首页 > 文献资料
-
SIRT1-NF-κB通路在流感病毒感染小鼠体内调节机制的研究
目的 探讨巨噬细胞SIRT1-NF-κB信号转导途径在流感病毒感染小鼠体内的调节机制.方法 用流感病毒血凝素蛋白(HA)和核衣壳蛋白(NP)蛋白免疫小鼠,取小鼠腹腔巨噬细胞,采用ELISA法检测细胞培养上清中促炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;采用实时荧光定量PCR检测细胞内沉默信息调节因子1(SIRT1)、NF-κB、IL-1β、IL-6、IL-18以及TNF-α的基因表达.结果 两组蛋白初次免疫后巨噬细胞分泌的各因子及其mRNA表达水平均无明显变化.二次免疫后,HA蛋白组仅TNF-α、IL-6蛋白表达水平增加,与对照组比较差异有统计学意义,NP蛋白组IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α蛋白表达水平均增加,与对照组比较差异均有统计学意义;而两组蛋白刺激后巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA均表达上调,SIRT1 mRNA均表达下调,与对照组比较差异有统计学意义.结论 流感病毒可能通过所表达的HA、NP等蛋白影响SIRT1的活性,从而解除SIRT1对NF-κB的抑制作用,激活NF-κB信号通路调节的炎症反应或免疫应答.
-
白藜芦醇通过上调沉默信息调节因子1调节香烟提取物诱导心肌线粒体产生活性氧簇的机制
目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)调节香烟提取物(CSE)诱导心肌线粒体产生活性氧簇(ROS)的机制及白藜芦醇(Res)心肌保护作用.方法 H9C2细胞分5组:C组(对照组)、二甲亚砜组(DMSO溶剂对照组)、CSE组(CSE刺激组)、CSE+Res组、Res组.采用Taqman探针荧光定量PCR检测各组SIRTI的mRNA表达、Weston Blot检测各组细胞SIRTI蛋白表达、荧光分光光度计检测细胞线粒体膜电位、荧光微量平板法检测不同浓度CSE刺激H9C2细胞产生ROS的变化、特异性荧光探针CMH2DCFDA检测活细胞内ROS变化.结果 与C组相比,CSE红SIRT1mRNA及蛋白质表达显著降低,ROS表达显著增强.与CSE组相比,CSE+Res组SIRT1mRNA及蛋白质表达升高,ROS表达显著减少.随CSE刺激浓度增加,线粒体膜电位降低,ROS产生增加.提前给予Res可使线粒体膜电位升高,ROS产生减少.结论 Res可通过刺激SIRT1的表达而抑制CSE诱导的心肌细胞线粒体功能受损、ROS的释放,这可能是其吸烟相关慢性阻塞性肺疾病诱导的心脏氧化应激损伤中发挥心脏保护作用的机制之一.
-
SIRT1、SIRT1SNP与年龄相关性疾病研究进展
单核苷酸多态性(SNPs)指在基因水平上由单个核苷酸变异所引起的DNA序列多态性,是人类可遗传变异中常见的一种,是人类基因组中广泛而稳定分布的多态性位点.随着人类基因组计划的完成,人类基因组单体型图(Haplotype map,简称Hapmap)计划的开展,SNP与复杂的多基因疾病(如心血管疾病、糖尿病等年龄相关疾病)的关联性研究逐渐成为热点,这其中也包括沉默信息调节因子l(silent information regulator l,SIRT1)[1].人类SIRT1基因发现于1999年,该基因定位于人类染色体10q21.3,基因组序列长度(在69644427～ 69678147)约为33.72 kb,cDNA序列包含长约2.4 kb的开放阅读序列,有9个外显子,编码747个氨基酸,翻译后蛋白质相对分子量约81.7 kDa[2].SIRT1基因编码蛋白质是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖的蛋白去乙酰化酶,属于人类Sirtuin蛋白家族,从古细菌到人类各物种均具有高度保守性,几乎存在于机体所有类型细胞中[3].
-
SIRT1和APOC3基因单核苷酸多态性与非酒精性脂肪性肝病的相关性
目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)基因rs12778366位点和载脂蛋白C3(APOC3)基因rs2854116位点单核苷酸多态性(SNP)与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病易感性的关系.方法 数据源于2015年苏州市相城区医院体检人群,共收集病例560人,根据B超结果,筛选纳入NAFLD病例132例,随机选取正常对照人群252例,采集血液样本,分析总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和血尿酸的血生化指标,及身高、体重、腰围、臀围、血压一般指标,全血中提取DNA,采用聚合酶链反应(PCR)、MassARRAY时间飞行质谱技术分析SIRTl rs12778366和APOC3rs2854116位点基因型.结果 SIRTl rs12778366位点TC +CC基因型携带者相对于TT基因型携带者,发生NAFLD的OR=1.126(95％ CI0.673 ～1.886),P＞0.05.与APOC3 rs2854116位点CC基因型携带者相比较,TC+TT基因型携带者发生NAFLD的OR=1.044(95％ CI0.601～1.814),P＞0.05.校正性别、年龄、体质指数的混杂因素后OR均无明显改变(P＞0.05).多因素Logistic回归分析显示:甘油三酯、体质指数、空腹血糖、腰围和尿酸是NAFLD发病可能的独立危险因素(P＜0.05),而SIRTl rs12778366和APOC3 rs2854116位点基因多态性与NAFLD的发病风险无明显关联.结论 SIRT1 rs12778366和APOC3 rs2854116位点基因多态性与NAFLD的发生无明显相关性,均不会影响NAFLD的发病风险.
-
SIRT1抑制细菌脂多糖耐受THP-1细胞中IL-1βmRNA的转录
目的 研究细菌脂多糖(LPS)耐受的THP-1细胞中沉默信息调节因子1(SIRTI)对IL-1β转录的调节作用.方法 使用LPS耐受的人单核细胞THP-1模型,染色体免疫沉淀和real-time PCR定量研究1L-1β启动子区SIRT1结合情况和组蛋白H3lys9/H4lys16的乙酰化情况.结果 在LPS耐受的THP-1细胞中,SIRTI对IL-1β启动子区的结合增加约5倍左右(P<0 05).同时伴随着组蛋白H3 lys9/H4 lys16乙酰化的低水平状态(与正常细胞相比P<0.05).SIRT1沉默使IL-1β的转录恢复到正常细胞的68%(P<0 05),同时伴随着组蛋白H3 lys9/H4lys 16乙酰化的增加(P<0.05).然而,正常细胞和耐受细胞p65 lys310乙酰化水平无明显差异.结论 SIRT1抑制LPS耐受的THP-1细胞中IL-113mRNA的转录,其作用与p65 lys310乙酰化无关,但是与IL-1β启动子区乙酰化有关.
-
血腑逐瘀胶囊对缺血心肌细胞SIRT1信号转导通路的干预作用
目的:观察血腑逐瘀胶囊对大鼠缺血心肌细胞Sirt1信号通路的干预作用,探讨该中药复方的作用机制.方法:将70只健康成年雌性Wistar大鼠随机分成正常组,假手术组(以蒸馏水10 mL·kg-1灌胃),模型组(以蒸馏水10 mL·kg-1灌胃),血腑逐瘀高、中、低剂量组(0.03,0.02,0.01 g·kg-1),L-NAME组(按2 mg/只腹腔注射),采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测各组心肌组织沉默信息调节因子1(Sirt1),p53及核转录因子-κB (NF-κB) mRNA表达情况.结果:与假手术组比较,模型组缺血心肌细胞Sirt1 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),缺血心肌细胞p53,NF-κB mRNA表达水平增高(P＜0.05);与模型组比较,血腑逐瘀高、中、低剂量组大鼠缺血心肌细胞Sirt1 mRNA表达水平明显增高(P＜0.05),血腑逐瘀高剂量组大鼠缺血心肌细胞p53,NF-κB mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).结论:血腑逐瘀胶囊可延长缺血心肌细胞寿命,其机制可能是通过激活Sirt1信号通路,抑制p53,NF-κB基因的表达而发挥作用.
-
二陈汤加味对COPD患者缺氧诱导因子-1α及沉默信息调节因子1的影响
目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的肺功能、氧化应激、缺氧诱导因子-1α(Hif-1α)及沉默信息调节因子1(Sirt1)的影响,评价二陈汤加味对COPD患者抗氧化损伤及抗炎的作用与机制.方法:选取符合纳入标准的急性加重期和稳定期COPD患者各120例,各期分成对照组和治疗组.各组均在西药治疗的基础上,治疗组给予二陈汤加味,疗程14 d.检测肺功能,测定血液酸碱度(pH),氧分压(PaO2),二氧化碳分压(PCO2),氧饱和度(SaO2).紫外分光光度计检测血清还原型谷胱甘肽(GSH),超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆白细胞介素(interleukin)-6,IL-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)含量,实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Hif-1α和Sirt1 mRNA表达,ELISA法测定PBMCs中HIf-1α和Sirt1含量,荧光酶联免疫吸附法测定PBMCs中Sirt1活性.结果:急性加重期和稳定期治疗后,与对照组比较,治疗组1 s用力呼气容积(FEV1),1 s用力呼气量/用力肺活量(FVC)均显著增大(P＜0.01),治疗组总有效率明显高于对照组(P＜0.05),治疗组PaO2,SaO2均显著增加,PCO2显著降低(P＜0.01),SOD,GSH-Px活性均显著升高(P＜0.01),MDA含量显著降低(P＜0.01),治疗组PBMCs中Sirt1 mRNA表达,Sirt1含量及其活性均明显增加(P＜0.05,P＜0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α,CRP,Hif-1α含量,Hif-1α mRNA表达均明显降低(P＜0.05).结论:二陈汤加味对COPD有抗氧化损伤、抗炎作用.其机制可能为增强Sirt1基因的表达,提高Sirt1活性,抑制Hif-1α mRNA表达,减少IL-1β,IL-6,TNF-α,CRP合成与释放,以保护肺组织、改善肺功能.
-
胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT1/PGC-1α通路的影响
目的:观察胡柚皮黄酮(PTFC)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝组织脂肪变、炎症程度、氧化应激水平及SIRT1,PGC-1α表达的影响,探讨PTFC防治NASH的作用机制.方法:以高脂饮食喂养16周诱导小鼠NASH模型,于造模第7周起以100,50,25 mg·kg-·d-1的PTFC干预10周,HE染色观察肝组织病理学变化,生化法检测肝组织TG,CHOL含量和血清ALT,AST水平;Real-time PCR法检测肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA表达;免疫组织化学法检测肝组织SIRT1,PGC-1α蛋白及8-OHdG表达;黄嘌呤氧化酶法检测肝组织SOD水平;硫代巴比妥酸法检测肝组织MDA含量.结果:高脂饮食诱导的NASH模型组小鼠肝组织TG,CHOL水平、NAFLD活动度积分、血清ALT较正常组显著增高(P＜0.01),肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较正常组显著降低(P＜0.01),肝组织8-OHdG表达和MDA含量较正常组明显增高(P＜0.01);不同剂量PTFC干预后小鼠肝组织的NAFLD活动度积分、TG水平、血清AST较模型组显著降低(P＜0.01,P＜0.05),肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较模型组明显增高(P ＜0.01,P＜0.05),8-OHdG表达和MDA含量较模型组明显减少(P＜0.01).结论:高脂饮食诱导小鼠NASH氧化应激/脂质过氧化增强可能与SIRT1/PGC-1α信号转导通路的改变有关;PTFC能通过调节SIRT1/PGC-1α信号通路,增强肝脏抗氧化能力,减少脂肪酸代谢过程中活性氧的损伤,防治NASH的发生发展.
-
标本配穴电针对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及骨骼肌SIRT1蛋白表达的影响
目的 观察标本配穴电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感性及骨骼肌沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达的影响. 方法 Wistar大鼠40只,其中24只采用高脂饲料喂养建立IR大鼠模型,其余16只予普饲喂养.将16只IR大鼠随机分为模型对照组8只、电针刺激组(针刺关元、足三里、中脘和丰隆穴,每天左右交替)8只,另8只普饲喂养大鼠为正常对照组.电针刺激6周和7周后,分别检测各组大鼠腹腔糖耐量(IPGT)和腹腔胰岛素耐量(IPIT).电针刺激8周后称重,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PPG)、股四头肌SIRT1蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,模型对照组大鼠IPIT升高、股四头肌SIRT1蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较,电针刺激组大鼠体重减轻、IPIT显著降低、股四头肌SIRT1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01). 结论 标本配穴电针能减轻IR大鼠体重、增强胰岛素敏感性,提高股四头肌SIRT1蛋白表达水平可能是其改善IR的重要机制之一.
-
沉默信息调节因子1(SIRT1)在前列腺癌恶性生物学表型中的作用
目的 观察SIRT1在前列腺癌组织和细胞中的表达,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的作用.方法 收集辽宁医学院附属第一医院手术切除的8例成对前列腺癌组织和癌旁组织随机分组,体外培养PrEC、LNCap、PC3和DU145细胞,real-time PCR和Western blot法检测SIRT1和P53在前列腺癌组织和细胞中mRNA和蛋白表达.提取细胞系中总蛋白、浆蛋白和核蛋白,Western blot法检测PC3和DU145细胞中SIRT1和P53的蛋白表达和定位.结果 前列腺癌组织中,SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜0.O1);LNCap、PC3和DU145细胞中SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于PrEC细胞(P ＜0.01);PC3和DU145细胞系SIRT1蛋白表达明显高于胞质(P＜0.01).结论 SIRT1可能通过P53不同方式促进前列腺癌发生,为探讨SIRT1在前列腺癌恶性生物学表型中的作用和机制奠定基础.
-
沉默信息调节因子1在神经退行性疾病中的作用
沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)作为NAD+依赖的脱乙酰基酶,通过对组蛋白及多种非组蛋白的去乙酰化修饰,参与基因转录、能量代谢以及细胞衰老过程的调节.近年研究发现,SIRT1具有明显的神经保护作用.本文拟对SIRT1在几种常见神经退行性疾病中的保护作用作一综述.
-
低氧后处理对全脑缺血大鼠认知功能及海马CA1区沉默信息调节因子1表达的影响
目的：观察低氧后处理对全脑缺血大鼠认知功能及海马CA1区沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法成年健康Sprague-Dawley大鼠60只，随机分为假手术组、模型组和低氧后处理组，每组20只。各组根据缺血再灌注的时间分为1 d、2 d、3 d、7 d四个亚组，每个亚组5只。采用改良Pulsinelli四血管闭塞法制备全缺血再灌注大鼠模型，低氧后处理组在缺血后给予8%低氧2 h处理。Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能，光镜下观察海马CA1区神经细胞形态变化及存活神经细胞数量，免疫组织化学法、Western blotting检测海马区SIRT1表达。结果与模型组相比，低氧后处理组逃避潜伏期缩短(P<0.05)，穿越平台次数增加(P<0.05)，探索速度、平台象限路程百分比增加(P<0.05)，探索路程缩短(P<0.05)；海马区神经细胞损伤较轻，存活神经元细胞增加(P<0.05)；相应各时间点SIRT1表达升高(P<0.05)。结论低氧后处理能够改善全脑脑缺血大鼠的认知功能，其机制与低氧后处理提高海马组织中SIRT1蛋白表达水平有关。
-
SIRT1与INS/IGF-1通路的关系及对NIT-1细胞胰岛素分泌的影响
目的 探讨哺乳动物沉默信息调节因子沉默信息调节因子1(SIRT1)与胰岛素/胰岛素样生长因子(INS/IGF-1)通路的关系,观察SIRT1的表达是否可通过INS/IGF-1通路并影响胰岛素瘤细胞(NIT-1细胞)的胰岛素分泌,为2型糖尿病发病机制提供新的实验依据.方法 利用SIRT1激活剂白藜芦醇(RE)和抑制剂尼克酰胺(NIC)分别对NIT-1细胞进行刺激,应用RT-PCR免疫细胞化学方法检测INS/IGF-1通路主要因子PI3K、AKT、FOXO1的mRNA及蛋白表达水平;放射免疫、免疫细胞化学、RT-PCR检测NIT-1细胞胰岛素分泌及表达量的变化,细胞计数法检测细胞倍增时间的变化.结果 SIRT1激活剂和抑制剂分别使SIRT1在mRNA水平上出现高、低表达的同时影响了NIT-1细胞的胰岛素分泌量,并影响了INS/IGF-1通路主要因子PI3K、AKT的表达,但对FOXO1的影响,SIRT1的高表达并没有使其产生变化,提示SIRT1影响NIT-1胰岛素分泌通路的复杂性.结论 SIRT1可以通过调控INS/IGF-1通路,进而影响NIT-1细胞胰岛素分泌.
-
白藜芦醇通过沉默信息调节因子1保护造影剂急性肾损伤
目的 观察白藜芦醇对造影剂急性肾损伤(CI-AKI)的作用并探讨其机制.方法 清洁级健康SD大鼠32只,雌雄各半,体质量(230±15)g,随机分为对照组、单纯白藜芦醇组(RES组)、CI-AKI模型组(CI-AKI组)、白藜芦醇预处理+CI-AKI模型组(RES+CFAKI组),每组8只.通过颈外静脉置管序贯注射吲哚美辛、左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME)、碘普罗胺制作CI-AKI大鼠模型,RES+ CFAKI组在造模前30 min经腹腔注射给予白藜芦醇(25mg/kg)干预.造模后将大鼠放入代谢笼饲养,收集24 h尿液,24 h后处死大鼠,测定血清肌酐、血尿素氮、肌酐清除率,HE染色观察肾脏病理改变并进行肾小管损伤半定量评分.测定肾组织中丙二醛水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况,Western blot检测各组大鼠肾组织cleaved caspase-3,totalcaspase-3,沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达的变化.结果 白藜芦醇预处理能够显著改善CFAKI大鼠肾功能,明显降低血清肌酐、血尿素氮水平,提高肌酐清除率[血清肌酐:RES+CI-AKI组(48.52±6.46)比CI-AKI组(96.66±8.41)μmol/L;血尿素氮:RES+CI-AKI组(16.21±3.34)比CFAKI组(26.48±4.25)mmol/L;肌酐清除率:RES+ CI-AKI组(1.20±0.18)比CI-AKI组(0.46±0.10)mL/min;均P＜0.05],减轻肾脏病理损伤,减少肾组织细胞凋亡和cleaved caspase-3表达[TUNEL阳性细胞数:RES+CI-AKI组(13.50±4.50)比CI-AKI组(38.33±5.78)个/400×视野;cleaved casepase-3/total casepase-3:RES+CI-AKI 1.12±0.04比CI-AKI组1.70±0.10;均P＜0.05],提高SOD活性、降低丙二醛含量[SOD:RES+CI-AKI组(6.26±0.20)比CI-AKI组(4.38±0.54)U/mg pro;丙二醛:RES+ CFAKI组(47.63土4.69)比CI-AKI组(72.40±16.08)nmol/mg pro;均P＜0.05],提高SIRT1蛋白表达(SIRT1/GAPDH:RES+ CI-AKI组1.15±0.06比CI-AKI组0.61±0.08,P＜0.05).结论 白藜芦醇预处理能够通过上调肾脏SIRT1蛋白表达、减少肾小管细胞凋亡、抑制肾脏氧化应激作用保护CI-AKI.
-
沉默信息调节因子1对高糖诱导的系膜细胞内皮素-1和转化生长因子β1的影响
目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的系膜细胞内皮素-1(ET-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响. 方法 体外培养系膜细胞分为:(1)高糖组(高糖培养液);(2) SIRT1激动剂(白藜芦醇)+高糖组,含1μmol/L白藜芦醇的高糖培养液;(3)SIRT1 RNAi干扰+高糖组,加入pTRC-shSIRT1慢病毒感染;(4)正常对照(NC)组.检测各组细胞SIRT1基因表达,以及ET-1和TGF-β1水平. 结果 高糖组、SIRT1激动剂+高糖组、SIRT1 RNAi干扰+高糖组及NC组ET-1含量分别为(56.1±6.3)、(31.9±5.1)、(105.63±8.2)和(17.3±3.4) pg/ml;TGF-β1含量分别为(43.3±5.7)、(27.5±4.9)、(87.4±7.3)和(15.6±3.6)ng/ml.高糖抑制SIRT1表达,上调ET-1和TGF-β1表达(P＜0.05);SIRT1激动剂可改善高糖对SIRT1的抑制,下调ET-1和TGF-β1表达(P＜0.05);沉默SIRT1,可上调ET-1和TGF-β1表达(P＜0.05). 结论 SIRT1基因对高糖诱导的系膜细胞ET-1和TGF-β1可能起负调控作用.
-
沉默信息调节因子1对早期2型糖尿病大鼠脂联素的调节作用
目的 检测脂联素水平及沉默信息调节因子1(SIRT1)在早期糖尿病(DM)大鼠肝脏组织中的表达变化,探究SIRT1对脂联素的调控作用.方法 Sprague-Dawley大鼠42只,分为4组:正常对照组(n=10)、DM组(n=10)、DM+白藜芦醇(RES)组(n=11)和DM+尼克酰胺(NIA)组(n=11).高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型DM大鼠模型.进行基础代谢和血清学检测,HE染色法观察肝脏病理结构变化,酶联免疫吸附试验( ELISA)试剂盒检测血清脂联素水平;Western blotting和逆转录-聚合酶链反应法检测肝组织SIRT1和脂联素受体(AdipoR)等表达变化.采用SPSS 19.0软件进行数据处理.组间比较采用方差分析及t检验.结果 与DM组相比,空腹血糖(FBG)在DM+RES组显著降低(P＜0.05);总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在DM+RES组显著降低(P＜0.01),在DM+NIA组显著升高(P＜0.05);甘油三酯(TG)在DM+RES组显著降低(P＜0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)在DM+RES组显著升高(P＜0.01).与DM组相比较, DM+RES组的脂联素水平略有升高(P＞0.05),DM+NIA组血清脂联素水平显著降低(P＜0.05).显微镜下,DM组大鼠肝脏可见不同程度炎细胞浸润、甚至变性,DM+RES组大鼠肝脏脂肪变性减轻,DM+NIA组大鼠肝脏肝细胞散在小泡性脂滴.与DM组相比较,DM+RES组AdipoR2和SIRT1蛋白表达显著增加(均P＜0.05),WISP-1蛋白表达显著降低(P＜0.05),而DM+NIA组AdipoR2和SIRT1蛋白表达显著降低.与DM组比较,AdipoR2和SIRT1 mRNA在DM+RES组表达显著增加(P＜0.01),WISP-1 mRNA表达显著降低(P＜0.01);而DM+NIA组AdipoR2表达显著降低(P＜0.05).结论 在早期DM肝损伤的发生发展过程中,SIRT1信号分子可能通过调节AdipoR的表达来调控脂联素的水平,参与DM内分泌系统的病理生理演变.
-
沉默信息调节因子1在心肌缺血中的作用机制及治疗研究进展
沉默信息调节因子1(SIRT1)是依赖烟碱胺腺嘌呤二核苷酸(辅酶)的第Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶,通过改变核内组蛋白的乙酰化程度来调控相关基因表达,参与调节心肌细胞自噬、核质转运、细胞衰老、炎症反应等一系列重要生命活动.研究结果显示,SIRT1可减少缺血条件下心肌细胞凋亡,增强细胞的抗氧化应激能力,在心肌缺血中具有重要作用.现对SIRT1在心肌缺血中作用机制及治疗研究进展做一综述,旨在为心肌缺血的临床治疗提供参考.
-
基因芯片筛选Sirt1在小鼠急性呼吸窘迫综合征炎症损伤中相互作用的基因
目的 筛选小鼠急性呼吸窘迫综合征炎症损伤中与Sirt1相互作用的基因,探讨Sirt1在急性呼吸窘迫综合征炎症反应中的作用机制.方法 购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠,饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型;Western Blot鉴定小鼠肺组织Sirt1表达差异;建立ARDS小鼠模型,观察ARDS小鼠肺组织HE染色病理变化,并采用ELISA检测两种ARDS小鼠肺组织IL-6表达差异;采用基因芯片筛选Sirt1在小鼠ARDS炎症损伤中相互作用的基因.结果 通过聚合酶链反应鉴定出Tg和WT两种不同基因型的小鼠;免疫印迹法检测小鼠肺组织Sirt1的表达差异结果提示Tg小鼠肺组织Sirt1含量显著高于WT小鼠(P=0.001);不同浓度LPS腹腔注射12h后小鼠肺组织HE染色病理变化提示随着LPS用量增加,两种小鼠肺组织损伤程度明显增加,且WT-ARDS小鼠的肺组织损伤程度比Tg-ARDS小鼠更为严重;当LPS用量达到20 mg/kg时两组小鼠存活率＜50％;两种小鼠腹腔注射LPS(15 mg/kg)后,肺组织IL-6的表达随时间推移逐渐呈现逐渐增高的趋势,在3,6,12,24 h WT-ARDS组肺组织IL-6表达浓度显著高于Tg-ARDS组(P＜0.05),尤其在12 h差异为显著(P=0.007).基因芯片筛选出在小鼠ARDS炎症损伤中与Sirt1相互作用的基因有Ubd,Ube2d2b,Olfm4,Il1rl1,Hivep3和Lpar1.结论 Sirt1可能通过调控Ubd,Ube2d2b,Olfm4,Il1d1,Hivep3和Lpar1的表达减轻ARDS小鼠的炎症损伤.
-
2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清微小RNA-124-3p与沉默信息调节因子1水平及其相关性
目的：探讨2型糖尿病(T2DM)不同尿白蛋白排泄率患者血清微小RNA-124-3p (Mir-124-3p)与沉默信息调节因子1(Sirt1)水平及其相关性。方法将2013年9月至2015年9月508例T2DM患者根据尿蛋白排泄率(尿白蛋白/尿肌酐，ACR)分为正常蛋白尿组(D1组193例)、微量蛋白尿组(D2组175例)、临床蛋白尿组(D3组140例)。随机选择性别、年龄、体质指数（BMI）与病例组匹配的我院健康体检者211名作为正常对照组(C组)。采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组血清Mir-124-3p，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清Sirt1、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和纤维黏连蛋白(FN)水平。采用单因素方差分析、Pearson相关分析及多元逐步回归分析对所得数据进行统计学分析。结果单因素方差分析发现T2DM患者血清Mir-124-3p水平[2.85(2.78~2.92)ng/mg]显著高于对照组[0.91(0.87~0.95)ng/mg]，且随着尿蛋白排泄率增加，分别在D1、D2、D3组逐渐升高(F=1348.7，P<0.001)。与对照组相比，T2DM患者血清Sirt1水平显著降低，并在D1、D2、D3组逐渐降低(F=44.5，P<0.001)。Pearson相关分析发现Ln(ACR)与年龄、糖尿病病程、空腹血糖、空腹胰岛素、稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、HIF-1α、Mir-124-3p、TNF-α、FN呈正相关(r=0.105～0.813，均P<0.05)，与高密度脂蛋白胆固醇、Sirt1呈负相关(r=-0.113、-0.360，均P<0.05)。多元逐步回归分析发现Mir-124-3p、FN、TNF-α、HIF-1α、TC、糖尿病病程、BUN、Sirt1、UA以及年龄是影响Ln(ACR)的主要因素，其方程为：Ln(ACR)=-3.617+1.005× Mir-124-3p+0.002× FN+0.014× TNF-α+0.035×HIF-1α+0.131×TC+0.016×糖尿病病程+0.148×BUN-0.031×Sirt1+0.001×UA+0.008×年龄。结论血清Mir-124-3p可能成为早期诊断糖尿病肾病新的生物学标记物。血清Mir-124-3p可能通过促进慢性炎症反应、肾脏纤维化等途径参与糖尿病肾病的发生和发展。
-
冬凌草甲素对脐静脉内皮细胞损伤的保护作用
目的 研究冬凌草甲素(oridonin)对高糖高脂诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用机制.方法 体外培养HUVECs,噻唑蓝法(MTT)确定oridonin作用的佳浓度;将细胞分为空白对照组、高糖高脂+oridonin预处理组(以下简称为oridonin预处理组,oridonin预处理细胞24 h)、高糖高脂组(高糖高脂的浓度为33.3 mmol/L葡萄糖+500 μmol/L棕榈酸,处理48 h),利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察各组细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子仅(TNF-α)、白介素6(IL-6)的浓度,以观察细胞的炎症情况;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析HUVECs内TAp63、沉默信息调节因子1(Sirt1)mRNA的表达水平;Western blotting分析TAp63、Sirt1及凋亡相关基因磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)的蛋白表达水平.两组间比较采用￡检验,多组间采用单因素方差分析.结果 Oridonin作用于HUVECs细胞24 h的佳浓度为5 μmol/L.高糖高脂组HUVECs细胞内TAp63(mRNA及蛋白)、Sirt1 (mRNA及蛋白)、Bcl-2蛋白水平明显低于空白对照组(t=-22.50、-6.02、-16.22、-6.72、-7.71,均P＜0.05),HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α、IL-6浓度明显高于空白对照组(t=14.34、12.59、17.37、17.90,均P＜0.05).与高糖高脂组相比,oridonin预处理组HUVECs内TAp63 mRNA和蛋白、Sirt1mRNA和蛋白、Bcl-2蛋白表达明显升高(t=5.85、5.06、4.55、3.04、5.81,均P＜0.05),HUVECs凋亡率、细胞内p-ERK蛋白表达及上清中炎症因子TNF-α及IL-6的浓度明显下降(t=-7.11、-7.81、-10.51、-10.36,均P＜0.05).结论 冬凌草甲素能够抑制高糖高脂诱导的HUVECs的凋亡,可能与其抑制高糖高脂诱导的炎症反应和(或)增加TAp63、Sirt1、Bcl-2的表达,且降低p-ERK的表达有关.
