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Id-1介导E2-2对PI3K/Akt信号通路 及内皮祖细胞增长的影响
目的 探讨分化抑制因子1(Id-1)和转录因子E2-2(E2-2)对PI3K/Akt通路的影响情况,并明确其在内皮祖细胞(EPCs)增长中的作用.方法 采用免疫共沉淀检测Id-1及E2-2是否存在相互作用.在EPCs细胞模型中,过表达及干扰Id-1及E2-2,采用CCK-8法检测细胞增长情况,RT-PCR和Western blot技术检测PI3K及Akt表达水平.结果 免疫共沉淀检测发现,Id-1及E2-2之间存在蛋白-蛋白相互作用.过表达Id-1可显著下调E2-2表达水平,上调PI3K/Akt表达水平,细胞增长能力增强;过表达E2-2后PI3K/Akt表达降低,细胞增长减弱;共转染Id-1及E2-2则发现,二者可协同影响PI3K/Akt表达水平.结论 Id-1和E2-2之间存在相互作用,Id-1对PI3K/Akt起促进作用,而E2-2则发挥抑制效应,二者协同调控PI3K/Akt信号通路,进而影响EPCs的增长.
关键词： Id1 E2-2 细胞增长 内皮祖细胞EPCs PI3K/Akt通路 -
PI3k/Akt通路参与二仙汤抑制顺铂所致卵巢颗粒细胞凋亡的作用
目的:观察顺铂干预大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,从而探讨二仙汤含药血清经PI3k/Akt通路抑制卵巢颗粒细胞凋亡的作用机制.方法:SD雌性大鼠30只,随机分为3组,分别为生理盐水组、补佳乐组、二仙汤组.心脏取血,制备药物血清.SD大鼠卵巢颗粒细胞,经培养贴壁后,用顺铂损伤大鼠原代卵巢颗粒细胞.经各组药理血清作用后,应用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,并对各实验组大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡情况进行分析.应用免疫组化法,测定各分组PI3k、Akt、p-Akt蛋白的表达情况,并进行图像分析.结果:流式细胞凋亡结果显示,二仙汤可以降低顺铂损伤后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡率.免疫组化结果显示,PI3k、p-Akt、Akt在细胞质内均有表达,可见棕黄色阳性物质;而二仙汤可以上调顺铂干预后大鼠卵巢颗粒细胞的PI3k、p-Akt、Akt的表达.结论:二仙汤含药血清上调了PI3k、p-Akt、Akt的表达,从而抑制了卵巢颗粒细胞凋亡,该过程可能通过调节PI3k/Akt通路实现,进而有效地保护卵巢功能.
关键词： 二仙汤 卵巢颗粒细胞 PI3K/Akt通路 细胞凋亡 -
西黄丸调节肿瘤微环境中Treg细胞PI3K/AKT通路的抗肿瘤作用机制研究
目的:研究西黄丸调节肿瘤微环境中Treg细胞PI3K/AKT的表达对Treg细胞增殖的影响,探讨西黄丸抗肿瘤作用机制.方法:采用4T1乳腺癌细胞建立乳腺癌荷瘤小鼠模型,连续灌胃给药14天,剥离肿瘤组织、称重、匀浆,制备单细胞悬液;流式细胞仪(FACS)检测肿瘤微环境中Treg细胞数量;TUNEL染色检测肿瘤微环境中Treg细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测肿瘤微环境中Treg细胞PI3K、AKT蛋白的表达.结果:与阴性对照组比较,西黄丸治疗组瘤重明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.05);FACS结果显示肿瘤微环境中Treg细胞含量随西黄丸剂量增高而降低;TUNEL染色结果显示肿瘤微环境中Treg细胞凋亡数量随西黄丸剂量的升高而升高;Western Blot结果显示Treg细胞PI3K、AKT蛋白表达随西黄丸剂量的增高而降低.结论:西黄丸通过下调Treg细胞PI3K/AKT蛋白的表达,能抑制肿瘤微环境中Treg细胞增殖,促进其凋亡,改善肿瘤微环境免疫抑制状态,逆转免疫逃逸,从而抑制肿瘤生长.
关键词： 西黄丸 肿瘤微环境 Treg细胞 PI3K/Akt通路 抗肿瘤作用 -
基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响
目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制.方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8g·L-1)对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4g·L-1)培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyelin D1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系.与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D1,Bel-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡.
关键词： 健脾化瘀方 PI3K/Akt通路 细胞周期 细胞凋亡 大肠癌 -
片仔癀通过PI3k/Akt通路抑制人骨肉瘤耐药细胞MG63/ADM增殖
目的:探讨片仔癀对人骨肉瘤耐药株M G63/ADM增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用大剂量间隙干预建立骨肉瘤阿霉素(ADM)耐药细胞MG63/ADM,MTT检测其耐药性;不同浓度片仔癀(0、0.4、0.8、1.2mg/mL)作用MG63/ADM细胞后,MTT检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;WesternBlot检测PTEN、Akt、p-Akt、PARP、Cleaved-PARP蛋白表达情况.结果:MG63/ADM细胞对阿霉素明显耐药,IC50为(1.98±0.58) μβ/mL,耐药指数为11.47,同时对紫杉醇(PTX)、顺铂(DDP)耐药;片仔癀能明显抑制MG63/ADM的增殖,呈时间和剂量依赖性(Pp＜0.01),Hoechst 33342染色显示片仔癀作用48h后细胞出现细胞核染色质浓聚,凋亡小体等细胞凋亡形态的表现;Wester Blot显示片仔癀作用后PTEN蛋白及Cleaved-PARP表达明显上调,p-Akt蛋白的表达降低,呈浓度依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:片仔癀在体外可明显抑制M G63/ADM细胞的增殖,其机制可能与通过上调PI3K/Akt通路中PTEN的表达,抑制Akt蛋白的磷酸化,从而促进PARP蛋白的裂解,发挥诱导细胞凋亡的作用.
关键词： 片仔癀 骨肉瘤 耐药 PI3K/Akt通路 -
断藤益母汤抑制PI3K/AKT通路诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡
目的:探讨PI3K/AKT通路在断藤益母汤诱导人类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡中的作用.方法:收集RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA FLSs;用不同浓度的断藤益母汤处理细胞后,CCK-8法检测RA FLSs活力;Annexin V-FITC/PI检测RA FLSs凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,P I3K/A KT通路相关蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,随着断藤益母汤浓度的增加可显著抑制RA FLSs活力(P＜0.05,P＜0.01),诱导RA FLSs发生凋亡(P＜0.05,P＜0.01);Bcl-2及PI3K和AKT蛋白磷酸化表达水平明显降低(P＜0.05),Bax表达水平上升(P＜0.05),呈现剂量依赖性.PI3K蛋白抑制剂(LY294002)干扰后增强了断藤益母汤对RA FLSs的作用:与断藤益母汤组比较,LY294002联合断藤益母汤组细胞活力显著下降(P＜0.05),凋亡率显著升高(P＜0.05);Bcl-2及AKT蛋白磷酸化表达水平明显降低(P＜0.05),Bax表达水平上升(P＜0.05).结论:断藤益母汤可能通过抑制PI3K/AKT通路诱导RA FLSs凋亡.
关键词： 断藤益母汤 类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 凋亡 PI3K/Akt通路 -
前列消癥汤对前列腺癌PC-3细胞PI3K/Akt信号通路表达的影响
目的:观察前列消癥汤(QLXZT)对前列腺癌(PCa)PC-3细胞PI3K/Akt信号通路影响.方法:制备含药血清,培养PC-3细胞24 h,Western Blot、PCR检测QLXZT对PI3K通路上下游分子表达影响.结果:(1)QLXZT各组p-Akt、mTOR及NF-κB蛋白水平下降,而PTEN蛋白水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2)QLXZT各组mTOR、RelA基因表达被抑制,PTEN基因表达增强,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:QLXZT能下调Akt、mTOR和NF-κB表达,上调PTEN表达,这可能是治疗PCa的分子机制.
关键词： 前列消癥汤 PC-3细胞 含药血清 PI3K/Akt通路 -
阳和化岩汤对HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型微淋巴管生成及PI3K/Akt交互调控通路的影响
目的探讨阳和化岩汤治疗乳腺癌的可能作用机制.方法通过SK-BR-3细胞株接种建立Balb/c裸鼠荷瘤模型,将20只成瘤阳性的裸鼠随机分为模型组、中药组、西药组、中西药组,每组5只.模型组每天灌胃0.4ml生理盐水;中药组用阳和化岩汤18 g/(kg·d)灌胃;西药组给予曲妥珠单抗1mg/kg,每周2次,腹腔注射;中西药组给予阳和化岩汤和曲妥珠单抗,用法同中药组和西药组.给药4周后观察各组淋巴结转移抑制率,检测肿瘤组织中磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、血管内皮生长因子C (VEGFC)的表达,计数微淋巴管数量及VEGFC评分.结果各组裸鼠乳腺原位均有实体肿瘤生长,呈椭圆形或分叶状,原位移植乳腺癌模型裸鼠均有腋窝淋巴结转移.与模型组比较,各给药组淋巴结抑制率均上升,VEGFC评分及PI3K、p-Akt、VEGFC mRNA表达均降低,微淋巴管数量减少(P＜0.05或P＜0.01);与中药组、西药组比较,中西药组淋巴结抑制率明显升高,VEGFC评分及PI3K、p-Akt、VEGFC mRNA表达均降低,微淋巴管数量减少(P＜0.05或P＜0.01).VEGFC评分与微淋巴管数量之间存在正相关关系(r =0.894,P＜0.05). 结论 阳和化岩汤能有效抑制HER-2高表达型裸鼠荷瘤模型微淋巴管生成,抑制血管生成调控通路及VEGFC表达,其机制可能与有效抑制H3K/Akt交互调控通路活化有关.
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高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究
目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平.结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P＜0.05),细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crk1的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白PI3K和p-Akt的表达水平明显降低.结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关.
关键词： 高三尖杉酯碱 伊马替尼 磷酸化酪氨酸 K562/G01细胞 PI3K/Akt通路 -
辛伐他汀对人急性单核细胞白血病SHI-1细胞PI3K/AKT通路的影响
本研究探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂辛伐他汀对人急性单核细胞白血病株( SHI-1)细胞增殖和凋亡的影响及PI3K/AKT通路变化.取对数生长期细胞,实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15 μ mol/L),培养24、48、72 h.采用MTT法观察SHI-1细胞增殖能力；流式细胞术测定SHI-1细胞凋亡指标变化；PCR芯片研究SHI-1细胞pI3 K/AKT通路84个特异性基因mRNA的差异表达.结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞有明显抑制增殖和促凋亡作用,呈时间与剂量依赖性.15 μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞24、48、72h,细胞增殖抑制率分别为26.82％、47.09％、63.92％,细胞早期凋亡率分别为5.73％、13.25％、15.59％.与对照组相比,15 μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞48 h组中有39个基因表达发生改变,其中26个基因表达下调、13个基因表达上调.结论:辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节PI3K/AKT通路相关基因的表达有关.
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microRNA-423-5p调节PI3K/AKT通路在大鼠心力衰竭进展中的作用探究
目的 探究microRNA-423-5p(miR-423-5p)调节磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路在心力衰竭进展中的作用.方法 构建大鼠心力衰竭模型,同时用AngⅡ处理(100 nM,24 h)大鼠心肌细胞H9C2构建心力衰竭体外模型.H9C2细胞转染miR-423-5p的抑制剂和模拟剂实现miR-423-5p的敲除和过表达;LY294002用来抑制PI3K/AKT通路的激活.RT-PCR技术检测miR-423-5p的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、casapse-3/9及PI3K、AKT总蛋白及磷酸化蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 miR-423-5p的表达水平在模型组大鼠心肌组织和AngⅡ处理的H9C2细胞中升高;敲除miR-423-5p可抑制由AngⅡ造成的H9C2细胞凋亡,并促进了p-PI3K及p-AKT的表达,但敲除miR-423-5p的以上作用在PI3K/AKT通路被抑制后全部削弱.结论 敲除miR-423-5p可通过激活PI3K/AKT通路抑制心肌细胞凋亡,进而缓解心力衰竭的恶性进展.
关键词： 大鼠 心力衰竭 miR-423-5p PI3K/Akt通路 心肌细胞凋亡 -
从GH/IGF-1轴与PI3K/Akt通路探讨老年骨质疏松症的发病机制
GH/IGF-1轴与PI3K/Akt通路对成骨细胞(OB)的分化增殖都有重大影响,但PI3 K/Akt通路与OB的作用机制尚不明确.随着年龄的增长,生长激素逐渐缺乏,成骨细胞数量大量减少,引起骨重建过程中的骨吸收速度超过骨形成速度,从而导致了老年性骨质疏松症.GH/IGF-1轴在老年性骨质疏松症中有重要的代谢功能,是调节OB功能的关键因子.GH直接或间接通过IGF-1调节骨量,促进OB的分化和增殖.同时,IGF-1增加OB数目和活性以增加骨形成,影响长骨生长、骨骼发育和骨量增加;抑制破骨细胞(OC)分化以减少骨吸收;成年阶段维持骨量.PI3K/Akt通路与骨代谢关系密切,调节着OB的分化增殖,对于具体作用靶向点有待于进一步研究,本文将通过对GH/IGF-1轴与OB的关系、GH/IGF-1轴与PI3K/Akt通路的关系以及PI3 K/Akt通路与OB的关系的阐述,从GH/IGF-1轴与PI3K/Akt通路探讨老年骨质疏松症的发病机制.PI3 K/Akt通路通过GH和IGF-1等生长因子与其受体结合而激活,三者都与OB密切相关,但GH/IGF-1轴是否通过PI3K/Akt通路作用于OB并对OP的发生发展产生重大影响有待于深入研究.
关键词： GH/IGF1轴 PI3K/Akt通路 成骨细胞 老年骨质疏松 -
pAkt和P-gp蛋白表达与乳腺癌新辅助化疗疗效相关性分析
目的:探讨磷酸化Akt(pAkt)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)蛋白表达与乳腺癌新辅助化疗(new adjuvant chemotherapy,NAC)疗效的相关性.方法:选取2008-10-2012-06收治的实施NAC后手术治疗的58例TNM分期为Ⅱ/Ⅲ期女性乳腺癌患者,采用免疫组化检测NAC前空芯针穿刺乳腺肿瘤组织中pAkt和P-gp蛋白的表达情况,采用TUNEL法检测术后石蜡包埋组织肿瘤细胞凋亡指数(apoptosis index,AI),结合NAC疗效进行相关性分析.结果:NAC治疗后客观缓解率为77.6％(45/58);AI与NAC疗效呈正相关关系,r=0.330,P=0.010; pAkt高表达率和P-gp阳性率分别为48.3％(28/58)和37.9％(22/58),pAkt表达高低、P-gp表达与AI之间均呈负相关关系(r=-0.452,P=0.001;r=-0.623,P＜0.001),pAkt高表达疗效明显差于pAkt低表达者(x2=0.708,P=0.008),P-gp阳性表达患者疗效同样明显差于P-gp阴性表达者,x2 =18.17,P＜0.001.结论:pAkt高表达和P-gp阳性表达是影响乳腺癌NAC疗效的危险因素.
关键词： 乳腺肿瘤/药物疗法 新辅助化疗 治疗结果 PI3K/Akt通路 P-糖蛋白 -
原花青素介导的自噬流对喉癌细胞增殖影响及其机制探讨
目的 原花青素(procyanidins,OPC)通过抑制细胞周期、促进凋亡等机制发挥抗肿瘤作用.本研究旨在探讨OPC介导的自噬流对喉癌TU686细胞增殖活力的影响,并进一步探究OPC促进喉癌TU686细胞自噬流可能的分子机制.方法 单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色法及流式细胞术检测不同浓度OPC对TU686细胞自噬的诱导作用;蛋白质印迹法检测TU686细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白表达变化;并从翻译水平检测相关Atg蛋白表达,使用SiRNA干扰Atg5基因,并采用q-PCR和蛋白质印迹法检测干扰后Atg5转录和翻译水平变化,进一步检测干扰Atg5对LC3Ⅱ和p62影响;检测PI3K/AKT途径中活化PI3K p85α和磷酸化P-AKT1蛋白表达情况,采取PI3K/AKT途径激动剂胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与OPC共培养细胞的方式以阐明PI3K/AKT途径在OPC诱导的自噬流中具体作用.CCK-8法和台盼蓝染色法检测OPC诱导的自噬流对TU686细胞增殖活力影响.结果 OPC处理组(20～40 μg/mL) LC3-Ⅱ相对蛋白表达量高于0加药组,F=1 688.710,P＜0.001;p62相对蛋白表达量低于0加药组,F=73.875,P＜0.001.40 μg/mL OPC作用后Atg5和Atg12蛋白相对表达量分别为3.20±0.08和7.52±0.13,高于0加药组,F值均为-3.079,P值均为0.012;40μg/mL OPC作用后PI3K p85α和P-AKT1蛋白相对表达量分别为0.18±0.01和0.48±0.06,低于0加药组,F值均为3.079,P值均为0.012.IGF 1可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ升高和p62降低,与CON组相比,OPC组、IGF-1组和OPC+ IGF-1组LC3-Ⅱ相对表达量分别为10.32±0.31、1.02±0.20和5.73±0.11,均P＜0.001;p62相对表达量分别为0.64±0.02、1.03±0.02和0.87±0.01,均P＜0.001.3-MA预处理后可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+ 3-MA组LC3-Ⅱ蛋白相对表达量分别为4.74±0.10、1.05±0.13和1.81±0.05,均P＜0.001;p62蛋白相对表达量分别为0.59±0.02、0.94±0.03和0.78±0.03,P值分别为＜0.001、0.002和＜0.001.SiRNA干扰Atg5后,抑制OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与NC相比,NC+OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+OPC组中LC3-Ⅱ相对表达量分别为9.43±0.36、1.14±0.11和6.08±0.22,均P＜0.001;p62相对表达量分别为0.28士0.02、1.03±0.02和0.68±0.02,均P＜0.001.CCK-8结果显示与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+ 3-MA组细胞活力分别为(49.53±4.29)％、(95.29±1.80)％和(67.19±0.31)％,P值分别为＜0.001、0.001和＜0.001.与CON组相比,NC+ OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+ OPC组细胞活力分别为(49.53±4.29)％、(100.44±0.50)％和(73.01±1.23)％,均P＜0.001.结论 OPC可能通过抑制PI3K/AKT途径促进喉癌TU686细胞自噬流的通畅,并抑制TU686细胞增殖活力.
关键词： 原花青素 PI3K/Akt通路 喉癌 自噬流 -
胰腺癌中EGFR、Kras及PI3K/Akt通路对EGFR-TKIs疗效预测的研究
厄洛替尼是一种表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI),其联合吉西他滨的治疗方案已被美国FDA批准作为晚期胰腺癌的一线治疗,探索能够预测胰腺癌中EGFR-TKIs疗效的分子标志物具有重要临床价值.在胰腺癌中,EGFR基因扩增以及下游PI3K/Akt通路更有望成为预测EGFR-TKIs疗效的分子标志物.
关键词： 胰腺癌 EGFR KRAS PI3K/Akt通路 EGFR-TKIs疗效预测 -
温肾益气中药调节重症肺炎MMP-2和MMP-9表达的实验研究
目的 观察温肾益气中药对重症肺炎大鼠金属基质蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表达的影响.方法 将100只SPF级SD大鼠随机分为5组:对照组正常饲养,其余4组气管穿刺注入肺炎克雷伯菌制备重症肺炎模型,并分别以无菌蒸馏水及相应浓度的温肾益气饮灌胃,1次/d,共7d.观察肺组织病理变化,并采用血常规分析仪测定支气管肺泡灌洗液白细胞和中性粒细胞计数,采用免疫蛋白印迹实验测定肺组织PI3K、AKT1、P-AKT1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,其余各组明显偏高(P＜0.05),与模型组相比,中剂量组及高剂量组均有所降低(P＜0.05),低剂量组无明显变化.各组大鼠之间的PI3K和AKT1蛋白表达水平差异无统计学意义,但P-AKT1、MMP-2及MMP-9明显不同(P＜0.05);与对照组相比,其余各组明显升高(P＜0.05),与模型组相比,低剂量组、中剂量组及高剂量组均有明显降低,且各用药组之间的差异也均有统计学意义(P＜0.05).MMP-2和MMP-9与P-AKT1表达水平呈正相关性(r=0.896、0.547,P＜0.05).结论 温肾益气中药能够通过PI3K/AKT通路下调MMP-2与MMP-9的表达,减轻细胞外基质降解和炎性应激反应,可能为其治疗重症肺炎的药理机制之一.
关键词： 温肾益气中药 重症肺炎 PI3K/Akt通路 金属基质蛋白酶 -
结肠癌中p-mTOR、p-p70S6K的表达与临床病理意义
目的:探讨磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及其下游因子p-p70S6K在结肠癌中的表达情况,分析其与临床病理特征的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测结肠癌组织、癌旁组织、正常结肠组织中p-mTOR、p-p70S6K的表达.结果:81例结肠癌组织中p-mTOR表达率为51.85％(42/81),显著高于正常结肠组织的21.74％(5/23)、癌旁组织35.80％(29/81),且p-mTOR的表达与TNM分期、结肠癌解剖位置相关(χ2=7.617、5.358,P<0.05).p-p70S6K在结肠癌的表达率为72.84％(59/81),且与p-mTOR的表达呈正相关(r=0.356,P=0.001).结论:p-mTOR、p-p70S6K蛋白在结肠癌组织中高表达,且与结肠癌的发生、解剖部位、TNM分期有关,可作为结肠癌诊断和预后判断的指标.
关键词： p-mTOR p-p70S6K PI3K/Akt通路 结肠癌 -
从PI3k/Akt通路研究山茱萸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制
目的:了解山茱萸对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用机制.方法:选取84只雄性Wistar 大鼠,按随机数字表法分三组,分别为对照组、缺血再灌注组(I/R组)和治疗组,每组28只.采用结扎大鼠冠状动脉左前降支法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,对照组在左冠状动脉前降支处仅穿线不结扎,I/R组在再灌注前5 min时尾静脉注射0.9％氯化钠注射液1mL,治疗组在再灌注前5 min时尾静脉注射山茱萸药液1 mL,观察记录各组大鼠心肌缺血情况和心电图信息.结果:与对照组比较,I/R组及治疗组大鼠FS和EF均降低,LVDd、LVESV、LVEDV均上升;与I/R组比较,治疗组FS和EF均上升,LVDd、LVESV、LVEDV均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:山茱萸及其有效成分通过PI3K/Akt通路,对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护机制的实现起到了十分重要的作用.
关键词： 山茱萸 心肌缺血 再灌注损伤 PI3K/Akt通路 -
慢病毒介导的BAG-1L基因对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞的保护作用
目的 探讨慢病毒介导Bcl-2结合抗凋亡基因1L(BAG-1L)过表达对缺氧/复氧诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,研究其对磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,取对数生长期细胞分为重组慢病毒感染组(感染携带BAG-1L基因及荧光蛋白基因的重组慢病毒)、载体对照组(感染携带荧光蛋白基因但不携带BAG-1L基因的慢病毒)及细胞对照组(未感染慢病毒).感染48 h后采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测靶细胞BAG-1L的表达;3组细胞经缺氧8 h/复氧24h处理后,采用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性;采用别藻蓝蛋白标记的膜联蛋白V/7-氨基放线菌素D(Annexin V-APC/7-AAD)双染法检测细胞凋亡,并进行流式分析;采用Western Blot试验检测细胞BAG-1L、热休克蛋白70(HSP70)、AKT及磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达.结果 重组慢病毒感染48 h后可观察到外源性BAG-1L特异性蛋白条带,而细胞对照组和载体对照组无此特异性蛋白条带.经缺氧/复氧处理后,重组慢病毒感染组细胞活性较细胞对照组和载体对照组均明显增高(A值:0.689±0.036比0.425±0.013、0.400±0.012),细胞凋亡明显减少[凋亡率:(26.97±1.82)％比(36.60±1.45)％、(35.77±3.74)％],BAG-1L、HSP70、p-AKT蛋白表达水平明显升高[BAG-1L蛋白(灰度值):2.405 ±0.167比0.529±0.141、0.601 ±0.099,HSP70蛋白(灰度值):0.997±0.123比0.634±0.091、0.584±0.106,p-AKT蛋白(灰度值):1.234±0.118比0.661±0.210、0.712±0.199,均P＜0.01];而AKT蛋白表达虽高于细胞对照组和载体对照组(灰度值:1.103±0.269比0.646±0.188、0.791±0.326),但差异无统计学意义(均P＞0.05).细胞对照组和载体对照组各指标比较差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 慢病毒介导的BAG-1L基因过表达可以保护神经细胞抵抗缺氧引起的损伤,抑制细胞凋亡,其保护作用可能与促进PI3K/AKT通路的激活有关.
关键词： Bcl-2结合抗凋亡基因 神经细胞 缺氧/复氧 抗凋亡 PI3K/Akt通路 -
PTEN与胰岛素抵抗
Pten是一种抑癌基因,其编码的PTEN蛋白具有双特异性磷酸酶活性,可分别使4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)和3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)去磷酸化生成磷酸磷脂酰肌醇(PIP)与PIP2,从而抑制磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路.胰岛素通过P13K/Akt信号通路作用于肝脏、脂肪、骨骼肌及血管组织,调节组织代谢及血管舒缩功能.PTEN表达上调和(或)活性增强可能通过PI3K/Akt通路参与胰岛素抵抗的发生.抑制内源性PTEN蛋白表达,可能成为改善胰岛素抵抗及治疗2型糖尿病和代谢综合征的新靶点.
关键词： PTEN 胰岛素抵抗 PI3K/Akt通路
