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白细胞介素-4及紫杉醇抑制小鼠Lewis肺癌生长和转移的作用
有报道IL-4可以杀死各种类型的癌细胞,可促进细胞毒T细胞分化,促进巨噬细胞趋化及杀伤作用[1,2]。紫杉醇是一种从太平洋紫杉属短叶紫杉茎皮中提取的抗肿瘤药物,它属于细胞周期G2+M期阻滞剂,并能诱导肿瘤细胞凋亡[3]。紫杉醇作用机理独特,它促进微管蛋白的聚合,抑制其解聚,在美国,紫杉醇被誉为近15年来好的抗肿瘤新药。紫杉醇用于肿瘤治疗作用突出,但仍有一定的毒副作用,如能配合使用另一抗癌药,既能降低紫杉醇的毒副作用,又能增强其正作用,将极大提高紫杉醇的实用价值。为此,本研究使用IL-4、紫杉醇单用及联用治疗Lewis肺癌,观察它们对Lewis肺癌生长和转移的影响。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 实验动物:C57BL/6小鼠40只,雌雄各半,体重为18~22g,购自中国医学科学院医学实验动物研究所。1.1.2 Lewis肺癌可移植性瘤株:自中国医学科学院药物研究所药理室购荷瘤C57BL/6小鼠,经体内传代保种。1.1.3 L929传代细胞系:购自武汉大学典型培养物保藏中心。1.1.4 鼠重组IL-4:购自英国Peprotech公司。1.1.5 紫杉醇注射液(单体):中国医学科学院药物研究所方起程老师惠赠。浓度为6g/L,批号970110。1.2 实验方法1.2.1 40只C57BL/6小鼠每只于右腋皮下接种Lewis肺癌细胞(1.25×106个/鼠),接种后将动物随机分为四组,每组10只,雌雄各半,并编号,第5d开始给药。 Ⅰ 组为对照组:由Ⅰa 3只、Ⅰb 3只、Ⅰc 4只作三种条件对照。Ⅰa每日每只肿瘤局部皮下注射生理盐水0.2mL,连用10d。Ⅰb每日每只腹腔注射生理盐水0.2mL,连用10d。Ⅰc每日每只腹腔、瘤周同时注射生理盐水0.2mL,连用10d。 Ⅱ组为IL-4组:每日每只瘤周注射IL-4 50ng,连用7d。 Ⅲ组为紫杉醇组:每日每只腹腔注射紫杉醇10mg/kg,连用10d。 Ⅳ组为IL-4、紫杉醇合用组:每日每只腹腔注射紫杉醇5mg/kg,连用10d,瘤周注射IL-4 50ng,连用7d。1.2.2 从接种瘤后第7d,每隔一日用游标卡尺(精度为0.1mm)测量肿瘤的长径a和短径b,按公式V=ab2/2计算肿瘤体积,统计得出各组肿瘤平均体积,并绘制出生长曲线。1.2.3 接种后第18d断颈处死动物,称鼠重,完整仔细地剥离皮下肿瘤结节后再称鼠重,两者之差即为瘤重(为了保证取瘤均衡,解剖由一人进行)。取小鼠肺,用10%甲醛固定,在放大镜下计数肺转移灶。1.2.4 统计学处理:采用方差分析及q检验,两两比较采用t检验。
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Survivin对乳腺癌细胞株MCF-7耐药作用的影响
一、材料和方法1.材料:5-氟尿嘧啶(5-FU)为上海旭东海普药业公司产品;RPMI1640,小牛血清是Hycolone产品;脂质体购自Invitrogen公司;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒为Promega产品;Survivin全硫代修饰反义寡核苷酸(ASODN)(5′-CCCAGCCTTCCA-GCTCCTTG-3′)和错配链ASODN(5′-GCCACTCCTCGACTC-TCGTC-3′)由北京奥科公司合成;Survivin多克隆抗体购自深圳晶美公司;MCF-7由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供.
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中药复方对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响的实验研究
1实验材料中药材:中药人参(Radix Ginseng)、黄芪(Radix Astragali)、大黄(Radix et Rhizoma Rhei)、水蛭(Hirudo)均购自大连市医药采购供应站,由辽宁省药品检验所鉴定.细胞:大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供.试剂:MEM细胞干粉培养基Gibco;新生牛血清(FCS),鼎国生物;胰蛋白酶(1:250);乙二胺四乙酸二钠(EDTA);二甲基亚砜(DMSO);L-谷氨酰胺西宝生物;噻唑蓝(MTT)Amresco;其余试剂均为分析纯或生化纯试剂.主要仪器:HEAL FORCE HF-1200超净工作台,上海力申科学仪器有限公司;CK30-12PHP倒置显微镜,OLYMPUS;MDFU4086S-86382L超低温冰箱,日本三洋;HERAEUS BB16 CO2培养箱HERAEUS;TECAN GENIOS酶标仪,奥地利;FACSCalibur流式细胞仪,美国BD公司;96孔培养板;可调式移液器Eppendorf.
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白僵蚕粗提物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型TYR及其相关蛋白TRP-1、TRP-2mRNA表达的影响
1 材料1.1 药物 白僵蚕:购自北京同仁堂制药集团哈尔滨药店,水煎醇沉,用MEM增养基配制成0.5、1.0g/L.1.2 仪器 Tprofessional standad 96 PCR扩增仪:德国Biometra公司;HeλⅡosγ可见紫外分光光度计:美国热电公司;DYY-10C型电泳仪:北京市六一仪器厂;Chaml Gel 5000凝胶成像系统:北京赛智创业科技有限公司.1.3 细胞株 黑素瘤细胞(A375):由中国科学院细胞中心提供;人永生角质形式细胞(HaCat)细胞:购自武汉大学中国典型培养物保藏中心.1.4 试剂 MEM培养基、Trizol细胞裂解液:Gibco公司;逆转录试剂盒:BIOBASIC INC;DNA多聚酶链式反应(PCR)试剂盒:上海生物工程技术服务有限公司;DNA Marker D2000:北京TIANGEN公司;引物核苷酸片段:大连宝生物工程有限公司;6×DNA Loading Buffer、5×RNA Loading Buffer:北京Solarbio公司;其他试剂均为分析纯.
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中国科学院典型培养物保藏委员会组织系统
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琼脂块培养法选育林可霉素菌种
诱变育种对于不断获得高产优质菌株、提高微生物发酵单位和产品质量都有很大的促进作用。近年来人们尝试将琼脂块培养方法用于春雷霉素菌种的选育[1],我们将该方法用于林可霉素菌种的筛选。1 仪器与材料1.1 仪器 ZY-300抗生素效价测定仪(北京先驱威锋技术开发公司);摇床(江苏金坛市医疗仪器厂)。1.2 试药 N-甲基-N,-硝基-N-亚硝基胍(NTG,武汉大学培养物保藏中心)。1.3 菌种林可霉素产生菌(林肯链霉菌S.linconlensis:12—97;山东大学微生物系微生物研究所);藤黄八叠球菌(聊城市药品检验所生测室)。