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Id1强制表达对血管内皮细胞株ECV-304增殖能力的影响
[目的]为深入研究hCASK功能,构建Id1真核表达载体并转染ECV-304细胞,筛选出Id1强制表达细胞株,观察Id1上调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响. [方法]采用RT-PCR方法获取编码Id1的cDNA序列,并将其导入真核表达载体成功构建pIRES2-EGFP-ld1重组表达质粒.将重组质粒转染人ECV-304细胞株,经G418加压筛选,成功筛选出Id1强制表达的细胞株.用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中Id1基因的表达水平.采用流式细胞技术、细胞计数的方法观察筛选出的细胞株增殖能力的变化. [结果]成功建立了Id1强制表达的ECV-304细胞株.同未转染细胞相比,Id1强制表达细胞株中G0/G1细胞比率下降约4.8%,G2M期细胞比率上升约26.3%,增殖指数明显增高,细胞增殖能力增强. [结论]Id1强制表达细胞株的成功建立和鉴定为CASK、Id1基因功能研究提供了有效手 段.Id1的上调表达可导致ECV-304细胞增殖能力增强.
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胆囊癌中Bim ID1和E2F1的表达及生物学意义
目的 探讨Bim、ID1和E2F1蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义.方法 应用组织芯片技术,免疫组织化学SP法对70例胆囊癌、20例高级别上皮内瘤变、30例低级别上皮内瘤变和20例胆囊炎症组织进行Bim、ID1和E2F1蛋白检测.结果 在胆囊癌、高级别上皮内瘤变、低级别上皮内瘤变和炎症组织中,Bim阳性表达率分别为27.1％,30％,60％,65％,四组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高级别上皮内瘤变与低级别上皮内癌变之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).ID1表达在四组中的阳性率分别为70％,65％,23.3％,20％,四组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变之间,差异有统计学意义(P＜0.05).E2F1表达在四组中的阳性率分别为84.3％,75％,16.7％,10％,四组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变之间,差异有统计学意义(P＜0.05).Bim与胆囊癌分化程度负相关(P＜0.05);与临床Nevi分期无关(P＞0.05).ID1和E2F1与临床Nevin分期相关(P＜0.05),与胆囊癌分化程度无关(P＞0.05).Bim分别与ID1、E2F1负相关(P＜0.05).生存分析Bim阳性患者生存率显著高于ID1和E2F1阳性患者(P＜0.05).结论 Bim、ID1和E2F1与胆囊癌的发生相关;联合检测Bim、ID1和E2F1对胆囊癌早期诊断及判断预后有重要的指导意义.
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沉默Id1基因表达对卵巢癌细胞生长影响的实验研究
目的:通过构建人卵巢癌SKOV3 Id1特异性siRNA慢病毒载体及其裸鼠移植瘤模型,观察沉默分化抑制因子(inhibitcr of differentiation-1,Id1)表达对卵巢癌SKOV3生长的影响.方法:根据Id1基因序列设计并合成的siRNA片段转染SKOV3细胞,将转染细胞分为四组:cell+ lv-shRNA-Id1(实验组)、cell+ lv-shR-NA-NC(质粒对照组)、cell+ lv-control(空病毒对照组)、cell(空白对照组),筛选出稳定转染的SKOV3细胞克隆,48小时后检测细胞生长活性.将40只裸鼠随机分为四组,分别接种上述转染成功的细胞,30天后称取瘤体重量,计算抑瘤率;然后通过Western blotting法检测移植瘤中Id1蛋白的表达.结果:在体外试验中,实验组的细胞生长活性显著低于空白对照组,具有统计学意义(P＜0.05),三对照组间无明显差异(P＞0.05);体内实验显示,实验组平均瘤重均低于其他三对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05),三对照组间瘤重差异无统计学意义(P＞0.05);实验组、质粒对照组、空病毒组抑瘤率分别为45.98％、4.84％、4.50％;Westernblotting结果显示,实验组中Id1表达较对照组明显下调(P＜0.05).结论:沉默Id1基因能抑制卵巢癌细胞的生长,有望成为卵巢癌治疗新靶点.
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Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达
目的:探讨Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达情况,为肺癌干细胞的基因靶向治疗提供理论依据.方法:应用于细胞无血清培养技术培养A549细胞肿瘤细胞球,采用克隆形成实验检测肺癌肿瘤球细胞增殖能力,流式细胞术检测ABCG2在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况,Westem blotting检测Id1在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况.结果:与贴壁细胞相比,人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞具有较强的克隆能力,且高表达ABCG2,符合肺癌干细胞的特点,Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞中高表达.结论:Id1可能成为靶向肺癌干细胞肺癌治疗的靶点.
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Id1在肾细胞癌中的检测及其意义
目的:含双螺旋环的Id1(inhibitor of DNA binding or inhibitor of differentiation),在器官组织中的表达具有组织特异性.近年研究显示其高表达与某些肿瘤的发生、发展密切相关.本研究检测了肾正常组织、肾良性囊肿和肾癌中Id1蛋白的表达,并分析其表达量与肾癌细胞分化类型的相关性.方法:用免疫组化SP法检测10例肾癌旁正常组织、38例肾细胞癌和10例肾良性囊肿组织中Id1的表达.用JD801形态图像分析系统对图像进行定量分析.结果:Id1蛋白在正常肾组织中在肾小管上皮细胞内高表达;在肾良性囊肿组织中表达量明显减少;在肾癌细胞中均阳性表达(38/38).颗粒细胞癌中Id1的表达水平高,其次为混合细胞癌,透明细胞癌表达量较少.结论:人正常肾小管上皮细胞内高表达Id1;良性囊肿组织中Id1表达减少;肾癌组织中Id1蛋白有广泛表达,且分化差的癌细胞类型表达量高,表明Id1与肾癌细胞的恶性度和预后密切相关.
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NO、iNOS在卵巢癌中的表达及iNOS与卵巢癌生物学行为、ID1表达的相关性
目的:探讨NO、iNOS在卵巢癌组织中的表达及iNOS与卵巢癌生物学行为的关系,并分析ID1、iNOS在卵巢癌中表达的相关性.方法:采用硝酸还原酶法检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中NO浓度;采用免疫组化SP法检测三种组织中iNOS蛋白表达,并对iNOS表达与卵巢癌临床病理参数进行相关性分析;采用SP免疫组化检测卵巢癌组织中ID1表达,并对ID1、iNOS两指标表达进行相关性分析.结果:卵巢癌组织中NO浓度明显高于正常卵巢组织,差异具有统计学意义.iNOS在卵巢癌组中表达高于良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组,比较差异具有统计学意义(P＜0.05).iNOS表达与卵巢癌淋巴结转移、临床分期、病理分级明显相关.卵巢癌组织中iNOS与ID1表达之间存在明显相关性(P＜0.05).结论:iNOS和NO过度表达参与了卵巢癌的发生发展过程,并且iNOS与淋巴结转移、TNM分期和病理分级有关;卵巢癌中iNOS和ID1的表达具有正相关性.
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实时荧光定量PCR法检测卵巢良、恶性肿瘤中Id1mRNA的表达
目的:检测Id1 mRNA在人卵巢良、恶性肿瘤组织中的表达及其意义.方法:用SYBR GreenI嵌合荧光法进行实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测Id1 mRNA在人良性卵巢囊肿和卵巢癌组织中的相对定量,分析Id1 mRNA的含量变化与卵巢良、恶性病变的关系.结果:Id1 mRNA在卵巢癌组织中的含量明显高于良性卵巢囊肿组织(P<0.01).卵巢癌组织分化低和恶性度高的组织Id1mRNA的表达量明显高于分化高或恶性程度低的组织.高Id1mRNA表达和患者预后呈显著相关(P<0.001).结论:卵巢癌组织中Id1 mRNA表达显著高于良性囊肿组织,而且与癌组织恶性度和预后密切相关.Id1 mRNA实时定量检测有助于从基因转录水平对卵巢癌进行早期辅助诊断并初步判断预后.
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龟板促进Parkinson病大鼠黑质骨形态发生蛋白信号分子的表达
为了进一步探讨骨形态发生蛋白(BMP)/分化抑制因子(Id)通路在龟板抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡中的作用,本实验用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠芹侧黑质致密带沣射2μl造成PD模型,设立正常对照组、模型组和龟板组,用免疫组织化学染色方法观察PD大鼠中脑黑质骨形态发生蛋白IB受体(BMPR-IB),Smad8和Id1阳件细胞数目;用Western-blotting检测BMPR-IA、BMPR-IB、BMPR-Ⅱ、Smad1、Smad5、Smad8和Id1蛋白表达水平的变化.免疫组化染色显示龟板组PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05).Western-blotting结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质BM-PR-IB,Smad8和Id1的蛋白表达水平高于模型组,而BMPR-IA,BMPR-Ⅱ,Smad1和Smad5没有被检测出.以上结果表明龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的表达,这可能足其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制.
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Id1真核表达载体的构建及胃黏膜上皮细胞系的转染
目的: 扩增Id1基因,构建Id1真核表达载体pcDNA3.1/V5HisA-Id1. 方法: 以胃癌细胞SGC7901cDNA为模板,以Id1基因编码区外的两段特异性序列为引物,获得Id1基因的全长. 将目的基因插入载体pUCm-T,经序列测定证实后,亚克隆至pcDNA3.1/V5HisA并经酶切鉴定. 采用脂质体转染的方法将重组质粒稳定转染至胃粘膜上皮永生化细胞系GES-1中. 结果: 经RT-PCR方法扩增出大小为608 bp的基因片断,序列测定其编码序列及读框正确. 亚克隆经酶切鉴定正确. 经过8 wk G418筛选后,获得稳定表达Id1的细胞亚系. 经Western blotting 证实,Id1蛋白表达水平高于对照组. 结论: 成功地构建了Id1真核表达载体,为进一步研究其在胃癌细胞中的作用奠定了基础.
