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Id3-EGFP融合基因表达载体的构建及其在人肺癌细胞A549中的表达
目的 构建人分化抑制因子3(Id3)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合基因表达载体pEGFP/Id3,使Id3-EGFP融合蛋白在人肺癌细胞A549中得到表达.方法 扩增并克隆人Id3 cDNA,构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3.用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞,使Id3-EGFP融合蛋白在A549细胞得到表达.结果 经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,Id3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游,获得融合基因表达载体pEGFP/Id3.利用脂质体转染技术将pEGFP和pEGFP/Id3转入A549细胞,24 h后,在激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP的细胞发出绿色荧光,流式细胞术分析表明,转染48 h时EGFP阳性表达细胞率高,分别可达65.40%和60.50%.pEGFP/Id3转染的A549细胞S期细胞和G2期细胞比例均明显高于pEGFP转染细胞组和未转染细胞组,表明Id3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展,从而促进细胞增殖.结论 真核表达载体pEGFP/Id3的成功构建及其在A549细胞中的表达,为研究Id3的细胞定位表达及Id3在细胞生长调控中的作用奠定了实验基础.
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吗替麦考酚酯对大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用及其机制探讨
目的 探讨吗替麦考酚酯(MMF)对腺嘌呤致慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化及肾小管上皮-间充质转化(EMT)的作用,以及该作用同肾组织血管内皮生长因子(VEGF)和分化抑制因子(Id2、Id3)变化的关系.方法 雄性Wistar大鼠64只,分对照组(16只)、慢性肾衰竭组(24只,腺嘌呤125 mg·kg-1·d-1灌胃)、MMF干预组(24只,腺嘌呤125 mg·kg-1·d-1+MMF 15 mg·kg-1·d-1灌胃).分别于第2、4、6、8周处死动物,收集血、尿标本测血肌酐、尿蛋白.取肾组织,Masson染色作肾间质纤维化程度评分,免疫组化法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGFβ1)表达,RT-PCR测肾组织TGFβ1、VEGF mRNA表达,Western blot测肾组织α-SMA、VEGF及Id2、Id3蛋白表达.结果 (1)慢性肾衰竭组、MMF干预组血肌酐均显著高于对照组,但慢性肾衰竭组、MMF干预组之间无显著差异;MMF干预组第6、8周时24 h尿蛋白显著低于慢性肾衰竭组.(2)慢性肾衰竭组、MMF十预组在第6、8周肾间质纤维化程度显著重于对照组,但MMF干预组间质纤维化程度显著低于慢性肾衰竭组.(3)慢性肾衰竭组、MMF干预组在第6、8周肾组织(α-SMA、TGFβ1表达较对照组明显增强,但MMF干预组肾组织α-SMA表达在第6、8周明显低于慢性肾衰竭组,TGFβ1表达在第2、4、6周亦显著低于慢性肾衰竭组.(4)慢性肾衰竭组第8周肾组织VEGF蛋白表达低于对照组,MMF干预组肾组织VEGF表达第6、8周显著高于慢性肾衰竭组.(5)MMF干预组肾组织Id2、Id3蛋白表达高于慢性肾衰竭组,在第4、6周差异显著.结论 MMF具有减轻慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化、抑制肾小管上皮细胞EMT的作用,该作用可能与MMF下调肾组织TGFβ1表达及上调VEGF、Id2、Id3表达有关,其确切机制需进一步探讨.
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分化抑制因子2和表皮生长因子受体及人类表皮生长因子受体2在结直肠癌组织中的表达及其意义
目的 研究分化抑制因子2(Id2)、表皮生长因子受体(EGFR)及人类表皮生长因子受体2(Her-2)在结直肠癌中的表达以及与患者预后的关系.方法 采用PV6000二步法检测359例结直肠癌及35例癌旁正常组织中Id2、EGFR及Her-2的表达.结果 (1)结直肠癌组织中Id2的阳性率为68.0%,EGFR的阳性率为64.9%,二者在结直肠癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织中的表达(P值均＜0.05).Her-2在结直肠癌组织中的阳性率为1.7%,与癌旁正常组织中的阳性率相比差异无统计学意义(P=0.441).(2)Id2的阳性表达与患者的TNM分期、组织学分级、肿瘤组织的肠壁浸润深度、淋巴结转移情况以及腹腔和远处转移情况等相关(P值均＜0.05).(3)Id2阳性表达组的无瘤生存时间较阴性表达组短(P=0.002),阳性表达组的5年生存率低于阴性组(P=0.001).结论 Id2可能在结直肠癌的发生、发展及转移中发挥重要作用,可以作为评价结直肠肿瘤生物学行为及判断预后的指标之一.
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老年女性乳腺浸润性导管癌组织中分化抑制因子1的表达及意义
目的 探讨老年女性乳腺浸润性导管癌组织中分化抑制因子1(Id-1)的表达及意义.方法 选择45例老年女性乳腺浸润性导管癌标本(研究组)和30例乳腺良性病变标本(对照组),应用免疫组织化学方法检测Id-1的表达,并进行半定量评分,分析Id-1表达与老年女性乳腺浸润性导管癌淋巴结转移、组织学分级及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间的关系.结果 研究组患者中Id-1阳性表达率为80.0％,显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);有淋巴结转移的乳腺癌组织中Id-1阳性表达率显著高于无淋巴结转移者,组织学分级Ⅲ级患者的Id-1阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ级者,ER、PR阳性患者的Id-1阳性表达率明显低于阴性者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Id-1过表达可能与老年乳腺浸润性导管癌的发生、发展及恶性生物学行为密切相关,检测Id-1表达对老年乳腺浸润性导管癌的诊治及预后判断有重要价值.
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分化抑制因子1、p53在人类乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 研究分化抑制因子1(Id1)、肿瘤抑制基因p53在乳腺癌组织中的表达及其相互关系,并探讨其意义.方法 选取2009年1月至2009年6月手术切除的乳腺癌组织标本80例,手术前均未经化疗和放疗等治疗,采用免疫组织化学方法检测Id1、p53在乳腺癌组织中的表达.结果 Id1表达于细胞质,p53表达于细胞核.Id1、p53在80例乳腺癌中的阳性表达率分别为87.5%(70/80)、90.0%(72/80).Id1、p53在乳腺癌中的表达与在乳腺癌癌旁组织、乳腺良性肿瘤、正常乳腺组织中的表达均有统计学意义(P＜0.05).乳腺癌的Id1表达与是否有腋窝淋巴结转移、肿瘤分期明显相关,而与患者年龄、肿瘤大小、组织分化无关.乳腺癌的p53表达与是否有腋窝淋巴结转移明显相关,而与患者年龄、肿瘤大小、组织分化、肿瘤分期无关.结论 Id1在人类乳腺癌中表达上调,Id1阳性率在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,Id1在乳腺癌转移过程中起一定作用,Id1检测有利于判定乳腺癌的预后,同时亦提示降低Id1表达可作为治疗乳腺癌转移的策略之一.Id1与p53均可作为判断乳腺癌患者淋巴结转移和预后的有效指标.
关键词： 乳腺肿瘤 免疫组织化学 肿瘤抑制蛋白质p53 分化抑制因子 -
关键词：
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Id蛋白N末端突变体真核表达载体的构建及其三维空间模型预测
目的:构建Id家族蛋白N末端突变体的真核表达载体,并模拟其突变前后的三维空间模型.方法:用带有突变的引物从质粒中扩增出两段突变序列,用拼接PCR的方法将两段突变序列合成一条N末端包含两个突变点的Id序列.应用Swiss-PdbViewer3.7(SP5)软件模拟其突变前后的三维结构模型.结果:构建了一系列Id家族N末端突变体的pcDNA3.1(+)真核表达载体.预测出其三维结构的变化.结论:构建Id蛋白家族N末端 突变的pcDNA3.1(+)真核表达载体,为进一步研究ld蛋白N末端结构的生物学功效奠定基础.
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细胞分化抑制因子-1与胃癌
细胞分化抑制因子(inhibitors of differentiation,Id),又称DNA结合抑制因子(inhibitors of DNA binding),是一种螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)蛋白,对促进细胞分化的碱性HLH(basic helix-loop-helix,bHLH)转录因子起负性调节作用.近年研究显示,Id-1蛋白为细胞周期循环从G1期进入S期所必需的蛋白,适当条件下可抑制细胞凋亡[1],Id-1的过表达也可通过钝化肿瘤抑制因子等方式促进细胞的增殖和分裂.Id-1与多种肿瘤发生相关,在乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、甲状腺癌、膀胱癌、食管鳞状细胞癌、结肠癌、直肠癌及胰腺癌等肿瘤中高表达,胃癌中亦高表达.已有证据表明Id-1表达和肿瘤的分化程度及恶性生物学特性相关,但Id-1在肿瘤发生、发展过程中的变化情况及其致癌机制仍不清楚.
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干细胞移植治疗心肌损伤
一、干细胞概况干细胞是一族具有自我复制和具有多向分化能力的细胞.干细胞可以保持静止状态,可以发生自我复制,也可以发生分化.这些行为被认为是由它们邻近的体细胞决定的,后者组成的微环境调节干细胞的生长和分化.这个微环境能够提供一些因子维持干细胞的未分化状态,并能把诱导干细胞发生分化的因子排斥在外.但这个微环境的容纳能力是有限的,如果干细胞的数量超过这个微环境的容纳能力,干细胞就会从这个微环境中分离出来并发生分化.干细胞内也存在一些因子维持干细胞的未分化状态,这些因子可抑制与干细胞分化有关基因的表达.在组织受到损伤时,健康细胞产生的干细胞分化抑制因子减少及坏死细胞释放的有丝分裂原能诱导干细胞分化来修复组织损伤.干细胞也可以横向分化.骨髓干细胞可分化成肌肉、血管、神经组织和肝细胞[1-4].中枢神经系统的干细胞也可转化为血细胞[5].以前认为心肌细胞是终分化组织,心肌细胞不能再发生有丝分裂,心肌受到损伤后只能形成瘢痕组织来修复.但近的研究显示心肌梗死后在心肌梗死灶边缘及正常心肌组织中也有少量心肌细胞发生有丝分裂[6].由于心肌梗死部位血供断绝,如果只依赖于心肌细胞的分裂增生不可能形成新的心肌组织.慢性心功能不全时,由于不断有心肌细胞凋亡或坏死,能够发生有丝分裂的心肌细胞分裂增生修补受损心肌组织.但这些细胞的分裂能力是有限的,结果是这些细胞被逐渐消耗完,造成慢性心功能不全时心肌细胞数量减少和功能低下.血管紧张素转化酶抑制剂和β受体阻滞剂的应用提高了慢性心功能不全病人的存活率,但终末期心衰的治疗效果还是很差.缺乏捐献者,免疫抑制后产生的副作用及移植心脏的不存活,使心脏移植受到限制.基因治疗可以增强心肌细胞的收缩,但由于有功能的心肌细胞数目减少,使基因治疗的作用受到限制.目前迫切需要新的方法治疗心衰,移植干细胞代替移植整个心脏成为研究的热点.
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分化抑制因子nm23基因在急性白血病细胞中的表达及临床意义
目的探讨分化抑制因子nm23在急性白血病细胞中的表达水平及临床意义.方法应用RT-PCR半定量分析34例初诊急性白血病[22例急性髓系白血病(AML), 12例急性淋巴细胞白血病(ALL)], 9例临床完全缓解AML(AML-CR),4例慢性粒细胞白血病(CML)患者的骨髓标本中nm23-H1、nm23-H2的mRNA表达水平,并分析了其与一些临床指标的关系.结果 nm23-H1基因在急性白血病,尤其是粒-单核细胞及单核细胞白血病(M4、M5)中的表达水平明显增高;经化疗完全缓解后的AML患者nm23基因表达显著低于初诊AML患者;在AML中,nm23-H1的高表达与外周血白细胞计数、乳酸脱氢酶、CD7及髓外浸润等预后较差指标呈正相关性,而与特征性染色体异常如t(8;21)和t(15;17)呈负相关性.结论 nm23-H1基因在急性白血病特别是粒-单核细胞白血病(M4、M5)中表达较正常人明显增高,可能是AML预后较差的一种标志.
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分化抑制因子基因家族在白血病细胞中的表达
分化抑制因子(Id)是转录因子的显性负调节子,抑制多种转录因子与其他因子的结合,对转录因子起调控作用,它们在人类有不同的基因定位,在不同类型的细胞中发挥不同的生物学作用,产生不同的生物学效应.研究发现,Id基因与多种肿瘤的发生、发展及预后有着密切的联系.白血病是多种因素引起的造血系统恶性疾病,目前还未见对4种Id基因家族成员与白血病相关性的系统报道.我们采用RT-PCR方法分析4种Id基因在正常对照组和急性非淋巴细胞白血病(ANIL)、慢性粒细胞自血病(CML)患者中的表达情况,探讨其与白血病发病的相关性.
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nm23-H1在急性白血病患儿血浆中表达水平与化疗耐药及预后的关系
目的:探讨分化抑制因子nm23-H1蛋白在急性白血病患儿血浆中的表达水平与预后的关系.方法:采用酶联免疫法测定分化抑制因子nm23-H1蛋白在80例初治急性白血病(AL)患儿及6例复发的AL患儿、14例持续完全缓解的AL患儿和30例健康志愿者血浆中的含量.结果:nm23-H1在初治及复发的AL患儿中明显高于健康志愿者,持续完全缓解的AL患儿nm23-H1血浆浓度与健康志愿者血浆中的含量无显著差异.耐药组nm23-H1血浆浓度明显高于非耐药组.结论:nm23-H1蛋白在急性白血病患儿血浆中不同病期表达水平不同,高表达者预后差.提示nm23-H1血浆蛋白浓度可能是判断急性白血病患儿预后的一种标志.
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Id4因子与肿瘤相关性的研究进展
分化抑制因子也被称为Id蛋白,属于螺旋一环-螺旋转录因子家族的成员.是在1990年由Robert Benezr发现的.他第一次从鼠红白血病细胞的DNA的文库中克隆出来.分化抑制因子蛋白是螺旋-环-螺旋转录因子中的家族成员构成,并且通过阻断未成熟的细胞之间的分化.进而实现HLH蛋白包括400多种分子.而且其活动范围非常的广泛,从酵母到生物体都能够发现分化抑制因子的存在[1].从哺乳动物细胞中能够发现四中分化抑制因子,并且含有119～ 199个氨基酸残基,从而相对于分子量来说,介于13 ～ 20 KD之间.
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维持胚胎干细胞不分化的信号传导机制
ES细胞的生物学功能是由复杂而精细的信号传导网络调控,其中在维持ES细胞不分化的过程中,分化抑制因子LIF、Oct-3/4起着重要作用.本文从信号传导这一崭新的角度综述了这两个因子的相关研究进展.
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Id2通过非HLH结构域促进SKOV3细胞的侵袭性
目的:观察分化抑制因子2(inhibitor of differentiation 2,Id2)基因转染卵巢癌SKOV3细胞后,对细胞生长和侵袭能力的影响,探讨Id2基因缺失螺旋-环-螺旋(helix-loop-hehx,HLH)结构域后对SKOV3细胞的影响.方法:以携带野生型Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH基因的质粒(pcDNA3.1-Id2、pcDNA3.1-Id2-DBM和pcDNA3.1-Id2-DBM-δHLH)经脂质体介导转染SKOV3细胞.采用Western印迹法和RT-PCR法检测转染后SKOV3细胞Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH的表达水平;MTT法检测SKOV3细胞的增殖曲线;划痕试验和Transwell小室检测细胞的迁移能力;Western印迹法检测Id2对MCF-7细胞上皮钙黏附素表达的影响.结果:mRNA及蛋白水平显示质粒成功转入;细胞生长曲线显示各组细胞的增殖无显著差异;与空白对照组相比,转染pcDNA3.1-Id2、pcDNA3.1-Id2-DBM和pcDNA3.1-Id2-DBM-δHLH后,细胞的侵袭能力增强,且pcDNA3.1-Id2-DBM和pcDNA3.1-Id2-DBM-δHLH组细胞明显伴有上皮钙黏附素表达水平的降低.结论:Id2蛋白的过表达可促进卵巢癌SKOV3细胞的侵袭能力,与上皮钙黏附素表达水平的降低有关,且该作用在缺失HLH结构域后依然存在.
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分化抑制因子的表达与恶性肿瘤的预后
分化抑制因子(Id)又称DNA结合抑制因子,是螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)蛋白家族中参与负性调节的转录因子,具有抑制细胞分化、促进细胞增殖的作用.众多实验表明,Id蛋白在肿瘤中高表达并与肿瘤侵袭转移等恶性潜能密切相关,提示Id蛋白有助于判断肿瘤的预后.恶性肿瘤中Id蛋白的表达异常,可能是肿瘤侵袭性表型、预后差的标志.而通过靶向治疗抑制Id蛋白的表达可以有效抑制肿瘤增殖、侵袭转移.本文就近年来Id蛋白对肿瘤预后的相关因素,如恶性增殖、侵袭转移、血管生成等方面的影响机制及临床领域的研究进展作一综述.
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ID3蛋白在肺腺癌中的表达及临床病理学意义
目的 研究分化抑制因子3(ID3)蛋白在肺腺癌中的表达及与临床病理学参数的意义.方法 用间接免疫荧光技术检测ID3在人肺腺癌A549细胞株中的表达情况;用酶免疫组织化学染色技术检测30例肺腺癌和25例正常肺组织标本中ID3的表达情况,分析ID3表达与临床病理参数关系.结果 ID3蛋白在A549细胞中主要表达在细胞核;肺腺癌的阳性表达率为76.7%(23/30);ID3蛋白表达程度与肺腺癌的病理分化程度有关(P<0.05).结论 ID3蛋白在人肺腺癌细胞株呈低水平表达而在人肺腺癌组织中表达量比较高,并与肿瘤分化程度相关.
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分化抑制因子在神经系统肿瘤中的调控作用
分化抑制因子(inhibitor of DNA binding and/or differentiation,Id)是1990 年Robert Benezra 等人首先从鼠红白血病(murine erythro leukemia,MEL)细胞cDNA 文库中克隆出来[1]的一种基因,其表达产物Id 蛋白属于螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子家族成员.大部分HLH 蛋白有一个与之相邻的强碱性区域,为HLH 蛋白与DNA 结合所必需,能与E2 框基序(CANNTG)或相关N2 框基序(CACNAG)结合,含有此区的HLH 蛋白称为碱性HLH (basic helix-loop-helix,bHLH)蛋白,大部分bHLH 蛋白参与细胞命运和细胞分化过程的基因调控.Id 蛋白因缺乏与DNA 结合的碱性结构域,故Id 蛋白与bHLH 结合形成的异二聚体不能与DNA 结合,对bHLH 转录因子活性起负调节,从而抑制细胞分化,被称为分化抑制因子.
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曲前列环素对大鼠肺动脉高压模型的治疗作用及其机制
目的：研究曲前列环素对大鼠肺动脉高压的疗效及其对肺组织分化抑制因子（inhibitor of differentiation，ID）1、3表达水平的影响。方法：建立大鼠野百合碱肺动脉高压模型，设模型组、干预组、对照组，每组10只。干预组在模型大鼠背部微泵注射曲前列环素2周，模型组和对照组给予等量生理盐水。测定各组大鼠右心室平均压（mRVP）；称量心脏各部分重量，计算右心室肥厚指数（RVHI）；制作肺组织切片并进行 HE 染色，测定肺小动脉管壁厚度与动脉外径的百分比（WT）及血管壁面积与血管总截面积的百分比（WA）。免疫组织化学法测定肺血管 ID1、ID3的表达；蛋白质印迹法测定肺组织 ID1、ID3含量；实时荧光定量 PCR 检测肺组织 ID1 mRNA、ID3 mRNA 的表达量。结果：模型组和干预组 mRVP、RVHI、WT、WA 均明显高于对照组（均 P ＜0．05），干预组上述指标明显低于模型组（P ＜0．05）。模型组肺血管和肺组织 ID1、ID3及肺组织 ID1 mRNA、ID3 mRNA 的表达量明显低于对照组（均 P ＜0．05），而干预组明显高于模型组（均 P ＜0．05）。结论：曲前列环素能促进野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织 ID1、ID3及 ID1 mR-NA、ID3 mRNA 的表达，对大鼠肺动脉高压有治疗作用。
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细胞分化抑制因子与肿瘤
分化抑制因子(Id)是一组对碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子活性起负调节作用的转录因子.哺乳动物含四种Id.自1990年发现Id分子以来,有关该分子在细胞发育成熟、增殖、分化、死亡和肿瘤发生等方面的作用已进行了广泛而深入的研究.作者重点针对Id与肿瘤发生、发展关系的研究进展作一综述.
关键词： 分化抑制因子 螺旋-环-螺旋转录因子 肿瘤
