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基于HILIC-UPLC-MS/MS测定酸枣仁核苷及碱基类成分
目的:建立HILIC模式超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(HILIC-UPLC-MS/MS)同时测定酸枣仁中11种核苷及碱基类成分的含量.方法:采用Acquity UPLC BEH Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),配有Amide 1.7 μm VanGuard保护柱,以10 mmol·L-1乙酸铵-0.8％乙酸水(A)和0.1％乙酸-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0～5 min,10％A;5 ～7 min,10％ ～ 40％ A),流速0.3 mL·min-1,柱温35℃,进样体积1 μL,Waters XevoTM TQ质谱仪以多反应离子监测(MRM)方式,进行正离子检测.结果:所测成分在7 min内实现分离,各核苷及碱基类成分在0.002 32～8.66 mg·L-1与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均＞0.992 2;加样回收率(n=6)为92.1％ ～ 108.2％,RSD均＜7％.各批次各核苷及碱基类成分的含量具有一定的差异.10批样品总核苷及碱基类质量分数在24.5～48.48 μg·g-1,其中以⑩号样品含量低,②号样品高.各种核苷类成分中,尿苷含量高(平均值14.84 μg·g-1),胸苷质量分数低(平均值0.14 μg·g-1).结论:该方法具有简便、快速、重复性好,专属性强等特点,适用于酸枣仁中核苷及碱基类成分的快速定量分析.
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HPLC同时测定全蝎不同工艺提取物中5种核苷类化合物含量
目的:比较水煎煮、醇提取以及湿法超微粉碎3种提取工艺对全蝎中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟苷、腺苷5种核苷类成分含量的影响.方法:全蝎经不同工艺提取,采用HPLC外标法测定提取物中5种核苷化合物含量.Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.07％冰乙酸-甲醇梯度洗脱,流速1.0 mL· min-,检测波长254 nm,柱温35℃.结果:尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟苷、腺苷5种核苷化合物均在一定质量浓度范围内线性关系良好,r均＞0.999 5,样品中5种核苷化合物的加样回收率98.9％ ～ 103.9％,RSD均＜3％.结论:该HPLC简便快速、灵敏度高、重复性好,可应用于同时测定尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟苷、腺苷5种核苷化合物含量并比较不同全蝎提取物之间的差异.
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RP-HPLC同时测定贝母药材中5种核苷类化合物
目的:建立一种同时测定贝母药材中核5种苷类化合物尿苷、腺嘌呤、鸟苷、胸苷、腺苷的高效液相色谱法.方法:采用Welch Materials XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-5mmol·L~(-1)乙酸铵-乙酸缓冲盐(pH 4.30)作为流动相,以1 mL·min~(-1)的流速进行梯度洗脱(洗脱梯度程序为:0～10 min,0%～1% A;10～20 win,1%～5% A;20～25 min,5%A;25～35 min,5%～30% A;35～37 min,30%～0% A;37～40 min,0% A);进样量20μL;检测波长260 nm.结果:在0.24～13.60 mg·L~(-1),各核苷类化合物的响应峰面积与其相应的浓度呈现良好的线性关系,r>0.998 3;各待测物的日内精密度和日间精密度的RSD均小于2.1%;重复性良好(RSD<5.5%);回收率范围在93.55%～101.88%,RSD<3.0%.结论:不同种贝母药材中核苷类化合物的含量大致顺序为湖北贝母>浙贝>川贝≈平贝;本方法简便、可靠、准确,可用于贝母药材中核苷类化合物的含量测定,为全面开发利用贝母药材提供进一步依据.
关键词： 高效液相色谱法(HPLC) 核苷类化合物 贝母 -
HPCE法测定蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的含量
目的建立蛹虫草中核苷类化合物的高效毛细管电泳测定法,比较天然蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的含量.方法在HV-301高效毛细管电泳仪上进行定量分析,采用石英毛细管柱,以pH9.0的40mmol*L-1硼砂溶液作为电极缓冲液;分离电压为16KV;检测波长为254nm.结果天然蛹虫草中核苷类化合物主要集中在子座部分.人工培养蛹虫草子座和菌丝中虫草素的含量分别是天然蛹虫草子座中的5.04倍和10.85倍;液体培养蛹虫草菌丝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鸟苷含量均高于固体培养蛹虫草子座.结论天然蛹虫草及其培养物中核苷类化合物的种类和含量具有较大的差异.高效毛细管电泳法可以用于蛹虫草的定量分析,具有分离度高、简便、准确,样品消耗少等特点.
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新的核苷类化合物β-L-D4A的化学合成及体外抗HBV作用
目的以D型谷氨酸为原料,通过一系列化学转化,合成了新的核苷类化合物β-L-D4A,并初步探索其体外抗HBV作用.方法合成β-L-D4A,用红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证目标化合物的结构,以2.2.15细胞(HepG2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养为基础,Southern印迹法检测不同浓度化合物体外抑制HNV DNA复制作用,并求出50%抑制的药物浓度,即EC50.以四噻唑蓝(MTT)比色分析法检测不同浓度药物的细胞毒性,求出IC50.结果化合物β-L-D4A经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证;2.2.15细胞培养上清液病毒DNA的Southern印迹、自显影结果显示病毒的抑制呈明显的浓度依赖性,计算出EC50为0.2 μmol·L-1,胞内DNA的Southern印迹、自显影显示类似的结果;细胞毒性实验显示IC50为200 μmol·L-1.结论体外实验显示β-L-D4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用,且无明显的细胞毒性,TI值为1 000,高于临床用Lamivudine (750),有望开发为临床抗HBV用药.
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新的核苷类化合物β-L-D4A及其异构体体外抗HBV作用
目的探索比较β-L-D4A(L-D4A)及其异构体体外抗HBV作用,以期获得高效、高治疗指数(TI)的新一类抗HBV化合物.方法L-D4A及其异构体干预2.2.15细胞(Hep G2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养,ELISA法检测上清HBs Ag,HBe Ag;32P标记HBV DNA为探针,Southern印迹法检测上清液及细胞内HBV DNA,再以计算机图像处理进行定量分析,求出50%抑制的药物浓度(ED50).洗去HBV探针后,以32p标记细胞色素氧化酶ⅢDNA为探针再次进行杂交,以探索线粒体的毒性.以MTT法检测不同浓度药物的细胞毒性,求出50%细胞抑制的药物浓度(ID50).结果上清液病毒DNA的Southern印迹结果显示,L型异构体较之D型异构体具有更强的HBV DNA抑制作用,L-D4A为突出,并呈显明显的浓度依赖性,计算出ED50为0.2μmol·L-1;D-D4A具有明显的线粒体毒性,L-D4A则不明显;L-D4A细胞毒性实验显示ID50为200 μmol·L-1;低浓度L-D4A对上清HBsAg,HBeAg无明显的影响,高浓度时有显著的抑制作用.结论体外实验显示L-D4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用,且无明显的细胞毒性和线粒体毒性,TI(ID50/ED50)值为1 000,高于拉米夫定组(TI值为750),将有望进一步得到开发.
关键词： 核苷类化合物 β-L-双脱氧双脱氢腺苷 乙肝病毒 -
HPLC测定宁心宝胶囊中核苷类化合物含量
目的:建立高效液相色谱法测定宁心宝胶囊(真菌虫草头孢)中核苷类化合物的含量.方法:采用十八烷基键合硅胶色谱柱(4.6mm x250mm,5μm);以磷酸盐缓冲液(pH 7.8-8.0)-乙腈(83:17)为流动相,流速为1.0mL/min;检测波长为260 nm.结果:宁心宝胶囊中主要成分尿苷在4.168-83.36 μg/mL范围内有良好的线性关系(r=0.999 9);腺苷在4.480-89.60 μg/mL范围内有良好的线性关系(r=0.999 9);次黄嘌呤核苷在5.230-104.6 μg/mL范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率分别为99.6%,102.1%和111.7%,RSD分别为0.4%,1.8%和2-5%.结论:此法简便、快速.适用于宁心宝胶囊中核苷类化合物含量的同时测定,为控制其质量提供了简便易行的方法.
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取代腺嘌呤类化合物的合成及其抗病毒活性研究
目的:修饰阿德福韦(ADV)结构,设计合成新化合物,研究其对乙肝病毒HBsAg、HBeAg的抑制活性.方法:以(ADV)为原料,经磷酰氯化、三氟乙醇酯化和氯甲酸酯缩合等反应,设计合成了未见文献报道的8个嘌呤类目标化合物1a-1h,所有化合物经1HNMR谱等确证;体外药理实验采用酶联免疫法(ELISA),阳性药物采用临床常用同类药物ADV.结果:设计合成的8个化合物,对HBsAg和HBeAg都有一定的抑制作用,其中化合物1d,1e,1g,1h对HBsAg抑制活性与ADV相当,化合物1g对HBeAg抑制活性与ADV相当.所有目标化合物对HBsAg抑制活性好于对HBeAg抑制活性.结论:在嘌呤环N6位引入较长碳链的1g活性佳.
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高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养物中核苷类化合物的含量
目的建立高效液相色谱法测定蛹虫草人工固体培养菌皮中核苷类化合物的含量.方法采用pH 6.5磷酸盐缓冲液-甲醇(85:15)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为260nm.结果蛹虫草人工固体培养物菌皮中主要成分虫草素在4.03～100.8μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=39.58 C-0.034 2;尿苷在3.68～92.0μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=24.329 C-0.002 7;腺苷在3.84～96.11 μg/ml范围内线性关系良好,回归方程为A=18.012 C-0.023 5.结论人工固体培养菌皮中核苷类成分的含量随培养时间发生一定的变化,高效液相色谱法可用于蛹虫草人工培养物中核苷类化合物的测定,为控制其质量提供了简便易行的方法.
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色谱及其联用技术在海洋药用生物核苷类化合物筛选排重方面的应用
为了解决天然产物化学研究中核苷类化合物重复提取、分离、纯化和表征等问题,避免人力物力的大量消耗并提高新化合物的发现效率,对已知核苷类化合物的快速鉴别、排重显得尤为重要.本文以笔者所在课题组取得的研究成果为例,从高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用、毛细管电泳和毛细管电泳-质谱联用等4种色谱及其联用技术,对海洋生物中核苷类化合物快速鉴别、排重方法进行了系统介绍.上述方法可以实现对海洋药用生物粗提物中常见核苷类化合物的快速筛选、排重,避免对已知成分繁杂的分离纯化、结构鉴定过程,为海洋天然产物化学研究提供了1种新思路.
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高效液相色谱法测定天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中3个核苷类化合物含量
目的:建立快速分析天然冬虫夏草、蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物成分的高效液相色谱法,比较天然冬虫夏草和蛹虫草及其发酵制品中核苷类化合物的含量.方法:采用超声提取的方法,制备供试品溶液.色谱柱为Hypersil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为pH 6.5磷酸盐缓冲液-甲醇(85∶15),检测波长为260nm.结果:天然冬虫夏草和蛹虫草及其人工培养物中的3种核苷类成分在25 min内达到基线分离;腺苷在5.0～80.0 μg·m1-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 3,样品回收率为99.4％;虫草素在4.37～70.0 μg·m1-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7,样品回收率为98.3％;腺嘌呤在6.75～108.0 μg· ml-1范围内与峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 7,样品回收率为98.9％.结论:天然虫草与人工虫草培养物有相似的核苷类化合物,但在含量上有较大差异.此方法简便、准确,重复性好,可作为判定天然虫草及其培养物质量的一种方法.
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高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草子实体中核苷类成分的含量
目的:建立高效液相测定人工培养蛹虫草子实体中核苷类成分含量的方法.方法:采用KNAUER Eurospher-100C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-50mmol·L-1磷酸二氢钾(7∶93)为流动相,检测波长为260 nm.结果:测定3批人工培育蛹虫草中核苷类成分的含量,腺苷、腺嘌呤、虫草素的平均含量分别为0.14%,0.0095%,0.42%.结论:本方法能同时测定人工蛹虫草中多种核苷类成分的含量,具有较高的灵敏度,操作简单,可用于人工蛹虫草的质量评价.
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UPLC-MS/MS法同时测定生地黄饮片中7种核苷类成分的含量
目的:建立UPLC-MS/MS法同时测定生地黄饮片中7种核苷类成分(2'-脱氧腺苷、次黄嘌呤、腺嘌呤、腺苷、肌苷、尿嘧啶、尿苷)的含量.方法:采用Waters BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以0.1％甲酸溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱;正离子多反应监测(MRM)模式来检测生地黄饮片中7种核苷类成分的含量.结果:7种核苷类成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数均不低于0.9913,加样回收率为98.54％～ 102.07％,RSD值均小于3.19％.结论:该方法可快速、准确地对生地黄饮片中7种核苷类成分进行定性定量分析.
关键词： 生地黄 核苷类化合物 UPLC-MS/MS 含量测定 -
新核苷类化合物体外抗乙型肝炎病毒的作用
在抗人类免疫缺陷病毒(HIV)研究中发现双脱氧核苷类化合物具有抑制逆转录酶,终止DNA链延伸,而抑制HIV复制作用.随后证实同样可以终止乙型肝炎病毒(HBV) DNA链的延伸,而达到抑制HBV复制的作用.以体外培养2.2.15细胞为模型,观察新合成的核苷类化合物β-L-D4A的抗HBV作用.
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双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物的含量
目的:建立以双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物含量的方法.方法:采用以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合荆的硅胶GF254薄层板,以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水-氨水(8:2:6:0.5:0.12)为展开剂,双波长反射法锯齿扫描,测定渡 长为254 nm,参比波长为300 nm.结果:腺苷、尿嘧啶、尿苷的点样量分别在11.16～58.03μg(r=0.998 5)、1.04～6.24μg(r=0.0991 5)、0.8～4.8μg(r=0.991 2)范围内与各自斑点面积积分值呈良好线性关系;三者的平均回收率分别为95.559%、96.366%、95.270%,RSD分别为0.74%(n=6)、0.73%(n=6)、0.398%(n=6).结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于虫草类制剂的质量控制.
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RP-HPLC法测定不同厂家阿胶中核苷类化合物的含量
目的:建立同时测定阿胶产品中多个核苷类化合物含量的方法,并评价相关阿胶产品的质量均一性.方法:采用反相高效液相色谱法.色谱柱为Zorbax SB-C18柱,流动相为1mmol· L-1乙酸铵水溶液(A)-甲醇(B)(梯度洗脱),检测波长为260 nm,流速为1 mL·min-1,进样量为1μL,柱温为30℃.结果:胞嘧啶、胞苷、尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷、腺苷检测浓度分别在一定的范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(均r=0.999 9)；平均回收率在94.3％～103.8％之间,RSD在0.2％～3.2％(n=3)之间.自制10批阿胶样品的核苷类化合物总含量的RSD为9.1％,而所有检测阿胶样品中核苷类化合物总含量的RSD则高达42.9％.结论:不同厂家阿胶产品质量可能存在较大的差异性；该方法可为阿胶产品的质量控制提供参考.
