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Id-1介导E2-2对PI3K/Akt信号通路 及内皮祖细胞增长的影响
目的 探讨分化抑制因子1(Id-1)和转录因子E2-2(E2-2)对PI3K/Akt通路的影响情况,并明确其在内皮祖细胞(EPCs)增长中的作用.方法 采用免疫共沉淀检测Id-1及E2-2是否存在相互作用.在EPCs细胞模型中,过表达及干扰Id-1及E2-2,采用CCK-8法检测细胞增长情况,RT-PCR和Western blot技术检测PI3K及Akt表达水平.结果 免疫共沉淀检测发现,Id-1及E2-2之间存在蛋白-蛋白相互作用.过表达Id-1可显著下调E2-2表达水平,上调PI3K/Akt表达水平,细胞增长能力增强;过表达E2-2后PI3K/Akt表达降低,细胞增长减弱;共转染Id-1及E2-2则发现,二者可协同影响PI3K/Akt表达水平.结论 Id-1和E2-2之间存在相互作用,Id-1对PI3K/Akt起促进作用,而E2-2则发挥抑制效应,二者协同调控PI3K/Akt信号通路,进而影响EPCs的增长.
关键词： Id1 E2-2 细胞增长 内皮祖细胞EPCs PI3K/Akt通路 -
Id1蛋白与妇科肿瘤
目的:总结Id1蛋白与妇科肿瘤的关系.方法:搜集整理新近发表的相关文献,进行归纳总结.结果:Id1蛋白的高表达与众多恶性肿瘤的发生、发展密切相关,在妇科肿瘤的发生发展中起着重要作用.结论:通过对Id1蛋白的研究,为妇科肿瘤早期诊断及治疗提供新的思路和依据.
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肺癌患者Id蛋白及基因的表达及其与临床参数的关系
目的 探讨4种分化抑制因子Id蛋白和基因在肺癌的表达及其与临床参数的关系.方法 采用组织芯片和免疫组织化学方法研究69例肺癌和34例癌旁正常肺组织中Id1、Id2、Id3、Id4蛋白表达水平;应用RT-PCR方法研究30例肺癌标本中Id1、Id2、Id3、Id4基因的表达并探讨其与各项临床病理特征的关系.结果 肺癌中4种Id蛋白和基因的表达水平均高于癌旁正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05);患者的性别、年龄、组织类型、临床分期与4种Id蛋白和基因的高表达无关(P>0.05);Id1、Id2、Id3蛋白在分化差与分化好的肺癌中的表达差异有统计学意义(P<0.05),Id1蛋白在有淋巴结转移与无淋巴结转移肺癌中的表达差异有统计学意义(P<0.05);Id1、Id3基因在有淋巴结转移与无淋巴结转移以及在分化程度差与分化程度好的标本中的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 4种Id基因作为癌基因在肺癌的发生、发展中发挥作用,其表达高低与肺癌的恶性程度有关,有可能成为肺癌的预后指标.
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分化抑制因子1促进血管内皮细胞增殖的机制研究
目的 探讨分化抑制因子1(Id1)促进血管内皮细胞增殖的机制.方法 构建p21启动子介导的报告基因p21-Luc,分别转染Eahy926细胞、Id1抑制(siId1细胞)或诱导表达(pcDNAId1)细胞、E2A抑制或诱导表达细胞,检测荧光素酶报告基因活性.提取Eahy926细胞总蛋白,分别加入Id1抗体,E12抗体和E47抗体,免疫共沉淀,以Eahy926细胞作为对照,Western blotting检测ld1、E12和EA7的表达情况.分别转染siId1、pcDNAId1载体于Eahy926细胞,与正常Eahy926细胞同步化培养48h后,行细胞染色,用流式细胞仪检测细胞G_1期的DNA含量.结果 与Eahy926细胞比较,siId1细胞、pcDNAE2A细胞p21基因启动子介导的荧光素酶活性增强,p21蛋白表达增高(P＜0.05,P＜0.01);pcDNAld1细胞、siE2A细胞p21基因启动子荧光素酶活性降低,p21蛋白表达减弱(P＜0.05).免疫共沉淀结果显示,Id1免疫共沉淀细胞裂解物中同时检测到E47/E12蛋白,E47/E12沉淀物中也能榆测到Id1.与正常Eahy926细胞比较,转染siId1的细胞G_1期DNA含量增多,约为Erday926细胞的3.3倍(P＜0.05),细胞周期停滞,细胞增殖缓慢;而转染pcDNAF2A的细胞G_1期DNA含量减少,约占正常的35.4%(P＜0.05),细胞周期演进,细胞增殖加快.结论 Id1可能通过与转录因子E47/E12作用,调节p21表达,进而促进血管内皮细胞增殖.
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分化抑制因子1对创伤组织新生血管化的促进作用观察
目的 探讨分化抑制因子1(Id1)对创伤组织新生血管化的促进作用及其机制.方法 经基因鉴定的SD大鼠16只,随机分为非创伤组(即正常对照组,n=4)和创伤组(包括Id1基因敲除组、Id1诱导表达组和Id1正常表达组,n=4).采用MTT法测定Id1对血管内皮细胞Eahy026增殖的影响,实时定量RT-PCR、蛋白免疫印迹技术检测创伤1、24、48、72h后创伤组织中新生血管化标志物血管内皮细胞生长因子(VEGF)、CD105、内皮素-1(ET-1)等的mRNA和蛋白表达变化,并用报告基因技术检测Id1对VEGF、CD105、ET-1基因表达的调控作用.结果 血管内皮细胞模型实验显示转染Id1siRNA后,血管内皮细胞Eahy926增殖明显受到抑制,以72h时显著(P<0.01);而转染pcDNAId1后,细胞增殖于48h时即增强(P<0.05),以72h时显著(P<0.01).创伤组Id1基因敲除大鼠VEGF、CD105的mRNA及蛋白表达均受到抑制(P<0.05),且伤后各时间点表达水平无明显变化.Id1诱导表达组24h后大鼠Id1、VEGF、CD105表达均明显增强(P<0.05),于72h达高峰(P<0.01),而ET-1 mRNA水平在伤后24h升高,48h达高峰(P<0.05),72h下降.报告基因检测结果显示,Id1敲除后VEGF、CD105荧光素酶活性明显受到抑制(P<0.05),而Id1基因诱导表达后VEGF、CD105活性明显增强(P<0.01),但Id1对ET-1的表达无明显影响.结论 Id1能有效促进血管内皮细胞Eahy926增殖,调节血管内皮细胞、创伤组织中VEGF、CD105以及ET-1的表达,在组织细胞新生血管化中起重要作用.
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分化和DNA结合抑制因子1基因对MDA-MB-231乳腺癌细胞株MMP9表达的影响
目的 筛选成功转染Id1 miRNA真核表达载体乳腺癌MDA-MB-231细胞系,观察对乳腺癌细胞的对Id1、MMP9表达的影响.方法 构建Id1 miRNA真核表达载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株以杀稻瘟霉素筛选稳定表达的细胞株.经RT-PCR方法鉴定其对Id1、MMP9表达的影响.结果经过筛选,获得转染Id1 miRNA真核表达载体稳定表达的MDA-MB-231细胞系.经RT-PCR方法鉴定,结果表明转染Id1 miRNA真核表达载体的乳腺癌MDA-MB-231细胞株其Id1、MMP9表达水平低于对照组,且Id1、MMP9表达水平正相关.未转染组与阴性对照转染组无明显差异.结论 本实验成功筛选出稳定表达Id1 miRNA的乳腺癌细胞株,证实Id1 miRNA真核表达载体构建成功干扰有效,并且Id1与mmp9表达相关,为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异,或详细了解其分子作用机制奠定了基础.
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恩度联合顺铂对胃癌种植瘤生长与血管生成的影响
目的 观察重组人血管内皮抑制素恩度以及顺铂对裸鼠胃癌移植瘤生长以及微血管密度的影响.方法 0、5 mg/kg恩度,5 mg/kg体积顺铂,5 mg/kg恩度及5 mg/kg顺铂干预人胃癌荷瘤小鼠,免疫组化法检测CD34(MVD)表达情况,应用RT-PCR和Western印迹方法分别从mRNA和蛋白水平检测ID1、VEGF表达量的变化,透射电镜检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,恩度组ID1、VEGF、MVD表达量减少,顺铂组肿瘤减小,细胞凋亡量增加；联用组肿瘤减,细胞凋亡多,而MVD表达量与恩度组无明显差异.结论 恩度可以通过抑制ID1表达减少胃癌血管生成,增加化疗药物敏感性.
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去甲斑蝥素对H446细胞Id1mRNA表达的影响
目的:观察去甲斑蝥素对小细胞肺癌H446细胞Id1mRNA表达的影响.方法:分别利用MTT法检测细胞生长活性；用划痕实验分析细胞迁移能力；采用Hoechst染色观察细胞凋亡；用实时荧光RT-PCR法测定H446中Id1mRNA的表达.结果:去甲斑蝥素对H446细胞的生长有明显的抑制作用,细胞的生长抑制率和凋亡率明显增加,细胞迁移距离明显缩短.去甲斑蝥素可抑制细胞内Id1mRNA的表达,其相对定量随去甲斑蝥素的浓度增大而减少.结论:在H446细胞中,去甲斑蝥素能抑制Id1mRNA的表达,这可能是去甲斑蝥素抑制细胞生长,迁移和诱导细胞凋亡的重要机制之一.
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ID1对大鼠C6细胞侵袭转移能力的影响
目的:观察ID1对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)侵袭转移能力的影响.方法:以C6细胞为研究对象,ID1 siRNA通过脂质体转染C6细胞,western blot检测C6细胞中ID1、P-NF-K Bp65蛋白的表达、Elisa法检测细胞培养上清MMP-9的含量,Transwell小室观察成的转移侵袭能力.结果:干扰ID1后能显著降低C6细胞中P-NF-K Bp65蛋白、细胞培养上清中MMP-9的含量(P＜0.01),降低C6细胞的转移侵袭能力(P＜0.01).结论:干扰ID1能抑制C6细胞的转移侵袭,其机制可能与抑制C6细胞中P-NF-K Bp65蛋白、MMP-9的表达有关.
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Id1蛋白在肿瘤发生发展中的作用
Id(inhibitors of differention/binding)蛋白即分化抑制因子,又称DNA结合抑制因子,哺乳动物细胞中存在Id1,Id2,Id3,Id4四种亚型.该分子具有非常广泛的生物学作用,参与细胞周期调控过程,包括细胞生长、分化及胚胎发育.
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由Id1介导的MMP-2、MMP-9对胃癌生成的调控作用
背景与目的:肿瘤血管生成是肿瘤的一大重要特性,肿瘤微血管密度已被作为许多恶性肿瘤预后的一个重要指标.分化抑制因子(Id)是新近发现的与血管生成密切相关的分子.Id1是Id因家族中研究较多的基因,在促进肿瘤的转移和血管生成中发挥重要的作用.本文研究胃癌中Id1蛋白的表达及其对基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)表达的影响.方法:采用免疫组织化学方法检测Id1及MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达;采用RT-PCR和western blot方法检测转染Id1特异性小干扰RNA(Id1-siRNA)的SGC7901细胞中删P-2和MMP-9的表达,并用明胶酶谱实验进一步检测Id1-siRNA细胞中MMP-2、MMP-9的活性;采用免疫组织化学方法和Western blot检测Id1-siRNA细胞和空载体转染细胞在裸鼠体内成瘤组织中MMP-2、MMP-9的表达;利用删PsELISA试剂盒检测不同处理组细胞上清液中MMP-2、MMP-9的含量.结果:免疫组织化学结果显示,在胃癌组织中Id1和MMP-2、MMP-9呈共表达;成功建立表达特异性Id1-siRNA细胞系,Western blot和RT-PCR结果提示不同克隆的转染效率不同;转染Id1-siRNA的SGC7901细胞中MMP-2、MMP-9的蛋白及mRNA表达水平均低于对照组;明胶酶谱实验显示,Id1-siRNA细胞组的MMP-2、MMP-9的活性较对照细胞组下降;Id1-siRNA细胞处理后的裸鼠体内成瘤组织中MMP-2、MMP-9的表达均显著降低.结论:Id1和MMP-2、MMP-9在胃癌组织中共表达;Id1可正性调控MMP-2、MMP-9的表达水平,抑制Id1的表达可减弱MMP-2、MMP-9的表达.在胃癌发生发展中Id1可能通过调控MMP-2、MMP-9的表达而发挥作用.
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ID1蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 分析人胃癌组织中分化抑制因子1 (ID1)的表达与临床病理参数之间的关系,初步探讨ID1在胃癌发生、发展及患者预后评估中的作用.方法 免疫组织化学EliVision法检测91例胃癌组织、30例正常胃黏膜和35例不典型增生胃黏膜组织中ID1蛋白的表达,分析ID1蛋白表达与胃癌的分化程度、浸润深度、临床TNM分期和淋巴结转移的关系,绘制生存曲线,Log-rank法单因素分析肿瘤临床病理学特征和ID1蛋白的表达与患者预后的关系.结果 免疫组织化学染色结果显示:胃癌组织中ID1蛋白的表达阳性率为63.7％ (58/91),显著高于正常胃黏膜组织(10.0％)和不典型增生胃黏膜组织(42.9％),差异均有统计学意义(P＜0.05).统计学分析结果显示,胃癌组织中ID1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).Log-rank法单因素分析结果显示,肿瘤浸润深度与淋巴结转移与胃癌患者的预后有关(P＜0.05),而与患者年龄、性别及肿瘤直径、大体类型、分化程度、Lauren分型和ID1蛋白的表达等无关(P＞0.05).结论 ID1在胃癌组织中表达异常,可能与胃癌的发生和发展有关,有望为胃癌治疗提供新的治疗靶点,但并非是胃癌患者预后的评估指标.
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食管鳞状细胞癌组织中Id1和Id2的表达及其意义
目的 研究Id1、Id2在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测122例食管鳞状细胞癌及90例癌旁正常组织中Id1、Id2的表达情况.结果 122例食管鳞状细胞癌中Id1、Id2表达高于癌旁正常组织(P0.05);Id1表达高分化与低分化组差异有显著性(P<0.05);Id2的表达与肿瘤的分化程度成负相关(P<0.05),且与肿瘤浸润深度正相关(P<0.05).结论 Id1、Id2的高表达可能是食管鳞状细胞癌一个重要的分子学改变,Id2可作为判断食管鳞状细胞癌生物学行为的潜在指标.
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Id1在乳腺癌中的表达及临床意义(附136例分析)
目的 检测Id1在乳腺癌组织中的表达,探讨其与组织病理学的关系及其影响预后的可能机制.方法 应用免疫组织化学染色方法(SP法)检测136例乳腺癌组织中Id1的表达情况,回顾性分析Id1蛋白表达与乳腺癌临床病理学指标和预后的关系.结果 本组病例Id1表达阳性率为55.88%(76/136),对照组阳性率为9.38%(3/32),差异有统计学意义(P<0.01).乳腺癌Id1表达与病理类型、组织分化、腋窝淋巴结转移、远处转移、疾病分期明显相关;与发病年龄、激素受体状况、肿瘤大小等无相关性(P>0.05);与患者预后相关,Id1表达阳性的乳腺癌患者5年生存率为75.1%,Id1表达阴性的乳腺癌患者5年生存率为94.3%,Id1表达阴性的患者预后较好.结论 ID1表达于乳腺癌细胞,与组织病理类型、细胞分化、腋窝淋林巴结转移、远处转移及疾病分期明显相关.可作为预后判断的参考指标.
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NF-κB在乳腺癌中的表达与其生物学行为的关系
目的 检测NF-κB/p65在乳腺癌组织中的表达,探讨它们的临床病理学意义及其影响预后的可能机制.方法 应用免疫组织化学染色方法(SP法)检测136例乳腺癌组织中NFkB的表达情况,回顾性分析NF-κB/p65表达与乳腺癌临床病理学指标和预后的关系.结果 1.NF-κB/p65在乳腺癌组织中高表达.乳腺癌的NF-κB/p65表达与病理类型,组织分化,是否腋窝林巴结转移,是否远处转移,疾病分期明显相关(P＜0.01).2.F-κB/p65在乳腺癌组中的表达与化疗敏感性相关(P＜0.01).NF-κB/p65阳性病例化疗后PR+CR比率较低.3.乳腺癌NF-κB/p65表达与患者预后相关,NF-κB/p65表达阳性的乳腺癌患者5年生存率为75.1%,NF-κB/p65表达阴性的乳腺癌患者5年生存率为94.3%,两者的生存率差别有显著性意义(χ2=58.42,P＜0.05),NF-κB/p65阴性患者预后好.结论 1.NF-κB/p65在乳腺癌组织中高表达.乳腺癌的NF-κB/p65表达与病理类型,组织分化,是否腋窝林巴结转移,是否远处转移,疾病分期明显相关.2.NF-κB/p65阴性患者预后好.
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Id1与肝脏疾病
Id蛋白也称分化抑制因子或DNA结合抑制因子,是体内重要的转录因子调节蛋白,参与细胞发育、调节细胞分化,也推动细胞周期、促进肿瘤的发生.本文对Id1在肝脏疾病,尤其是肝癌、肝纤维化形成过程中的作用作一概述.
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分化抑制因子-1在食管鳞癌组织中的表达及意义
目的 探讨分化抑制因子-1(Id1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组化方法检测57例ESCC、34例癌旁不典型增生组织及57例正常食管黏膜组织中Id1蛋白的表达。结果 ESCC、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中Id1蛋白的阳性表达率依次降低,分别为54。4％ (31/57)、20。6％ (7/34)和0％ (0/57),组间比较差异有统计学意义(P＜0。05)；Id1蛋白的表达均与ESCC的分化程度、浸润深度和淋巴结转移密切相关(P＜0。05)。结论 Id1蛋白的表达与ESCC的发生、发展和转移密切相关,可作为ESCC的一种肿瘤标记物,联合检Id1蛋白在评估ESCC预后方面具有一定的临床价值。
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姜黄素对PC3和H446细胞中Id1mRNA表达的影响
目的 观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC3和小细胞肺癌H446细胞Id1mRNA表达的影响.方法 分别采用MTT法检测细胞生长活性；划痕实验检测细胞迁移能力；Hoechst染色检测细胞凋亡；实时荧光RT-PCR法检测PC3和H446中Id1mRNA的表达.结果 姜黄素明显抑制PC3和H446细胞中Id1mRNA的表达,其相对定量随姜黄素浓度增大而减少；同时PC3和H446细胞的生长抑制率和凋亡率增加,细胞迁移距离减少.结论 在PC3和H446细胞中,姜黄素可能通过抑制Id1基因表达发挥其抑制细胞生长、迁移和诱导细胞凋亡的作用.
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分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响
目的 探讨分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Id1表达调节后MG-63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Id1下调表达后,MG-63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Western blotting技术检测Id1下调表达后对p-AKT水平的影响.结果 本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Id1表达后,可以明显抑制MG-63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Id1的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Id1的真核表达质粒,转染Id1过表达质粒后,并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速.结论 分化抑制因子Id1可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖.
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Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用
目的 探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用.方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3的表达；将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组.通过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Westem blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白表达情况；通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响.结果 Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高(P＜0.05)；双敲低Id1/Id3,子宫内膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P＜0.05),P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高(P＜0.05),RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异；Id 1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力和粘附能力均抑制(P＜0.05).结论 Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案.
