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肺腺癌组织中miR-206的表达及其对肺腺癌细胞迁移侵袭的影响
目的：研究miR-206在人肺腺癌组织中的表达情况，探讨miR-206是否通过下调SOX4影响肺腺癌细胞系（ A549）细胞的侵袭。方法收集94例肺腺癌组织标本及癌旁正常肺组织，通过实时荧光定量PCR（ RT-PCR）检测各组组织中与肺腺癌相关的miR-206、miR-21、miR-34、miR-378、miR-138、miR-32、SOX4 mRNA的表达情况，Pearson相关分析检验miR-206表达量与SOX4的相关性；免疫印迹法检测两组标本中SOX4的表达情况，进一步在细胞实验中，通过转染miR-206mimic和miR-NC至离体培养的A549细胞中，免疫印迹法检测A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4表达情况，划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况，利用荧光素酶素试验验证SOX4是miR-206的靶基因；再通过转染过表达SOX4的质粒至A549细胞，检测A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4的表达情况，划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于正常肺组织，miR-206、miR-21在肺腺癌组织中的表达降低（P＜0.01）；miR-34、miR-378、miR-138、miR-32的表达在两组之间没有明显区别；肺腺癌组织中SOX4 mRNA的表达增加（P＜0.01）；miR-206与SOX4 mRNA的表达量成负相关（r＝－0.344，P＜0.01）。在细胞实验中，相比于miR-NC组，转染miR-206mimic后，A549细胞中MMP-2、MMP-9、SOX4的表达减少（ P＜0.05）， A549细胞的迁移侵袭减少（ P ＜0.01）；荧光素酶试验结果显示， miR-206能降低SOX4-3＇-UTR质粒的荧光素活性（P＜0.05）；转染过表达SOX4质粒后，相比于miR-206＋空质粒组，A549细胞中MMP-2和MMP-9表达增加（P＜0.05），细胞的迁移侵袭增加（P＜0.01）。结论在肺腺癌组织中，miR-206低表达；miR-206可以通过下调SOX4从而抑制A549的迁移和侵袭。
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miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其机制研究
探究miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其调控机制.通过生物信息学软件预测可靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-qPCR和Western blot等分子生物学方法检测miR-206/miR-613、OATP1B1 mRNA及蛋白表达水平;采用双荧光报告基因法,研究miR-206/miR-613作用于OATP 1B1表达的确切机制.结果发现,miR-206/miR-613种子序列与OATP 1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,具有较高的特异性,且它们之间形成的二级结构较为稳定.与对照组相比,过表达miR-206/miR-613,HepG2细胞中OATP1B1的蛋白表达水平分别下调24.7％、38.8％,反之,抑制其表达OATP1B1的蛋白表达水平分别上调25％、38.2％,而OATP 1B1 mRNA表达均未发现明显改变;与对照组相比,过表达或抑制表达miR-206/miR-613,pMIR/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性分别下降35％、30％或增加33.1％、32.5％,而在OATP 1B1 mRNA3'-UTR miR-206/miR-613结合位点突变的报告基因系统中,过表达或抑制表达miR-206/miR-613对荧光素酶活性均无影响.因此,miR-206/miR-613通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR,从而转录后调控OATP1B1蛋白表达.
关键词： miR-206 miR-613 有机阴离子转运多肽1B1 转录后调控 -
miR-206过表达靶向VEGFA对人肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的抑制作用
目的 探究miR-206过表达对人肝癌HepG2细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制.方法 HepG2细胞分为四组:HepG2 空白对照组,miR-206 mimic组,pc-VEGFA组和miR-206 mimic+pc-VEGFA组. qRT-PCR检测miR-206表达和VEGFA的mRNA水平.荧光素酶实验确认miR-206与VEGFA的靶向关系. Western blot检测VEGFA,抗波形蛋白,N-钙粘蛋白和纤维连接蛋白的表达. Transwell 检测细胞侵袭.划痕实验分析细胞迁移.结果 转染miR-206 mimic后HepG2细胞中miR-206表达显著上升,VEGFA的mRNA水平显著下降(P＜ 0.001).miR-206与VEGFA存在直接靶向关系.与对照组相比,miR-206 mimic组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著下降(P＜ 0.01). pc-VEGFA组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著高于对照组(P＜ 0.01).与pc-VEGFA组相比,miR-206 mimic+pc-VEGFA组VEGFA的蛋白水平,每个视野下的侵袭细胞数目,痕愈合率显著降低(P＜ 0.01). miR-206 mimic组vimentin, N-cadherin和Fibronectin表达低于对照组( P＜ 0.01). pc-VEGFA组 vimentin, N-cadherin和 Fibronectin表达高于对照组( P＜ 0.01).与 pc-VEGFA组相比, miR-206 mimic +pc-VEGFA 组 vimentin, N-cadherin 和 Fibronectin 表达降低( P ＜ 0.01 ).结论miR-206过表达通过靶向VEGFA抑制人肝癌HepG2细胞侵袭和迁移.
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miR-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 探讨miR-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达,以及抑制或过表达miR-206对Bcl-2蛋白表达的影响.方法 实时定量PCR方法检测NSCLC组织miR-206的表达水平,Western blot方法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达;将miR-206 inhibitors及miR-206 mimics转染至A549细胞,通过CCK-8法测定A549细胞增殖能力的变化,Western blot方法检测转染后Bcl-2蛋白表达变化.结果 miR-206在非小细胞肺癌组织中的表达量较癌旁组织明显降低(P＜0.01),Bcl-2蛋白在癌组织中较癌旁组织表达明显增高(P＜0.05);转染miR-206 inhibitor的细胞增殖能力与对照组相比显著升高,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显升高(P＜0.05),转染miR-206 mimics的细胞增殖能力与对照组相比显著降低,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显降低(P＜0.05).结论 miR-206在NSCLC组织中低表达,miR-206抑制能够促进A549细胞增殖和Bcl-2蛋白表达.
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肌肉特异性microRNA-206：研究现状及前景
背景：骨骼肌占了人体总体质量的40%，然而许多骨骼肌损伤和疾病的机制问题尚未解决。MicroRNA-206(miR-206)是骨骼肌特异性miRNA，在骨骼肌的发育和再生中起着重要的作用。
目的：总结分析microRNA-206在骨骼肌损伤和疾病中的研究现状。
方法：以“miR-206, skeletal muscle”为检索词，计算机检索1992至2014年PubMed数据库相关文献的全文，经过筛选终对60篇miR-206在骨骼肌损伤和疾病中的相关研究进行分析讨论。
结果与结论：MiR-206能调节神经肌肉损伤后神经肌肉接点的恢复。相关研究显示，控制miR-206水平可能成为治疗肌萎缩侧索硬化症等肌肉疾病的新方法。通过细胞培养发现miR-206能促进卫星细胞的分化，缺乏miR-206会导致卫星细胞延迟分化，在骨骼肌损伤中也发现miR-206能促进骨骼肌的再生。miR-206长期运动适应后水平下降，但当运动适应停训一段时间后，miR-206会恢复到原先的水平，而其机制还有待研究。 -
上调miR-206对婴幼儿血管瘤内皮细胞生长状态和侵袭能力的影响
目的 研究上调婴幼儿血管瘤内皮细胞miR-206水平对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 通过CD31磁珠提取婴幼儿血管瘤内皮细胞,经转染miR-206模拟物提高HemECs细胞内miR-206水平,研究miR-206对该细胞功能的影响.以cck-8法检测细胞增殖能力的改变,AV-PI凋亡试剂盒经流式细胞仪检测凋亡水平变化,并经Transwell侵袭实验检测侵袭能力变化.结果 转染miR-206模拟物进入HemECs细胞内48 h后,能够明显抑制细胞增殖,抑制率为(34.2±6.8)％;转染48 h后相比于对照组(1.7±1.6)％的凋亡细胞比率,miR-206模拟物组细胞凋亡比率提高到(23.9±5.1)％,差异具有统计学意义;转染后24h侵袭实验显示,细胞穿透Transwell小室至下室面细胞数在对照组为30.3 ±2.4,在miR-206模拟物组细胞数减少至14.3±3.0.结论 上调HemECs细胞内miR-206水平可明显抑制细胞增殖,增加细胞凋亡水平,减少细胞侵袭能力.提示miR-206可能通过调节瘤体细胞生物活性,对婴幼儿血管瘤疾病进程起到重要的调控作用.
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miR-206/miR-1对乳腺癌干细胞增殖的影响及作用机制
目的：探讨上调microRNA?206（miR?206）和microRNA?1（miR?1）表达对乳腺癌干细胞增殖的影响以及其作用机制。方法采用流式细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF?7中分离出乳腺癌干细胞。实验分为空白对照组、阴性对照组、miR?206转染组、miR?1转染组。除空白对照组外，其他各组分别转染阴性对照mimic、hsa?miR?206 mimic、hsa?miR?1 mimic。应用实时定量PCR检测miR?206、miR?1以及转录因子EVI?1基因的表达水平；Western blot法检测EVI?1蛋白的表达；应用MTT法检测miR?206、miR?1对乳腺癌干细胞增殖能力的影响。结果从MCF?7细胞系中分选出CD44+/CD24-/low乳腺癌干细胞，经无血清培养后可以成功传代，用于后续试验；转染hsa?miR?206 mimic、hsa?miR?1 mimic 48 h后miR?206、miR?1相对表达水平提高，EVI?1 mRNA表达水平明显下降；Western blot、MTT结果显示，上调miR?206和miR?1表达水平后显著降低EVI?1蛋白的表达，抑制了乳腺癌干细胞增殖能力。乳腺癌干细胞中miR?206、miR?1表达水平以及EVI?1蛋白表达水平的差异有统计学意义（P<0.05）。结论上调miR?206和miR?1表达能够抑制乳腺癌干细胞增殖能力，其机制可能与下调EVI?1的表达有关。
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子痫前期孕妇血清和胎盘中miR-206和FSTL1表达水平及意义
目的 分析子痫前期孕妇血清和胎盘中miR-206、卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的表达情况并探讨其意义,为评估子痫前期病情的生物学指标提供依据.方法 选取2015年3月-2017年2月在青岛市第八人民医院产科行剖宫产术的51例子痫前期孕妇为研究对象,同期选取25例行剖宫产术的正常孕妇作为对照组.采用实时荧光PCR (qRT-PCR)法检测血清和胎盘miR-206水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清FSTL1蛋白水平,采用免疫印迹(WB)法检测胎盘FSTL1水平;分析miR-206与FSTL1表达的相关性.结果 子痫前期孕妇的TG、TC、LDL-C、Apo B及24 h尿蛋白总量均高于对照组孕妇,HDL-C和Apo A低于对照组孕妇,差异有统计学意义(P＜0.05);重度组孕妇的TG、TC、LDL-C、Apo B及24 h尿蛋白总量显著高于轻度组孕妇,HDL-C和Apo A低于轻度组孕妇,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组孕妇比较,子痫前期孕妇血清及胎盘中miR-206水平上调,FSTL1蛋白水平下调,差异有统计学意义(P＜0.05).重度组孕妇血清及胎盘中miR-206水平高于轻度组孕妇,FSTL1水平低于轻度组孕妇,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-206表达与子痫前期患者的TG、TC、LDL-C、Apo B及24h尿蛋白总量呈正相关,与HDL-C、Apo A水平负相关(P＜0.05);FSTLI表达与子痫前期患者的TG、TC、LDL-C、Apo B及24 h尿蛋白总量呈负相关(P＜0.05),与HDL-C、Apo A正相关(P＜0.05).子痫前期孕妇血清和胎盘中miR-206、FSTL1表达均呈负相关(r=-0.698,P＜0.05;r=-0.774,P＜0.05).结论 miR-206在子痫前期孕妇血清和胎盘中明显高表达,FSTL1在子痫前期孕妇血清和胎盘中明显低表达,二者与子痫前期的发生和严重程度密切相关.
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多囊卵巢综合征患者血清miR-206和IGF-1的表达水平及临床意义
目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清miR-206和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达水平及临床意义.方法 选取2016年4月-2017年4月漯河市中心医院收治的79例PCOS患者为研究对象,同期选取60例月经规律健康女性为对照组,利用全自动生化分析仪检测血糖、血脂,采用放射免疫法检测空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用化学发光免疫分析法检测催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、总睾酮(TT)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)及雄激素结合球蛋白(SHBG).采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测血清miR-206水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IGF-1水平.结果 ①与对照组比较,PCOS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平无明显异常(P＞0.05),甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、FINS及HOMA-IR水平明显升高(P＜0.05).与对照组比较,PCOS组PRL、E2、LH/FSH、TT及DHEAS水平明显升高(P＜0.05),SHBG水平明显下降(P＜0.05).②与对照组比较,PCOS组血清miR-206水平明显降低,血清IGF-1水平明显升高(P＜0.05).③相关分析结果显示,血清miR-206水平与PCOS患者FINS、HOMA-IR呈明显负相关(P＜0.05),血清IGF-1水平与PCOS患者TG、FINS及HOMA-IR呈明显正相关(P＜0.05).多元逐步分析结果显示,HOMA-IR是PCOS组血清miR-206、IGF-1表达的独立影响因素.血清miR-206表达与IGF-1呈明显负相关(P＜0.05).结论 miR-206在PCOS患者血清中明显低表达,IGF-1呈高表达,二者与PCOS患者胰岛素抵抗有关.
关键词： 多囊卵巢综合征 miR-206 胰岛素样生长因子-1 表达 胰岛素抵抗 -
miR－206对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制
目的：探讨 miR－206对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法通过实时定量 RT－PCR 检测胶质瘤组织、正常成人脑组织、胶质瘤细胞系 U87和 U251以及正常人脑胶质细胞（ HEB）中 miR－206的表达情况。通过脂质体转染构建 miR－206稳定过表达细胞系U87和 U251，体外实验研究 miR－206对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。通过 miRNA 靶基因预测数据库预测 miR－206的靶基因，并利用荧光素酶报告基因实验检测 miR－206对14－3－3ζ的靶向作用。结果 miR－206在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中具有较高的表达率。体外实验显示，miR－206抑制胶质瘤细胞的增殖，促进凋亡。靶基因预测分析14－3－3ζ为 miR－206潜在的靶基因，荧光素酶实验进一步证实14－3－3ζ是 miR－206的直接靶点。结论miR－206可能通过靶向14－3－3ζ抑制胶质瘤细胞增殖，促进凋亡，可能是胶质瘤治疗的新靶点。
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miR-206在卵巢颗粒细胞的表达调节及与多囊卵巢综合征的相关性
目的 探讨miR-206在多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢颗粒细胞中的表达,以及不同浓度的雄激素(双氢睾酮)和胰岛素对小鼠正常卵巢颗粒细胞中miR-206的表达调节,为研究多囊卵巢的发病机制提供理论依据.方法 构建小鼠PCOS模型,分别提取PCOS小鼠卵巢颗粒细胞和健康小鼠卵巢颗粒细胞,应用实时荧光定量PCR方法检测miR-206在两组细胞中的表达.正常小鼠卵巢颗粒细胞体外培养48h后,分别用不同浓度的双氢睾酮和胰岛素刺激颗粒细胞24h后,应用实时荧光定量PCR方法检测miR-206的表达.结果 PCOS小鼠卵巢颗粒细胞中miR-206表达高于正常组(P＜0.05).高浓度双氢睾酮和胰岛素刺激的颗粒细胞中miR-206表达明显高于正常组(P＜0.05).结论 miR-206在PCOS小鼠卵巢颗粒细胞中的表达比正常组明显增加,高浓度双氢睾酮和胰岛素可能会导致miR-206表达增加,miR-206可能参与多囊卵巢发病的过程.
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妊娠期高血压患者血清和胎盘组织miR-206的表达及意义
目的 探讨妊娠期高血压患者血清和胎盘组织中miR-206的表达水平及其临床意义.方法 以34例妊娠期高血压孕产妇、26例轻度子痫前期孕产妇及27例重度子痫前期孕产妇为研究对象,E选取32例正常妊娠孕产妇作为对照组,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测孕产妇血清及胎盘组织中miR-206的表达水平;收集各组的临床病理资料,并进行相关性分析.结果 与对照组相比,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清及胎盘组织中miR-206的表达水平均降低(F=79.10,129.18,P均＜0.05),进一步进行组间两两比较发现各组间差异均有统计学意义(P均＜0.05);相关性分析结果显示,对照组、妊娠期高血压组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组血清miR-206的表达水平与胎盘组织均呈正相关(r分别为0.402、0.512、0.416、0.397,P均＜0.05);此外,血清及胎盘组织中miR-206的表达与妊娠期高血压组孕产妇收缩压、舒张压、尿蛋白水平呈明显负相关(P均＜0.05),与孕产妇孕龄、清蛋白清蛋白、新生儿体重呈明显正相关(P均＜0.05).结论 miR-206在妊娠期高血压患者血清及胎盘组织中明显低表达,可能参与妊娠期高血压的发生及发展.
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精神分裂症患者外周血白细胞miR-198、miR-206的表达及意义
目的:探讨精神分裂症患者与健康人群外周血白细胞中miR-198、miR-206相对表达水平的差异.方法:选择精神分裂症患者40例作为病例组,性别、年龄匹配的40例健康人群作为对照组.采用实时荧光定量PCR技术检测两组个体外周血白细胞miR-198及miR-206的相对表达水平,阳性与阴性症状(PANSS)量表进行症状学评估.结果:病例组外周血白细胞miR-198、miR-206的相对表达明显高于健康对照组(t=20.363,P＜0.01;t=33.762,P＜0.01).miR-198与miR-206的相对表达与PANSS各分量表评分相关性均无统计学意义(均P＞0.05).结论:miR-198、miR-206在精神分裂症诊断与疾病易感基因研究中可能具有一定的价值.
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miR-1-3 p/206/613对LXRα和OATP1 B1蛋白表达的影响及其机制研究
目的:探究miR-1-3 p、miR-206和miR-613对肝X受体 α(LXRα)和有机阴离子转运多肽1 B1(OATP1 B1)蛋白表达及OATP1 B1转运能力的影响及其机制研究.方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα 和OATP1 B1 mR-NA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-qPCR、Western blot方法检测miR-1-3 p/206/613及LXRα 和OATP1 B1蛋白水平;采用LC-MS/MS方法检测HepG2细胞中瑞舒伐他汀(RSV)的含量;应用双荧光素酶报告基因法,研究miR-1-3 p/206/613影响LXRα 和OATP1 B1表达的分子机制.结果:预测结果表明miR-1-3 p/206/613与LXRα 和OATP1 B1 mRNA 3'-UTR互补配对,且具有较高的特异性、保守性及结合稳定性.与对照组相比,miR-1-3 p/206/613 mimics能明显下调HepG2细胞中LXRα 蛋白表达水平16.5％、16.0％、25.1％,OATP1 B1蛋白30.4％、30.5％、44.4％;相反,miR-1-3 p/206/613 inhibitors明显上调LXRα 蛋白表达水平13.3％、13.3％、16.0％,OATP1 B1蛋白25.0％、25.6％、30.4％.当RSV浓度为5、60、125μmol/L时,miR-1-3 p/206/613 mimics显著减少HepG2细胞对RSV的摄取至对照组的0.50、0.19、0.30倍,0.49、0.24、0.23倍和0.64、0.48、0.31倍;与之相反,miR-1-3 p/206/613 inhibitors上调1.26、1.59、2.07倍,1.97、2.44、2.63倍,2.22、2.86、2.93倍.与对照组相比,miR-1-3 p/206/613 mimics或miR-1-3 p/206/613 inhibi-tors,pGL/LXRα-WT报告基因荧光素酶活性分别下降38.5％、32.5％、32.8％ 或升高137.0％、75.8％、55.7％,而pGL/LXRα-Mut报告基因荧光素酶活性未见明显改变;同上,pGL/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性下降24.3％、28.9％、32.1％或升高33.5％、48.3％、61.6％,而pGL/OATP1 B1-Mut报告基因荧光素酶活性也未见明显改变.结论:miR-1-3 p/206/613既可通过直接靶向作用于OATP1 B1 mRNA 3'-UTR而调控OATP1 B1的蛋白表达和转运功能,也可通过靶向作用于LXRαmRNA 3'-UTR而发挥间接调控作用.
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超声介导载miR-206微泡联合顺铂对小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤抑制作用的实验研究
目的:探讨超声介导的自制载miR-206微泡联合顺铂对小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤的协同抑制作用.方法:薄膜水化法制备载miR-206脂质微泡,并检测其一般特性.建立小鼠U14宫颈癌细胞皮下移植瘤模型,将小鼠随机分为对照组(control)、空微泡+超声组(MB+US)、miR-206微泡+超声组(206MB+US)、顺铂组(cisplatin)、miR-206微泡+超声联合顺铂组(206MB+US+cisplatin),每组6只.实验期间记录小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织形态;免疫组化法检测各组肿瘤组织中Bax、Bcl-2、c-met蛋白表达及肿瘤血管密度;RT-PCR检测各组miR-206基因表达.结果:微泡呈圆形,表面光滑.与对照组比较,206MB+US、cisplatin、206MB+US+cisplatin组均对肿瘤生长有抑制作用,肿瘤体积抑瘤率降低,差异有统计学意义(P<0.05).其中206 MB+US+cisplatin组对肿瘤生长有明显的抑制作用,肿瘤体积抑瘤率较其他组明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01).免疫组化结果显示,206 MB+US、cisplatin、206 MB+US+cisplatin组与对照组相比,肿瘤血管密度减低,Bcl-2和c-met蛋白表达量降低,而Bax表达量与之相反.RT-PCR结果显示,与对照组相比,206MB+US、cisplatin、206MB+US+cisplatin组miR-206基因表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05).结论:超声介导载miR-206微泡联合顺铂协同抑制U14宫颈癌移植瘤的生长.
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miR-206抑制 SDF-1/CXCR4信号活化诱导的乳腺癌细胞迁移和增殖
目的：研究 miR-206在乳腺癌细胞中的作用及其机制。方法 MDA-MB-231细胞分别转染miRNA-NC和 miR-206 mimic 后，荧光显微镜观察转染效率。同时，细胞添加不同剂量（20 ng·mL -1和40 ng·mL -1）基质细胞衍生因子1（SDF-1）处理，利用 Transwell 法检测细胞迁移，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，qRT-PCR 法检测细胞中 CXC 趋化因子受体4（ CXCR4）mRNA 表达水平，Western blot 检测细胞中CXCR4蛋白表达水平。结果 miRNA-NC 组和 miR-206 mimic 组细胞转染效率分别为（83.4±6.3）％和（87.6±8.3）％。与对照组比较，SDF-1显著促进细胞迁移和增殖（P ﹤0.05）。miR-206 mimic 转染明显抑制细胞迁移和增殖（ P ﹤0.05）。SDF-1处理促进细胞中 CXCR4 mRNA 和蛋白的表达水平（ P ﹤0.05）。miR-206 mimic 转染则抑制 CXCR4蛋白表达水平（P ﹤0.05），但不影响 CXCR4 mRNA 表达（P ﹥0.05）。结论 miR-206通过抑制 CXCR4表达拮抗 SDF-1诱导乳腺癌细胞迁移和增殖作用。
关键词： miR-206 乳腺癌 基质细胞衍生因子-1 CXC 趋化因子受体 4 迁移 增殖 -
miR-206通过调节ERα水平影响乳腺癌细胞MCF-7对他莫昔芬敏感度的初步研究
目的 探讨乳腺癌细胞株MCF-7中miR-206能否调节ERα表达水平并影响乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度.方法 将miR-206 mimic、miR-206 inhibitor及相应阴性对照(miR-206 mimic NC、miR-206 inhibitor NC)分别转染乳腺癌MCF-7细胞,RT-PCR法检测转染后各组乳腺癌细胞中miR-206和ERα mRNA的表达量,用5μg/ml他莫昔芬处理MCF-7细胞后,MTT法检测不同转染组细胞增殖情况.结果 miR-206mimic组中乳腺癌细胞miR-206表达升高,ERα mRNA表达降低;miR-206 inhibitor组中乳腺癌细胞miR-206表达降低,ERα mRNA表达升高.他莫昔芬作用24 h后,miR-206 mimic组与阴性对照组(miR-206 mimic NC)的乳腺癌细胞增殖抑制差异无统计学意义(t=-1.169,P=0.276);miR-206 inhibitor组的乳腺癌细胞增殖抑制明显强于阴性对照组(miR-206 inhibitor NC)(t=-3.054,P=0.016).结论 下调miR-206表达可以增加ERα阳性乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感度.
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失神经支配大鼠腓肠肌的演变及其miR-206和myoD表达的变化
目的 通过观察大鼠腓肠肌失神经支配后肌萎缩演变,探讨肌肉特异性miR-206及肌生成促进因子(myoD)在失神经性肌萎缩中的变化规律.方法 2015年6月至2016年1月,应用40只SPF级SD大鼠建立后肢失神经支配腓肠肌模型,根据腓肠肌失神经支配时间按照既定标准随机分为0d组、1d组、7d组、14 d组和28 d组,每组8只.根据失神经支配的时间点切取实验侧和对照侧腓肠肌标本进行检测,通过测定腓肠肌的湿重比和肌纤维横截面积比,评估腓肠肌萎缩的程度;并采用qPCR法检测腓肠肌中miR-206和myoDmRNA的含量,Western blot检测腓肠肌中myoD蛋白的表达.结果 大鼠实验侧腓肠肌随着失神经支配时间的延长,腓肠肌的萎缩程度逐渐加重,失神经腓肠肌肌腹逐渐减小,湿重比迅速下降,肌纤维横截面积逐渐减少,胶原纤维增多,结构逐渐紊乱;失神经支配0d、1d、7d、14d和28 d组腓肠肌湿重比分别为0.99±0.04、0.92±0.07、0.68±0.11、0.39±0.06、0.27 ±0.07,肌纤维横截面积比为分别为0.99±0.02、0.96 ±0.04、0.51±0.09、0.34±0.08、0.23±0.03,除1d组外,其余各实验组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).失神经支配后,腓肠肌中miR-206、myoD mRNA以及myoD蛋白的表达水平呈现早期表达升高,失神经支配7d时达峰值,随后miR-206和myoD的表达水平均不同程度下降,总体上二者呈现的变化趋势相似.失神经支配0d、1d、7d、14 d和28 d组miR-206相对表达量分别为0.24±0.06、0.34±0.04、0.68±0.04、0.49±0.07、0.25±0.03,myoD mRNA相对表达量分别为0.41±0.06、0.49±0.09、0.93±0.06、0.66±0.03、0.39±0.04,除28 d组外,其余各实验组与对照组相比miR-206、myoD mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05).失神经支配0d、1d、7d、14 d和28 d组myoD蛋白相对表达量灰度比分别为1.03±0.05、1.06±0.06、1.42±0.10、0.66±0.13、0.24±0.07,除1d组外,其余各实验组与对照组相比,myoD蛋白相对表达量灰度比差异均有统计学意义(P＜0.05).对实验组(1d、7d、14 d、28 d组)湿重比、肌纤维横截面积比、miR-206、myoD mRNA、myoD蛋白相对表达量灰度比进行组间分析,发现1d组与7d组、1d组与14 d组、1d组与28 d组、7d组与14 d组、7d组与28 d组、14 d组与28 d组中上述指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠腓肠肌的萎缩程度与失神经支配的时间有关,随失神经时间的延长,肌萎缩程度逐渐加重;并且腓肠肌中miR-206和myoD的表达规律相似,提示两者之间可能具有内在调控关系.
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miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用
探讨 miR-206/CDK4信号在卵巢癌生长和化疗增敏中的作用.方法 分别提取卵巢癌和癌旁组织总RNA并将它们逆转录成cDNA.实时荧光定量PCR检测miR-206在卵巢癌和癌旁组织中差异表达.在将miR-206 mimic和其特异抑制剂以及它们各自对照分别转染卵巢癌细胞后,MTT和流式细胞仪用于检测细胞增殖和细胞周期的改变.Western blot和荧光素酶报告基因活性分析鉴定miR-206的靶基因和其调控信号通路.miR-206诱导5-Fu对卵巢癌细胞化疗增敏作用被鉴定.结果 荧光定量PCR分析显示,miR-206在卵巢癌组织中表达明显下调.在转染miR-206 mimics后,细胞的增殖明显抑制,细胞周期也出现G/S转化障碍.机制分析显示,miR-206 mimic能明显抑制CDK4,c-Myc和CCNDl表达.与之相反,在使用miR-206特异抑制剂后,细胞的增殖能力明显恢复,而CDK4表达能明显增高.荧光素酶报告基因活性分析显示,miR-206能直接结合CDK43'UTR.药敏分析显示,miR-206能明显降低IC50值(P＜0.001),从而增加5-Fu对卵巢癌细胞的敏感性.结论 miR-206作为候选抑癌基因,直接靶击CDK4基因,从而抑制了卵巢癌细胞生长,并诱导了5-Fu对卵巢癌细胞的化疗敏感性.
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MiR-206通过靶向调控notch3参与香烟烟雾诱导的人肺微血管内皮细胞凋亡
目的 探讨miR-206在香烟烟雾提取物(CSE)诱导人肺微血管内皮细胞(HPMECs)凋亡中的分子作用机制.方法 实时定量PCR检测相关基因的表达水平;Western blot检测相关蛋白的表达水平;流式细胞技术检测细胞凋亡;萤光素酶实验验证miR-206与下游基因的结合位点.结果 不同浓度的CSE(0.5％～5.0％)处理能够促进HPMECs凋亡的同时增加miR-206的表达水平(P<0.05).MiR-206过表达促进HPMECs的凋亡,同时提高cleaved caspase-3和caspase-9蛋白水平(P<0.05);而miR-206低表达可以抑制CSE引起的HPMECs凋亡以及凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3和caspase-9)表达的上调(P<0.05).生物信息学分析以及萤光素酶实验结果证实miR-206可以通过作用于notch33'非翻译区从而抑制notch3的表达.进一步的营救实验发现,notch3过表达可以拮抗miR-206引起的HPMEC凋亡.结论 MiR-206在CSE处理的HPMECs中表达上调,miR-206低表达对CSE引起的凋亡起到抑制作用,这种作用可能是通过靶向调控notch3来实现的.
