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miR-125a对宫颈癌CaSki细胞紫杉醇化疗和放疗敏感性的影响
目的 探讨miR-125a对宫颈癌CaSki细胞紫杉醇化疗敏感性和放疗敏感性的影响及其潜在机制.方法 Western blot检测miR-125a在正常宫颈上皮细胞和宫颈癌细胞系CaSki、c-33A、SiHa、Hela中的表达.以宫颈癌CaSki细胞CaSki为研究对象,转染miRNA mimic建立过表达miR-125a细胞,用不同浓度(0、2.5 nM、5 nM、10 nM、20 nM、40 nM)紫杉醇处理细胞.过表达miR-125a的CaSki细胞记为miR-125a组,联合紫杉醇处理记为miR-125a+紫杉醇组,以转染miR-NC细胞为对照组,联合紫杉醇处理为紫杉醇组.MTT检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化.将过表达miR-125a细胞联合放射照射,细胞克隆形成实验检测放疗敏感性变化.Targetscan预测miR-125a潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验、Western blot、qPCR验证miR-125a对其靶基因Bcl-2调控作用.结果 在正常宫颈上皮细胞和CaSki、c-33A、SiHa、Hela宫颈癌细胞中miR-125a表达量分别为0.99 ± 0.08、0.20 ± 0.02、0.41 ± 0.04、0.51 ± 0.04、0.72 ± 0.03,miR-125a在宫颈癌细胞中表达明显低于正常宫颈上皮细胞.在CaSki细胞中过表达miR-125a联合紫杉醇处理能够显著抑制细胞增殖能力,其中对照组IC50为51.79 nM,miR-125a组IC50为8.01 nM.与对照组相比,miR-125a组、紫杉醇组、miR-125a联合紫杉醇组均能显著促进细胞凋亡(P ＜0.05),miR-125a联合紫杉醇组较miR-125a组、紫杉醇组细胞凋亡率明显增加(P ＜0.01).过表达miR-125a能够增加CaSki细胞对放疗的敏感性,其增敏比为1.931.Bcl-2是miR-125a的潜在靶基因,对照组与miR-125a组Bcl-2荧光素酶活性分别为0.995 ± 0.087、0.297 ± 0.032,Bcl-2蛋白表达量为0.997 ± 0.102、0.331 ± 0.044,Bcl-2 mRNA表达量为1.023 ± 0.109、0.304 ± 0.026,过表达miR-125a可显著抑制Bcl-2荧光素酶活性及蛋白和mRNA表达.结论 在宫颈癌CaS-ki细胞中miR-125a能够通过靶向抑制抗凋亡基因Bcl-2表达增加CaSki细胞对紫杉醇化疗及放疗的敏感性.
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Mir-125a与相关疾病关系的研究进展
微小RNA(micro RNA，miRNA)是一类长度为19~25 nt的单链非编码RNA，研究发现其具有多种生物学功能，调控大多数的细胞生物学进程。随着研究的深入，miRNA的功能及其调控网络也得到了进一步的认识。miR-125a是近研究较多的miRNA，其主要作为抑癌基因发挥抑制肿瘤生长、转移的作用。本文简要综述了miR-125a与相关疾病的研究进展，以期全面了解miR-125a的生物学功能及作用靶点，为miR-125a的临床应用提供理论依据。
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miR-125a调节系统性红斑狼疮患者T细胞炎症性趋化因子RANTES的表达
微小RNA(microRNA,miRNA)作为一种基因表达调控因子,在自身免疫性疾病中起重要作用.本研究旨在研究系统性红斑狼疮(SLE)患者中低表达的miR-125a基因在SLE炎症反应中的作用及其可能的作用机制.通过miRNA Taqman荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),发现同正常对照组相比,miR-125a表达水平在SLE患者中明显降低.生物信息学分析发现T淋巴细胞激活晚期促进RANTES分泌的主要转录因子KLF13是miR-125a的潜在靶基因.定量结果也表明,SLE患者中KLF13和RANTES水平正相关.从基因组DNA中克隆pri-miR-125a基因,构建miR-125a的表达载体.在HeLa细胞中过表达miR-125a能抑制内源性KLF13 mRNA的表达,反之亦然.报告基因系统实验证实,miR-125a能直接作用于KLF13的3'UTR区,从而调节KLF13的表达.进一步发现过表达miR-125a可以降低狼疮T细胞分泌RANTES的水平.我们的研究表明,miR-125a通过调节转录因子KLF13的表达而调节参与狼疮发病的炎性趋化因子RANTES的分泌.这提示定向干预miR-125a的表达水平可调节炎症性趋化因子RANTES的表达,从而发展为SLE新的治疗手段.
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miR-125a增强多西他赛对乳腺癌生长的抑制作用
背景与目的:研究表明miR-125a通过下调Her-2或者Her-3的表达抑制乳腺癌细胞生长,可能是指导乳腺癌治疗的靶点.本研究旨在观察miR-125a是否具有增强多西他赛对乳腺癌细胞株和裸鼠荷瘤模型的生长抑制作用.方法:转染miR-125a联合不同浓度多西他赛处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株和MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型,观察细胞株和裸鼠接种肿瘤的生长情况.结果:miR-125a与多西他赛可协同抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株、MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型肿瘤的增殖,单纯转染miR-125a也可抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株的增殖.结论:miR-125a与多西他赛有协同抗乳腺癌作用,可成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点.
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一组miRNAs在睾丸发育中的表达及miR-125a对精原干细胞发育的调节作用
目的 探究一组精原干细胞(SSCs)中高表达的miRNAs在睾丸不同发育阶段的表达变化及miR-125a对体外培养SSCs增殖和凋亡的调节.方法 采用实时荧光定量RT-PCR研究34个miRNAs在睾丸不同发育阶段的表达变化.通过miR-125a过表达和抑制慢病毒颗粒感染体外培养SSCs,利用CCK8实验和EdU标记及Hoachst 33342、碘化丙啶(PI)双染研究miR-125a对体外培养SSCs增殖和凋亡的影响.后通过实时荧光定量RT-PCR和Western blotting验证促凋亡基因Bak1是否为miR-125a的靶基因.结果 不同miRNAs在睾丸发育过程中具有不同的表达模式.miR-125a能促进体外培养SSCs数目的增加,减少其凋亡的发生.miR-125a过表达能降低体外培养SSCs中Bak1 mRNA和蛋白表达量,而miR-125a的抑制则增加体外培养SSCs中Bak1 mRNA和蛋白的表达量.结论 不同miRNAs在睾丸发育中有不同的表达模式;miR-125a能调控SSCs增殖和凋亡,Bak1在SSCs中是miR-125a的靶基因.
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胃癌组织miR-125a-5p和miR-125a-3p表达及其与临床病理特征的关系
目的:探讨miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌中的表达情况及其与临床病理特征的关系.方法:采用茎环Real-time RT-PCR检测30例胃癌组织及其正常胃黏膜组织中miR-125a-5p和miR-125a-3p的表达并分析其表达与不同临床病理特征分组关系.结果:miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌组织较癌旁正常组织表达均明显升高(P=0.012和P=0.025),其中miR-125a-5p表达量约为miR-125a-3p表达量的30倍,但二者表达比值在胃癌组织及正常胃黏膜组织中差异未见显著性;扩大样本量后结果显示miR-125a-3p的表达在有无淋巴结转移组间差异存在显著性(P=0.001);而miR-125a-5p的表达在不同分化程度组间差异存在显著性(P=0.003).结论:正常胃黏膜及胃癌组织中均可以检测到miR-125a-5p和miR-125a-p的表达;miR-125a-5p和miR-125a-3p在胃癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达差异存在显著性,miR-125a-3p的表达在胃癌的不同淋巴结转移组间差异存在显著性;miR-125a-5p的表达在胃癌不同分化组间差异存在显著性.
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MiR-125a靶向GDF11调控缺氧复氧肝细胞损伤修复的机制
目的:探究miR-125a靶向生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)调控缺氧复氧肝细胞损伤修复的机制.方法:建立肝细胞L02的缺氧复氧模型;RT-qPCR和Western印迹检测miR-125a和GDF11在缺氧复氧肝细胞中的表达;双荧光素报告基因实验验证miR-125a与GDF11的靶向关系;MTT法和流式细胞技术检测上调miR-125a和敲低GDF11表达对缺氧复氧肝细胞的影响;Western印迹检测细胞凋亡因子Bax,Bcl-2,caspase-3在缺氧复氧肝细胞中的表达.结果:在缺氧复氧肝细胞中,miR-125a表达下调,GDF11表达则显著上调;上调miR-125a和敲低GDF11表达可增强缺氧复氧肝细胞的活力,抑制凋亡;GDF11是miR-125a的靶基因,且miR-125a通过负性调控GDF11的表达影响缺氧复氧肝细胞的凋亡,GDF11可逆转miR-125a对缺氧复氧肝细胞凋亡相关分子表达的影响.结论:miR-125a靶向GDF11参与缺氧复氧肝细胞的损伤修复过程.
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大鼠广泛肠切除后小肠组织miR-125a和Mcl-1的表达及意义
目的：探讨广泛肠切除后miR-125a和抗凋亡蛋白（Mcl-1）在肠上皮细胞中表达的变化及其在短肠综合征剩余肠管适应性变化过程中的意义。方法选取8周龄的SD雄性大鼠54只，分为实验组（18只，进行70％的大范围小肠切除，距回盲部近端15 cm和Treitz韧带远端10 cm处分别切断小肠，然后行空回肠端端吻合）、肠切除对照组（18只，在距回盲部近端15 cm处切断肠管然后再吻合）和手术对照组（18只，仅行开关腹手术）。术后1周在距吻合口远端1 cm处取材，采用免疫组织化学方法和实时荧光定量 PCR检测各组大鼠小肠组织中 Mcl-1和 miR-125a 表达。结果实验组大鼠肠组织中Mcl-1阳性表达率为18．8％（3／16），明显低于手术对照组（76．5％，13／17）和肠切除对照组（83．3％，15／18）（均P＜0．01）；miR-125a相对表达量为1.92，明显高于肠切除对照组（1.01）和手术对照组（1.05）（均P＜0．01）。结论 miR-125a和Mcl-1在广泛肠切除诱导的肠道适应过程中发挥重要作用，二者之间通过一定的机制相互调节。
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miR-125a对人脑微血管内皮细胞功能的调节作用
目的 探讨miR-125a对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)功能的影响.方法 体外培养HBMECs,慢病毒感染法沉默HBMEC中miR-125a,qRT-PCR检测HBMECs中miR-125a表达.在正常条件及低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激条件下,采用MTT法检测HBMEC细胞增殖能力,血管形成检测试剂盒检测细胞血管形成,分别采用衰老试剂盒和流式细胞仪检测细胞的衰老及凋亡.结果 在正常及ox-LDL处理条件下,miR-125a敲除均能抑制HBMEC细胞增殖及血管形成能力,促进细胞衰老及凋亡.结论 miR-125a调控生理及病理条件下HBMECs多种功能.
关键词： miR-125a 人脑微血管血管内皮细胞 细胞功能 -
MiR－125a诱导表达与顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株凋亡相关性的研究
目的：探讨顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株TW03微小RNA－miR－125a表达情况，为顺铂治疗鼻咽癌的耐药性寻找新的分子靶点和标志物。方法建立顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株TW03细胞模型（ TW03／DDP），提取细胞中的总RNA，实时荧光定量聚合酶链反应（ reverse transcription－quantitative polymerase chain reaction，RT－qPCR）分析该细胞株中miR－125a表达情况，过表达miR－125a和anti－miR－125a后，检测TW03细胞的凋亡和增殖情况。结果顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株中miR－125a的表达增高，后者可抑制顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株凋亡。结论顺铂抵抗的鼻咽癌细胞株诱导表达miR－125a可抑制鼻咽癌细胞株凋亡。
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miR-125a和miR-206在乳腺癌中的表达及临床意义
目的:探讨miR-125a和miR-206在乳腺癌中的表达及临床意义.方法:应用Real-time PCR检测35例乳腺癌组织及其癌旁乳腺组织中miR-125a和miR-206的表达,用免疫组化检查乳腺癌中雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达,荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2(HER-2)和DNA拓扑异构酶2A(TOP2A)表达;分析miR-125a和miR-206与乳腺癌患者年龄、月经、淋巴结状态、HER-2、TOP 2A、ER、PR的表达等临床病理特征的相关性.结果:miR-125a和miR-206在乳腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,miR-125a高表达与淋巴结阴性、HER-2阴性、TOP 2A阴性具有相关性(P＜0.05),与乳腺癌患者肿瘤大小、年龄、月经状态、ER、PR无相关性.miR-206的高表达与较小的肿瘤体积、ER阴性、PR阴性、HER-2阴性具有相关性(P＜0.05),与乳腺癌患者年龄、月经、淋巴结状态及TOP 2A的表达程度无关.结论:miR-125a和miR-206在乳腺癌发生发展过程中可能发挥重要作用,对指导HER-2阳性和三阴性乳腺癌的治疗有重要临床意义.
