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在组织芯片上利用量子点技术进行抗原的检测
在组织培养和组织切片上,可利用放射性和非放射性方法检测抗原的定位.而在传统的免疫荧光分析技术中,有机荧光基团存在激发波长范围很窄、发光时间短,容易猝灭等缺点,限制了它们在蛋白定量上的使用.荧光半导体纳米颗粒量子点(quantum dots)提供了一种潜在的方法去克服有机荧光基团的这些缺陷,开始在免疫荧光分析中初步应用,并取得了令人满意的效果.
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在量子点探针介导下共聚焦显微镜检测肾癌组织HSP70的表达意义
本研究探讨新型纳米荧光材料量子点在免疫荧光分析法中的应用价值.我们分别利用量子点QD605或异硫氰酸荧光素(FITC)作为免疫荧光分析中的标记探针,通过激光扫描共聚焦显微镜观察肾细胞癌组织中HSP70的表达,并比较所得图像之间的成像差异性和成像稳定性.在所有的肾细胞癌组织样本中,量子点QD605标记的图像信号都要比常用的荧光染料FITC标记信号发光强度更高,更有特异性,在激光连续照射1 h下QD605标记的图像未有明显的荧光漂白现象,表现出极佳的发光稳定性.因此以新型荧光材料量子点为标记探针,用免疫荧光分析法检测病理组织切片中的蛋白标记物更有特异性,有潜力代替传统的有机荧光染料应用于生物大分子的荧光标记和光学成像.
关键词： 量子点 异硫氰酸荧光素 肾细胞癌 免疫荧光分析 激光扫描共聚焦显微镜 -
食品中沙门氏菌酶联免疫荧光分析(VIDAS Salmonella[SLM]Assay)筛选方法
本方法为AOAC公布的方法996.08,适用于所有食品中沙门氏菌的检测.可能会遇到一定百分率假阳性结果.所有阳性结果必须通过标准培养方法确证.按967.26B(见17.9.07)从增菌培养基和M肉汤划线于选择性培养基培养,对典型或可疑菌落按967.26C(见12.9.02),967.27(见17.9.03)和967.28(见17.9.07)对培养物加以确证.也可按978.24(见17.9.04),989.12(见17.9.05)和989.13(见17.9.06)使用商品化的生化检验盒对食源性沙门氏菌属鉴定.
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量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析金黄葡萄球菌
量子点(Quantum Dots,QD),又称半导体纳米晶体,能够接受激发产生荧光,因此,实际上是一种探针[1].目前,在生物学领域QD应用较多的是Ⅱ-Ⅵ族或Ⅲ-Ⅴ族元素组成的纳米微粒[2].链霉亲和素(streptavidin,SA)又称链霉抗生物素蛋白,具有高度的亲和力,其功能类似亲和素.生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System,BAS)有以下特征[3]:生物素与亲和素具有高度的特异的亲和性,桥联作用和多级放大作用.在量子点表面标记SA,利用生物素-亲和素系统,将制备得到的CdTe-SA标记物与生物素化的抗体、核酸、受体结合,就可把量子点标记到细胞、核酸、蛋白质上,进行示踪检测和功能研究.
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ID3蛋白在肺腺癌中的表达及临床病理学意义
目的 研究分化抑制因子3(ID3)蛋白在肺腺癌中的表达及与临床病理学参数的意义.方法 用间接免疫荧光技术检测ID3在人肺腺癌A549细胞株中的表达情况;用酶免疫组织化学染色技术检测30例肺腺癌和25例正常肺组织标本中ID3的表达情况,分析ID3表达与临床病理参数关系.结果 ID3蛋白在A549细胞中主要表达在细胞核;肺腺癌的阳性表达率为76.7%(23/30);ID3蛋白表达程度与肺腺癌的病理分化程度有关(P<0.05).结论 ID3蛋白在人肺腺癌细胞株呈低水平表达而在人肺腺癌组织中表达量比较高,并与肿瘤分化程度相关.
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检测生殖道沙眼衣原体两种方法的比较
沙眼衣原体(简称CT)是多种疾病的病原体.沙眼衣原体生殖道感染是常见性传染性疾病,可导致男性睾丸附睾炎、女性输卵管炎,并引起一系列并发症.而且多数女性患者临床症状不明显.因此沙眼衣原体感染的诊断需依靠实验室方法学.临床上对沙眼衣原体的实验室诊断一般采取宫颈粘液、尿道试子、前列腺液、尿液、精液作为检测标本.我们应用法国生物梅里埃公司的miniVIDAS全自动酶免疫荧光分析沙眼衣原体检测CHL并与CLEARVIW男女两用衣原体快速检测试剂盒(英国)进行比较,以评价这两种方法对于沙眼衣原体检测的价值.
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i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪性能评价
目的 评价I-CHROMATM READER免疫荧光分析仪的性能.方法 根据文献自行设计方案,以C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)作为分析指标,对仪器的精密度、稳定性、线性、可比性及抗干扰能力等进行评价.结果 批内和批间精密度分别为2.26%～2.94%和2.40%～3.33%,日间精密度3.59%～3.95%,稳定性实验48 h内CV%为2.90%,皆在厂家承诺的范围内;线性实验显示方程为y=1.021x - 0.408,相关系数r=0.998;对比实验表明I-CHROMATM READER免疫荧光分析仪与Beckman Immage特定蛋白分析仪检测结果相关性良好(r=0.977),t=0.842,P>0.05,差异无统计学意义;黄疸和乳糜干扰物对测试结果的影响度分别为-3.4%～3.9%和-3.5～4.6%.结论 该分析仪具有操作简单、检测速度快、精密度高、抗老化性能好、可比性高、抗干扰能力强等特点,适用于医院门、急诊、病房床旁以及社区医疗点.
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防止白蛉叮吸以降低犬源型黑热病传播风险的效果评价
目的 应用干预措施防止白蛉-犬接触,探索控制黑热病传播的有效方法.方法 在文县选择近5年发病率和犬数相近的19个村,以乡为单位分为3组在6～9月实施干预措施.对照组(铁楼乡)无干预措施;石坊乡采取的干预措施为犬喷洒高效氟氯氰菊酯,在6月和8月各一次;石鸡坝乡为采取犬喷洒高效氟氯氰菊酯2次,同时居民使用杀虫剂浸泡蚊帐.干血斑法采集干预前后血清,免疫荧光分析(Immunoflurescence,IFA)法检测黑热病血清抗体.应用x2检验分析干预前后及干预后各组间血清抗体阳性率的差异.结果 家犬喷药组干预前检测血清抗体1 028份,阳性率为5.06％,干预后血清754份,阳性率为3.45％,干预前后差异有统计学意义(x2=13.76,P＜0.05).犬杀虫剂喷洒和悬挂药浸蚊帐组干预前检测血清抗体1 342份,阳性率为4.62％;干预后检测549份,阳性率为1.82％,干预前后差异有统计学意义(x2=2.87,P＜ 0.05).干预后家犬药喷组、联用蚊帐组与对照组血清抗体阳性率x2分析比较,差异均有统计学意义(前者x2=15.27,P＜ 0.05;后者x2=5.12,P＜0.05).结论 夏秋两季家犬杀虫剂喷洒能有效防止白蛉-犬接触,切断黑热病传播环节,降低黑热病高流行区人群发病率.
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免疫荧光分析法在快速诊断 A、B 型流感病毒中的临床应用
目的：探讨 Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统在快速诊断 A、B 型流感病毒中的临床应用价值。方法获取临床168例流感患儿的鼻咽拭子样本，分别通过 Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统和胶体金免疫层析（GICA）法分别进行 A、B 型流感病毒检测，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行验证。结果Sofia Influenza A ＋B FIA 检测系统的阳性检出率为17．86％（30/168），高于 GICA 法；同时，与 RT-PCR 相比，对 A 型流感病毒和 B 型流感病毒的灵敏度分别达到83．3％和71．4％，特异性均达到100．0％。结论Sofia Influenza A＋B FIA 检测系统是一种灵敏度和特异性均较高，能够快速检测 A、B 型流感病毒的方法。
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陕西省安康地区新生儿苯丙酮尿症筛查实验切值的研究
目的 探索安康地区新生儿苯丙酮尿症筛查实验的切值.方法 以安康地区出生的新生儿为筛查对象,于出生后 48～72 h,充分哺乳6次后采取足跟血,应用PerkinElmer Wallac 1420 Victor2多标记免疫测定仪检测标本中苯丙氨酸含量.结果 根据安康地区2010年6月至 2011年 1月10 390例新生儿苯丙酮尿症筛查的数据,确定安康地区新生儿苯丙酮尿症的筛查切值为 121.39 μmol/L.结论 安康地区新生儿苯丙酮尿症的筛查切值略低于新生儿疾病筛查技术规范(2010年版)规定的参考切值122.00 μmol/L和试剂盒初始的切值128.10 μmol/L.为降低假阴性率,筛查实验切值修改为121.39 μmol/L.
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时间分辨免疫荧光法检测乙型肝炎病毒标志物
临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法(ELISA)检测仅乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗-HBc IgG阳性的患者,病毒含量却很高.为此,采用时间分辨免疫荧光分析法(TRF)对34例此类患者进行乙型肝炎标志物(HBV M)的检查,现将结果报道如下.
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i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪检测C反应蛋白的方法学性能评价
目的:对i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪检测C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)进行方法学性能评价.方法:参考美国临床和实验室标准化协会(Association of clinical andlaboratory standards,CLSI)系列文件,结合工作实际,设计验证方案,对i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪检测血清CRP的精密度、准确度、线性、抗干扰能力等4项分析性能进行验证和评价,并将实验结果与厂商(韩国Boditech MedInc公司)提供的分析性能或公认的质量指标进行比较.结果:CRP定量时批内、批间变异系数均符合相关要求;线性实验和准确度实验表明i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪与日本OlympusAU2700(散射比浊法)检测结果相关性良好,线性与厂商承诺范围接近,回归方程经检验有意义;甘油三酯、胆红素对检测结果的影响在可接受的范围.结论:i-CHROMATM READER免疫荧光分析仪检测系统检测血清CRP的分析性能符合厂商提供的性能指标,同时还具有操作简便易行等优点,适合各医疗系统床旁测试检测.
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HBV标志物定量与病毒载量关系探讨
目的 研究乙型肝炎病毒各血清标志物含量与HBV-DNA含量的关系.方法 采用时间分辨免疫荧光分析法(TRIFA)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别测定1 486例乙肝患者血清中乙型肝炎病毒抗原抗体定量和病毒含量.结果 不同HBV标志物阳性模式的HBsAg定量存在显著差异,相同模式的HBsAg定量也差异极大.HBeAg(+)模式的HBV-DNA显著高于HBeAb(+)模式及HBeAg(-)HBeAb(-)模式(P＜0.01),而后两者间无显著差异(P＞0.05).HBsAg、HBeAg含量与HBV DNA正相关(r值分别为0.383、0.635,P=0.01),HBeAb含量与HBV DNA负相关(r=-0.563,P=0.01).HBsAg定量与HBeAg定量正相关(r=0.466,P=0.01),与HBeAb定量负相关(r=-0.524,P=0.01).结论 HBV标志物定量之间及与HBV DNA含量间存在一定相关性,但个体差异极大.全面了解HBV标志物含量及HBV DNA定量可更准确判断病毒复制、状态,为临床决策提供可靠依据.
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三种检测SARS抗体试剂盒的临床使用效果比较
目的:对重组双抗原夹心法ELISA、全病毒间接法ELISA和免疫荧光分析法3种SARS抗体诊断试剂盒进行临床应用效果评价,比较不同试剂的使用效果.方法:使用3种试剂检测了257例临床确诊SARS患者的血清标本279例和其他非SARS患者标本24例、健康体检者血清标本80份.结果:临床确诊SARS患者发病1～20 d的病例中双抗原夹心法ELISA检出率高,间接免疫荧光法与其接近,全病毒间接法ELISA检出率低.在发病20 d后,三者检出率接近(94%左右),3种方法的符合率在97%以上.在104例非SARS病例中,双抗原夹心法ELISA和免疫荧光法均未见出阳性结果,全病毒间接法ELISA检出阳性结果3例,假阳性率2.9%.结论:检测SARS抗体双抗原夹心法ELISA试剂盒、免疫荧光试剂盒具有类似的灵敏度和特异性,其灵敏度和特异性高于全病毒间接法ELISA.
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藻胆蛋白荧光免疫检测中包被条件的探讨
目的初步确定藻胆蛋白荧光免疫检测适用的包被缓冲液.方法结合普及型藻胆蛋白荧光标记诊断试剂盒的研制,比较不同pH值和不同离子强度的包被缓冲液对抗体包被效果的影响.结果 0.01M,pH8.0磷酸盐缓冲液作为包被液是较为适宜的包被条件.结论该包被条件有利于在包被环节保持抗体活性,提高抗体的固相包被容量.
