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大豆异黄酮抑制人乳腺癌细胞生长及作用机制研究
采用体外细胞培养的方法,探讨大豆异黄酮对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生长的作用及作用机制.结果表明,大豆异黄酮抑制MCF-7细胞生长,诱导MCF-7细胞凋亡.蛋白水平检测表明大豆异黄酮可使MCF-7细胞iNOS表达升高.结果提示大豆异黄酮抑制MCF-7细胞生长,诱导细胞凋亡,并主要是通过调节iNOS基因表达实现的.
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淫羊藿素和脱水淫羊藿素对人类乳腺癌细胞T47D增殖和细胞周期的影响
目的 探讨淫羊藿素和脱水淫羊藿索对人类乳腺癌细胞株T47D增殖和细胞周期的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定淫羊藿素和脱水淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D的细胞增殖作用.并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780和雌激素受体ERB激动剂DPN为工具药来评价淫羊藿素和脱水淫羊藿素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对T47D细胞的增殖情况进行分析.结果 淫羊藿素和脱水淫羊藿素在10-8～10-6范围内能促进T47D细胞的增殖,并将T47D细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且淫羊藿素和脱水淫羊藿素促进T47D细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗.结论 淫羊藿素和脱水淫羊藿素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的.
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人乳腺癌细胞化疗敏感性与相关基因表达的关系
目的 探讨人乳腺癌细胞化疗敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系.方法 MTT法检测5株人乳腺癌细胞株Bcap37、MCF-7、T47D、MDA-MB-231和MDA-MB-435对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性.流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-GP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和凋亡调控基因FAS、BCL-2、P53和P16的表达.结果 不同人乳腺癌细胞株对同一药物敏感性差异较大.相关分析表明,细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达呈正相关(P＜0.01),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关.结论 人乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达有关.
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Survivin对乳腺癌细胞株MCF-7耐药作用的影响
一、材料和方法1.材料:5-氟尿嘧啶(5-FU)为上海旭东海普药业公司产品;RPMI1640,小牛血清是Hycolone产品;脂质体购自Invitrogen公司;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒为Promega产品;Survivin全硫代修饰反义寡核苷酸(ASODN)(5′-CCCAGCCTTCCA-GCTCCTTG-3′)和错配链ASODN(5′-GCCACTCCTCGACTC-TCGTC-3′)由北京奥科公司合成;Survivin多克隆抗体购自深圳晶美公司;MCF-7由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供.
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电离辐射对不同乳腺癌细胞株端粒酶的影响
端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊结构,主要由(TTAGGG)n串联组成.它的作用主要是维持染色体的稳定与完整,防止染色体融合.端粒酶是一种反转录酶,是能以自身RNA为模板逆转录合成端粒的核糖核酸酶,使端粒维持一定长度,从而使细胞获得无限分裂的能力.
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胰岛素对人乳腺癌细胞影响的体外实验研究
目的:旨在探讨胰岛素能否促进人乳腺癌细胞增殖.方法:将胰岛素直接作用于体外培养的人乳腺癌细胞株(MDA-MB-543),运用四氮唑盐,直接细胞计数等方法测定胰岛素对MDA-MB-543细胞株活力,细胞总数等的影响.结果:胰岛素(0.5mU/mL-16mU/mL,8h～18h)使MDA-MB-543细胞株活力、细胞总数增加,呈明显的量效关系.结论:在体外,胰岛素可诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-543增殖.
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分化和DNA结合抑制因子1基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞株MMP9表达的影响
目的 筛选成功转染Id1 miRNA真核表达载体乳腺癌MDA-MB-231细胞系,观察对乳腺癌细胞的对Id1、MMP9表达的影响.方法 构建Id1 miRNA真核表达载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株以杀稻瘟霉素筛选稳定表达的细胞株.经RT-PCR方法鉴定其对Id1、MMP9表达的影响.结果经过筛选,获得转染Id1 miRNA真核表达载体稳定表达的MDA-MB-231细胞系.经RT-PCR方法鉴定,结果表明转染Id1 miRNA真核表达载体的乳腺癌MDA-MB-231细胞株其Id1、MMP9表达水平低于对照组,且Id1、MMP9表达水平正相关.未转染组与阴性对照转染组无明显差异.结论 本实验成功筛选出稳定表达Id1 miRNA的乳腺癌细胞株,证实Id1 miRNA真核表达载体构建成功干扰有效,并且Id1与mmp9表达相关,为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异,或详细了解其分子作用机制奠定了基础.
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人乳腺癌Her-2癌基因蛋白分离纯化的研究
目的:研究乳腺癌细胞中癌基因蛋白Her-2的分离纯化方法.方法:采用裂解液裂解、超声破碎、高速离心、ConA Sepharose亲和层析结合ADP agarose亲和层析方法,从热休克处理后的乳腺癌细胞株中分离纯化出癌基因蛋白Her-2,通过SDS-PAGE电泳及免疫印迹法检测进行蛋白分子质量及性质鉴定.结果:检测结果证明纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量为185 KD的蛋白,且能与抗Her-2特异单抗结合.结论:采用本方法可以获得相对纯度较高的Her-2蛋白.
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二羟异黄酮对人乳腺癌细胞系MCF-7生长影响
大豆异黄酮是豆科植物的重要成分.近年来研究显示,其具有抗肿瘤作用,尤其对人类乳腺癌细胞株及前列腺癌细胞株均具有明显的体外抗肿瘤作用[1].文献表明,二羟异黄酮可以抑制细胞增殖及阻滞细胞周期[2].本实验初步探讨二羟异黄酮的抗肿瘤作用.
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高温联合化疗药对人乳腺癌细胞杀伤作用研究
目的:探讨高温联合化疗药物诱导人乳腺癌细胞株(MDA-MB-435S)凋亡和细胞周期各时相变化的分子机理.方法:应用43℃水浴箱高温诱导MDA-MB-435S细胞株,并联合使用5-Fu进行细胞杀伤,通过MTT比色法和流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期各时相的变化.结果;高温组、高温联合5-Fu组细胞凋亡率及细胞周期时相变化与对照组差异显著(P＜0.01).结论:高温联合5-Fu可提高乳腺癌细胞凋亡率、可抑制乳腺细胞周期G1期向S期的进程,S期细胞减少、G2M期细胞相对增高.
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蝎毒逆转人乳腺癌细胞株耐药性研究
目的:探讨东亚钳蝎毒(buthus martensii kirsch,BMK)是否能够逆转人乳腺癌细胞的多药耐药性(MDR).方法:采用MTT法对蝎毒和阿霉素(ADM)合用时肿瘤细胞的半数抑制率(IC50)进行检测.荧光分光光度法检测蝎毒对细胞内ADM浓度的影响.结果:蝎毒不同组别(100～350 mg·L-1)能分别提高MCF-7/ADM细胞株对阿霉素的敏感性(P＜0.05;P＜0.01).蝎毒不同组别(100～200 mg·L-)能使MCF-7/ADM细胞内ADM的浓度升高.结论:蝎毒能部分逆转人乳腺癌耐药细胞对阿霉素的耐药性.
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慢病毒介导短发夹ShRNA沉默ERβ乳腺癌细胞株的建立
目的:利用慢病毒载体短发夹RNA(shRNA)介导人乳腺癌细胞ERβ基因沉默,筛选鉴定,并建立ERβ基因稳定下调的乳腺癌细胞株.方法:将靶向沉默ERβ基因的shRNA慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞株T47D和MCF-7,以未感染及空载体慢病毒感染的T47D和MCF-7细胞分别作为空白对照和阴性对照.先以慢病毒瞬转48 h,通过蛋白免疫印迹法(western-blot)进行蛋白水平检测筛选出干扰效果好的两组,然后继续经浓度为1 mg/L的嘌呤霉素连续筛选4周,采用RT-PCR和western-blot方法,分别对ERβ在mRNA和蛋白水平上的沉默效果进行鉴定.结果:慢病毒感染乳腺癌细胞后,与阴性对照组相比,实验组ERβmRNA和蛋白表达量均明显下降(P(0.05);其中T47D细胞株shRNA3326、3327两实验组下调效果明显,ERβmRNA水平和蛋白水平分别达到(61.12±3.66)％、(76.47± 3.16)％和(60.83± 3.07)％、(53.31±3.00)％；MCF-7细胞株shRNA3325、3326两实验组下调效果显著,ERβmRNA水平和蛋白水平下调率分别为(62.42± 0.07)％、(42.49±1.96)％和(83.69± 5.07)％、(73.16± 13.21)％.而阴性对照与空白对照组相比无显著性差异,无统计学意义(P＞0.05).结论:成功筛选并建立了ERβ基因稳定下调的两株乳腺癌细胞系T47D和MCF-7,从而为后续探究改变ERβ表达水平在乳腺癌发生发展及在乳腺癌内分泌治疗效果中的作用提供有用的细胞研究模型.
关键词： 雌激素受体β(ERβ) 乳腺癌细胞株 短发夹状RNA 慢病毒 感染 -
rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响
为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTES mRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响.结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P＜0.05);两株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72 h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P＜0.05);MDA-MB-435细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化.两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24 h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调.rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P＜0.05).由此表明,CD40信号影响乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHC Ⅱ类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTES mRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用.同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性.
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miR-125a增强多西他赛对乳腺癌生长的抑制作用
背景与目的:研究表明miR-125a通过下调Her-2或者Her-3的表达抑制乳腺癌细胞生长,可能是指导乳腺癌治疗的靶点.本研究旨在观察miR-125a是否具有增强多西他赛对乳腺癌细胞株和裸鼠荷瘤模型的生长抑制作用.方法:转染miR-125a联合不同浓度多西他赛处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株和MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型,观察细胞株和裸鼠接种肿瘤的生长情况.结果:miR-125a与多西他赛可协同抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株、MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型肿瘤的增殖,单纯转染miR-125a也可抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株的增殖.结论:miR-125a与多西他赛有协同抗乳腺癌作用,可成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点.
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NFkB家族蛋白对乳腺癌细胞发生及耐药的影响
目的:研究NFkB家族蛋白在乳腺癌细胞的表达及与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.方法:培养14个乳腺癌细胞系,对其进行胞浆、胞核蛋白质提取,Western印迹法观察NFKB家族蛋白及其抑制物的表达,并用MTT药敏实验观察NFkB家族蛋白与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.结果:p50、p65和IkB在细胞浆内表达阳性率分别为100%、71%和50%,p50、p65同时在胞核内表达,p50尤为明显,阳性率分别为63%和35%;5个乳腺癌细胞系细胞核MTT检测IC50值大于20μg/ml,p50表达全部阳性,p65 2例阳性;p50胞核表达阳性者的IC50值明显高于胞核表达阴性,而p65无明显关系.结论:p50在乳腺癌细胞的发生中起一定作用,且与乳腺癌细胞的耐药关系密切,可望成为预后判断的新标志物.
关键词： NFKB家族蛋白 乳腺癌细胞株 蛋白质提取 Western印迹法 MTT药敏实验 -
三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究
目的 观察不同浓度的三氧化二砷(As2O3)作用不同时间段后对乳腺癌细胞MCF-7的诱导凋亡作用和对β3GnT2 及β3GnT8表达的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度As2O3作用于乳腺癌细胞后,观察其对乳腺癌细胞生长状态的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察其对MCF-7细胞凋亡的影响;同时采用RT-PCR 和Western Blot 检测相关基因mRNA及蛋白的表达水平变化.结果 不同浓度的As2O3 均可抑制乳腺癌细胞株MCF-7生长,其抑制作用随剂量增大而加强,呈时间剂量依赖性.RT-PCR 结果显示:β3GnT2、β3GnT8在各个浓度As2O3剂量组作用下,与空白组比较,均有不同程度的变化.1μg/mL和2μg/mL浓度组、4μg/mL和40μg/mL浓度组在相同时间段下分别比较,均有统计学差异(P ＜0.05).Western Blot 检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致.β3GnT2蛋白表达中,4μg/mL(4h)组、40μg/mL(4h) 组分别与4μg/mL(48h)浓度组比较,均有明显差异(P＜0.05);而在β3GnT8蛋白表达中,40μg/mL(4h)、4μg/mL(48h) 浓度组分别与空白组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论 As2O3对MCF-7细胞有显著的体外生长抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性;As2O3在体外能诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡效应与剂量呈正相关;As2O3还能下调β3GnT2和β3GnT8基因的表达.
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反义寡核苷酸抑制survivin表达来增强乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231对多西他赛敏感性的研究
目的: 探讨利用反义寡核甘酸(ASODN)技术封闭乳腺癌细胞株survivin基因,观察survivin基因表达下调能否诱导细胞凋亡及增强对多西他赛(docetaxel)药物敏感性.方法: Survivin ASODN单独及联合多西他赛处理乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,免疫细胞化学方法和Western blotting检测survivin蛋白表达,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞的生长抑制率.结果: Survivin ASODN可下调人乳腺癌细胞株中survivin mRNA 和蛋白质的表达;survivin ASODN 与多西他赛联合用药组相比对照组和多西他赛组可明显抑制细胞株的生长(P<0.01).结论: Survivin ASODN明显抑制survivin基因在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中的转录及翻译,明显提高乳腺癌对多西他赛的敏感性.
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三氧化二砷与粉防己碱联合作用对MCF-7细胞的影响
目的 观察三氧化二砷与粉防已碱联合作用对人乳腺癌细胞系MCF-7的影响.方法 MTT法检测三氧化二砷与粉防己碱联合作用对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术检测三氧化二砷与粉防己碱联合作用对MCF-7细胞凋亡的影响;扫描电镜观察三氧化二砷与粉防己碱联合作用对MCF-7细胞形态的影响.结果 MTT比色实验显示两药联用产生的抑制率高于单药使用,联合用药时随着两药比例不同,效果有差异,在一定用药比例时产生协同作用;选取MTT比色实验中产生协同作用的药物浓度进行细胞凋亡实验,联合用药组的凋亡率高于单独用药组,且根据计算联合用药指数得出有协同作用;细胞形态学观察,联合用药组细胞表面微绒毛和伪足消失,细胞较小,表面出现塌陷.结论 粉防己碱和三氧化二砷单独和联合用药作用于MCF-7细胞均可抑制细胞生长,阻止细胞周期,诱导细胞凋亡.联合用药作用强于单独用药.在一定浓度范围产生协同作用.
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共刺激分子CD40在乳腺癌中的表达和生物学意义
TNF/TNFR超家族成员中的CD40/CD40L分子因其在特异性免疫应答中的重要作用和疾病的密切关系而备受瞩目,成为免疫学及肿瘤免疫研究中的热点.在人类的恶性肿瘤中,大多数的恶性淋巴细胞性肿瘤都表达CD40分子,但CD40在上皮性肿瘤细胞中的作用及其机制研究得很少,本文研究CD40在乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中的表达及其生物学意义,进而探讨CD40作为靶分子在乳腺癌生物治疗中的可行性.
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大豆黄酮和染料木素对大鼠乳腺癌细胞体外生长的抑制试验
大豆黄酮(Daidzein)和染料木素(Genistein)是天然存在于豆科植物及其制品中的异黄酮类物质,具有多重生物学活性.本实验观察了两者对SHZ-88大鼠乳腺癌细胞株在体外生长的抑制效应.
