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大鼠体内淫羊藿素葡萄糖醛酸代谢物的定量研究
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(U HPLC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中淫羊藿素(ICT)及其葡萄糖醛酸代谢物(GICT)浓度,并用于定量研究ICT在大鼠体内的代谢.方法 采用乙腈提取血浆中ICT和GICT,以香豆雌酚(CMT)为内标,在C18色谱柱上以乙腈-水-甲酸铵-甲酸梯度洗脱分离;在电喷雾离子化电离源上以选择反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 367.1→297.1 (ICT),m/z 543.3→367.1 (GICT)和m/z 267.0→211.1 (CMT).大鼠腹腔注射10 mg/kg ICT,采集不同时刻血样并测定ICT和GICT浓度.结果 ICT和GICT的线性范围分别为0.2 ～ 20 ng/ml和2～ 200 ng/ml,定量下限分别为0.2 ng/ml和2ng/ml.ICT和GICT的精密度(RSD)在10.3％以内,准确度在95.1％～103.7％,提取回收率为89.1％ ～92.4％,基质效应为93.2％ ～ 104.2％.结论 UHPLC-MS/MS法专属性好、准确度高,适用于ICT在大鼠体内代谢研究,2h时GICT达到大浓度.ICT在大鼠体内迅速代谢成葡萄糖醛酸Ⅱ相代谢物GICT.
关键词： 淫羊藿素 淫羊藿素葡萄糖醛酸代谢物 超高效液相色谱-串联质谱 代谢 -
超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素(ICT)浓度,并用于研究大鼠静脉注射ICT的药动学.方法 采用乙腈提取血浆中ICT,以香豆雌酚(CMT)为内标,在BEH C18色谱柱(2.1mm×50 mm,1.7 μm)上以流动相乙腈-水-甲酸铵-甲酸梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温40℃,分析时间6.5 min;在电喷雾离子化电离源上以多反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 367.1→297.1 (ICT)和m/z 267.0→211.1 (CMT).大鼠静脉注射10 mg/kg ICT,采集不同时刻血样并测定药物浓度.结果 ICT的线性范围为0.5～20 ng/ml,方法定量下限为0.5 ng/ml.ICT日内和日间精密度(RSD)在8.1％以内,准确度在95.3％～99.3％,提取回收率为90.1％ ～92.1％,基质效应为97.5％～101.2％.大鼠静脉注射ICT的t1/2为(1.13±0.32)h,表观分布容积为(4.54±0.27) L/kg,清除率为(2.91±0.68)L/(h·kg).结论 该方法速度快、专属性好、准确度高,适用于ICT临床前药动学研究.
关键词： 淫羊藿素 超高效液相色谱-串联质谱 药物代谢动力学 -
淫羊藿素在大鼠体内的组织分布
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)研究淫羊藿素(ICT)在大鼠体内的组织分布.方法 乙腈提取大鼠组织匀浆中ICT,在C18色谱柱上以含有甲酸和甲酸铵的乙腈-水二元溶剂梯度洗脱分离ICT和内标化合物香豆雌酚(CMT),负离子电喷雾选择反应监测方式定量分析ICT(m/z 367.1 →297.1)和CMT(m/z 267.0→211.1).采集大鼠单次腹腔注射10 mg/kg ICT后不同时间的心、肝、脾、肺、肾和肌肉组织并测定ICT浓度.结果 ICT在0.2 ～ 20 ng/mL浓度范围内线性关系良好,定量下限为0.2 ng/mL.ICT在肌肉中的半减期长(12.46 h),在肝中有高浓度(2949 ng/g).结论 ICT广泛分布在各组织中,48 h各组织中ICT清除均超过93％,表明ICT在组织中无蓄积.
关键词： 淫羊藿素 组织分布 超高效液相色谱-串联质谱 -
淫羊藿素和脱水淫羊藿素对人类乳腺癌细胞T47D增殖和细胞周期的影响
目的 探讨淫羊藿素和脱水淫羊藿索对人类乳腺癌细胞株T47D增殖和细胞周期的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定淫羊藿素和脱水淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D的细胞增殖作用.并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780和雌激素受体ERB激动剂DPN为工具药来评价淫羊藿素和脱水淫羊藿素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对T47D细胞的增殖情况进行分析.结果 淫羊藿素和脱水淫羊藿素在10-8～10-6范围内能促进T47D细胞的增殖,并将T47D细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且淫羊藿素和脱水淫羊藿素促进T47D细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗.结论 淫羊藿素和脱水淫羊藿素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的.
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淫羊藿素抑制人脐静脉内皮细胞血管生成及其机制
目的：探讨淫羊藿素对人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）血管生成的抑制作用及其机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，分别观察淫羊藿素对其增殖、迁移及其小管形成的影响。采用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子（ VEGF ）和色素上皮衍生因子（ PEDF）的含量。结果：经淫羊藿素作用48 h后，未见对内皮细胞增殖有影响。淫羊藿素高浓度组（ ICT110-6 mol/L）、中浓度组（ICT210-7 mol/L）、低浓度组（ICT310-8 mol/L）和沙利度胺（TLD）组HUVEC细胞迁移数目（4.67±1.26）、（10.48±3.15）、（21.06±6.83）和（19.15±6.03）个，明显低于空白对照（Control）组（41.38±7.78）个（P＜0.01）。 ICT1、ICT2、ICT3及TLD组小管形成的面积分别为（5867.45±925.36）、（1627.33±288.56）、（735.73±325.65）和（2933.24±741.43）μm2/视野，均低于Control组（7883.69±1034.85）μm2/视野（P＜0.01）。经淫羊藿素处理后，HUVEC细胞分泌VEGF功能明显下降，而分泌PEDF功能明显升高。结论：体外实验结果表明淫羊藿素具有抑制HUVEC细胞血管生成的作用，这种效应与血管内皮细胞VEGF的活性降低及其合成受到抑制，同时对PEDF活性升高及其合成受到促进作用有关。
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淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌 MCF-7 细胞作用的影响
目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达；淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用；淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.
关键词： 淫羊藿素 人乳腺癌细胞MCF-7 雌激素 雌激素受体ERα -
淫羊藿素通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成软骨分化
该文研究GDF-5联合淫羊藿素(ICT)诱导BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt信号通路在其中的作用.采用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞分成6组:BMSCs组,ICT组,GDF-5组,GDF-5 +ICT组,GDF-5+ ICT+ SB216763组,GDF-5+ ICT+XAV-939组,连续诱导培养14 d.倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;Alcian Blue染色检测蛋白聚糖变化;RT-PCR检测aggTecan,Col2,Sox9,Dvll,Gsk3β,β-catemn mRNA表达水平;Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达水平.结果提示,与BMSCs组相比,GDF-5组,GDF-5 +ICT组,GDF-5+ ICT+ SB216763组蛋白聚糖Alcian blue染色均明显较深;成软骨分化标记基因aggrccan,Col2,Sox9 mRNA表达水平及Ⅱ型胶原蛋白表达水平,Wnt信号通路相关基因β-cateninmRNA及蛋白表达均逐渐增加,Gsk3βmRNA表达量逐渐减少.相反,相对于GDF-5+ ICT组,添加XAV-939组则表现为成软骨分化及Wnt信号通路相关基因Dvl1,β-catenin表达下调,Gsk3βmRNA表达增加,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达水平均下降,上述差异均有统计学意义.GDF-5联合淫羊藿素能够诱导大鼠BMSCs成软骨分化,其中ICT起促进作用.ICT可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进大鼠BMSCs体外成软骨分化.
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淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用的体外研究
目的 探讨体外淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及分子机制.方法 设置对照组及不同浓度梯度的淫羊藿素组(10、20、40、80、160 山mol/L)、阿霉素组(1、2、4、8、16 μg/mL)、联合组(淫羊藿素+阿霉素:20 μmol/L+1μg/mL、20 μmol/L +2 μg/mL、20 μmol/L +4μg/mL、40 mol/L+1 μg/mL、40μmol/L+2μg/mL、40 μmol/L+4μg/mL、80 μmol/L+1μg/mL、80 μmol/L+2μg/mL、80 μmol/L +4 μg/mL),分别培养骨肉瘤MG-63细胞用倒置相差显微镜观察各组药物作用24、48 h后细胞形态;CCK-8法测定各组的细胞增殖抑制率并计算半数抑制浓度;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染料流式细胞分析技术测定各组的细胞凋亡率;RT-PCR检测bcl-2、caspase-3及p21表达.结果 淫羊藿素及阿霉素可明显抑制MG-63细胞增殖,随着淫羊藿素的浓度从10 μmol/L逐渐增加至160 μmol/L,细胞增殖抑制率也随之从(9.67±3.62)％逐渐增加至(89.18±9.66)％,二者的半数抑制浓度分别为:46.93 μmol/L、3.87μg/mL;淫羊藿素与阿霉素可致细胞早期及晚期凋亡,使bcl-2基因表达下调、caspase-3、p21基因表达上调(P＜0.05);以上改变联合组较淫羊藿素组及阿霉素组更明显(P＜0.05).结论 淫羊藿素联合阿霉素对抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖具有协同或相加效应,其作用机制可能与调控bcl-2、caspase-3及p21基因有关.
关键词： 淫羊藿素 阿霉素 骨肉瘤MG-63细胞 -
淫羊藿素对KG-1a细胞增殖和凋亡的影响及其相关作用机制
目的:分析淫羊藿素抑制Wnt/β-catenin信号通路干预急性髓系白血病KG-1a细胞增殖的可能机制,为开发治疗急性髓系白血病药物提供实验依据.方法:50只c57BL/6小鼠编号后随机分为空白对照、模型对照和淫羊藿素高、中、低剂量共5组(n2 =10只),除空白对照组外均采用腹腔注射人急性髓系白血病细胞KG-1a的方法建模.淫羊藿素高、中、低剂量组分别按80、40和20 mg/kg剂量肌肉注射淫羊藿素治疗3周,模型对照组和空白对照组肌肉注射生理盐水.采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测S期激酶相关蛋白2(SKP2)、β-连环蛋白(β3-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及多聚腺素二磷酸核糖多聚酶[poly(ADP-ribose)polymerase;PARP]蛋白表达;采用分光光度法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和天冬酶-3酶原(Procaspase-3)活性;流式细胞术分别检测经淫羊藿素处理后的细胞周期时相分布和细胞凋亡率情况.结果:淫羊藿素可增强Caspase-3活性,降低Procaspase-3的水平,还可上调E-cadherin蛋白的表达,下调SKP2和β-catenin蛋白的表达,呈剂量依赖性增加PARP蛋白表达,经淫羊藿素处理后细胞凋亡明显,KG-1a细胞被阻滞于G0/G1期,KG-1a细胞生长明显受到抑制.结论:淫羊藿素能够剂量依赖性地裂解PARP,以诱导人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及其下游相关基因表达有关.
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淫羊藿素对K562细胞增殖及细胞内活性氧的影响
目的:探讨淫羊藿素(icaritin,ICT)对慢性髓系白血病K562细胞增殖及细胞内活性氧(ROS)的影响.方法:MTT法检测ICT对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞的凋亡情况;Western blot法检测PARP蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞中ROS水平.结果:ICT对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈一定的浓度依赖性(r=0.837);凋亡细胞比例增多;PARP蛋白表达量增加;细胞内活性氧水平明显增高.结论:淫羊藿素具有抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与升高细胞内活性氧有关.
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淫羊藿素对人多发性骨髓瘤耐药细胞株KM3/BTZ多药耐药性的逆转作用
目的:探讨淫羊藿素对人多发性骨髓瘤耐药细胞株KM3/BTZ多药耐药性的逆转作用及其可能的机制.方法:采用硼替佐米(bortezomib,BTZ)梯度诱导建立KM3/BTZ细胞株,MTT法检测KM3和KM3/BTZ对7种化疗药物的耐药性以及淫羊藿素对KM3/BTZ细胞的增殖抑制作用和耐药逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Westem blot法检测Par-4、HSP27和P-gp蛋白表达变化.结果:KM3/BTZ对BTZ和其他6种化疗药物都产生耐药性,其中对BTZ的耐药指数(RI)高,为17.84.淫羊藿素抑制KM3/BTZ细胞增殖并诱导其凋亡,使半致死浓度(IC50)由0.354 μg/ml下调到0.149 μg/ml,耐药逆转倍数为2.38倍;Par-4表达上调,HSP27和P-gp表达下调.结论:淫羊藿素能有效抑制KM3/BTZ细胞增殖,诱导其凋亡,具有逆转KM3/BTZ细胞多药耐药的作用,其作用机制可能与下调HSP27和P-gp,以及上调Par-4表达有关.
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高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素
建立高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素(ICT).血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-水-乙酸(72:28:1.5,v/v/v)为流动相,通过Dikma C18柱分离,采用电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行检测.用于定量分析的二级碎片离子分别为m/z 387→m/z 313(ICT)和m/z 331→m/z315(麦黄酮,内标).ICT血浆浓度测定方法的线性范围为2.5～1 000 ng·mL-1,定量限为2.5 ng·mL-1.日内、日间精密度(RSD)均小于9.63%,准确度(RE)在±7.42%之内.本方法专属性强,灵敏度高,血浆用量少,适用于临床前药代动力学研究.
关键词： 淫羊藿素 高效液相色谱-串联质谱法 浓度测定è -
淫羊藿素在大鼠体内的药动学研究
目的 研究淫羊藿素灌胃或静脉注射给药后原型药物及结合型药物在大鼠体内的血浆药动学和排泄特征,为新药开发提供参考依据.方法 采用高效液相色谱-串联质谱法测定生物样品经酶水解前后淫羊藿素浓度.结果 大鼠灌胃给予不同剂量淫羊藿素(20、40和80 mg·kg~(-1))后,ρ_(max)和AUC_(0-∞)与给药剂量呈正相关,生物利用度分别为17.29%、13.80%和10.70%.灌胃给予80 mg·kg~(-1)淫羊藿素后,大鼠血浆中游离淫羊藿素的ρ_(max)和AUC_(0-∞)分别为13.26 ng·mL~(-1),495.67 ng·h·mL~(-1);游离与结合形式总和的药动学参数分别为597.50 ng·mL~(-1),12 038 ng·h·mL~(-1).静脉给药20 mg·kg~(-1)后,大鼠血浆中游离淫羊藿素的ρ_(max)和AUC_(0-∞)分别为5 896 ng·mL~(-1),2 470 ng·h·mL~(-1);游离与结合形式总和的药动学参数分别为11 598 ng·mL~(-1),23 303 ng·h·mL~(-1).大鼠灌胃给予80 mg·kg~(-1)淫羊藿素72 h后,尿、粪样品中游离淫羊藿素的排泄量分别占给药量的0.04%和25.09%,游离与结合形式总和的排泄量分别占给药量的0.14%和32.46%;大鼠静脉注射给予20 mg·kg~(-1)淫羊藿素72 h后,尿、粪样品中游离淫羊藿素的排泄量分别占给药量的0.58%和8.76%,游离与结合形式总和的排泄量分别占给药量的2.48%和10.82%.结论 淫羊藿素给药后在体内主要以结合形式存在,生物利用度较低,主要通过粪便排泄.
关键词： 淫羊藿素 高效液相色谱.串联质谱法 药动学 排泄 -
心叶淫羊藿化学成分研究
目的研究心叶淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)的化学成分.方法利用硅胶柱色谱分离和纯化,通过理化方法及波谱分析鉴定其结构.结果分离得到5个化合物,波谱鉴定为:5,7,4′-三羟基-8,5′-二异戊烯基黄酮(Ⅰ)、淫羊藿素(i-caritin)(Ⅱ)、去甲淫羊藿素(desmethylicaritin)(Ⅲ)、3,7-二羟基-4′-甲氧基黄酮(Ⅳ)和3,7,3′,4′,5′-五羟基黄酮(robinetin)(Ⅴ).结论其中化合物Ⅰ为一新化合物,化合物Ⅳ和Ⅴ首次从该植物中分离得到.
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淫羊藿素和脱水淫羊藿素对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究
目的 比较研究淫羊藿素和脱水淫羊藿素对体外培养大鼠骨髓阃充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5mol·L-1的淫羊藿素和脱水淫羊藿素对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿素组、脱水淫羊藿素组以及不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR法检测IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况.Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量.结果 淫羊藿素可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌,而脱水淫羊藿素并未表现出类似效应.结论 淫羊藿素促进rBMSCs成骨性分化的活性显著高于脱水淫羊藿素,可能是二者异戊烷链上的构型差异,导致淫羊藿素的生物活性强于脱水淫羊藿素,提示我们可以通过对药物进行化学结构的改造,增强药效,降低毒性,从而研究开发出新型抗骨质疏松药物.
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载淫羊藿素多孔PLGA/TCP联合微骨折术修复兔膝关节软骨缺损的初步观察
目的 研究载淫羊藿素多孔聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)/磷酸三钙(TCP)材料联合微骨折术修复兔膝关节软骨缺损中骨与软骨结合的特性.方法 24只兔子制造膝关节软骨缺损动物模型,随机分成空白组、对照组、实验组,每组8只,在软骨缺损处进行微骨折处理,分别不植人材料、植入PLGA/TCP材料和植入携载淫羊藿素的PLGA/TCP材料,6个月后进行CT评估及大体观察.结果 CT显示实验组膝关节材料构建骨形态结构良好,对照组骨形态结构稍差,空白组良好骨支架结构丧失;大体观察显示实验组修复生软骨组织色泽接近正常,对照组软骨色泽稍灰暗,空白组示无软骨修复,大体评分结果显示实验组优于对照组及空白组(P＜0.05),对照组优于空白组(P＜0.05).结论 携载淫羊藿素的PLGA/TCP材料修复兔膝关节软骨缺损其支架结构与骨整合良好,软骨大体观察效果良好,为进一步探索其修复效果提供初步依据.
关键词： PLGA/TCP材料 淫羊藿素 软骨缺损 初步观察 -
淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响
目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体(ER)与其作用机制的关系.方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达.结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10-9～1×10-6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(1×10-6 mol/L)所拮抗.与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制.淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达(P＜0.01).结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的.
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基于淫羊藿黄酮类化合物的体内代谢阐述其抗骨质疏松药效物质基础
全面系统阐述了淫羊藿饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I、淫羊藿苷5种主要黄酮类化合物的体内代谢过程,整理了5种黄酮类化合物的体内代谢产物与代谢途径;基于5种黄酮类化合物主要体内代谢产物,总结其共性代谢规律和共有代谢产物,并结合淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷、宝藿苷I、淫羊藿素的抗骨质疏松药理作用及其作用机制,初步推断淫羊藿黄酮类化合物中的次糖苷和苷元是淫羊藿黄酮类化合物的主要体内代谢产物,次糖苷和苷元也可能是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松重要药效物质基础.为淫羊藿饮片及淫羊藿黄酮类化合物抗骨质疏松药效物质基础及机制研究和抗骨质疏松有效药物研发提供了重要依据和指导.
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淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样作用研究
目的:用雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样活性[1]及构效关系.方法:用MTT法,增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)免疫组化法检测其对体外培养MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响；Real-time RT-PCR法检测ERα、ERβ和PS2 mRNA表达水平变化.结果:淫羊藿素促进MCF-7增殖,而淫羊藿苷、淫羊藿次苷1和脱水淫羊藿素促增殖效应不明显；淫羊藿素10-9 mol·L-1组PCNA阳性表达强于其它三组；淫羊藿素极显著增加ERα和PS2 mRNA的表达水平.所有受试物均不促进ERβ mRNA表达.淫羊藿素促进ERα蛋白表达强于其它三组.结论:淫羊藿素有明显的雌激素样作用,而淫羊藿苷及其它两种受试物雌激素样作用不明显.四种受试物均不促进ERβ mRNA表达.
关键词： 淫羊藿素 淫羊藿苷 人乳腺癌细胞MCF-7 雌激素样作用 构效关系 -
淫羊藿提取物中淫羊藿苷及其代谢产物在骨质疏松模型大鼠肾脏中的分布研究
目的:骨质疏松模型大鼠灌胃给予淫羊藿提取物后,利用HPLC法对其肾脏中的淫羊藿苷及其代谢产物(淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ)进行测定,以考察淫羊藿苷及其代谢产物在肾脏中的分布情况.方法:按118mg/kg(相当于淫羊藿苷)灌胃给予骨质疏松模型大鼠淫羊藿提取物后,于40min、1.5h、8h、24h取组织,经生物样品预处理后,利用HPLC法测定肾脏中各成分的浓度.色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温为40℃;流动相:A(0.4％ HAC水)-B(甲醇);流速为1.0mL/min进行梯度洗脱;检测波长为270nm.结果:淫羊藿提取物给药40min后在肾脏中即有分布且能被检测,1.5h浓度较高,其后逐渐消除或代谢为其代谢产物;其代谢产物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ在肾中均被检测;给药8h后,淫羊藿苷在肾脏中浓度较低,其代谢产物仍维持一定浓度;给药24h后各成分逐渐消除.结论:淫羊藿苷在大鼠肾脏中有一定程度的蓄积,并且与其代谢产物共存于肾脏组织中,并能维持一定的时间,与中医学认为淫羊藿归肾经补肝肾强腰膝的理论相符.
