胞株中HIF-1α基因高表达并促进糖酵解相关的PDK-1和LDH-A等基因表达.而通过沉默HIF-1α基因,可以抑制上述基因的表达,并促进CS基因表达,从而抑制肿瘤细胞的糖酵解代谢.
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柠檬酸合成酶在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 研究柠檬酸合成酶(CS)在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达,分析其表达与临床病理特征的关系.方法 通过蛋白质免疫印迹技术检测乳腺癌组织与癌旁组织中的CS蛋白表达水平,免疫组化技术检测乳腺癌组织芯片中的CS表达情况,分析CS的表达水平与临床病理特征的关系,分析Cancer Genome Atlas (TCGA)数据库中CS的表达水平与乳腺癌患者生存期的关系.结果 乳腺癌患者组织中CS蛋白表达显著上调(P=0.028),CS蛋白表达与乳腺癌的组织学分级(P=0.035)、临床分期(P＜0.001)、是否淋巴结转移(P＜0.001)相关,CS高表达的乳腺癌患者的生存率显著降低(P=0.007).结论 CS在乳腺癌组织中表达上调,与乳腺癌的进展与临床预后相关,有望成为乳腺癌新的生物标记物.
