首页 > 文献资料
-
阿西替尼与多柔比星协同抗肿瘤活性研究
为了研究阿西替尼与多柔比星的协同抗肿瘤活性,在体外用不同浓度的阿西替尼与多柔比星混合溶液处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT法测定药物对肿瘤细胞及肿瘤球的生长抑制率,考察其协同作用.通过细胞摄取实验、细胞周期分布实验及DNA ladder实验对阿西替尼与多柔比星协同作用的机制进行初步探索.以A549实体瘤荷瘤裸鼠为模型,考察阿西替尼与多柔比星联合应用的体内抗肿瘤效果.结果显示,阿西替尼与多柔比星联用具有高度协同的抗肿瘤效果,其体外细胞毒性显著强于两种药物单独使用,且对肿瘤细胞和肿瘤球的生长抑制作用呈现时间-浓度依赖性;体内研究表明,阿西替尼与多柔比星联合使用能够显著抑制荷瘤裸鼠的肿瘤生长,且其抑瘤效果显著优于两药单独使用.
-
穿心莲内酯对人肺腺癌A549细胞NF-κB通路的调控作用
目的 探讨穿心莲内酯对肿瘤细胞生长的作用及机制.方法 人肺腺癌A549细胞分别与穿心莲内酯1.5～30 μmol·L-1作用24 h,以及穿心莲内酯30 μmol·L-1作用4～24 h.用MTT法检测A549细胞存活率;Western印迹法检测在肿瘤坏死因子α(TNF-α)10 μg·L-1刺激下,穿心莲内酯30 μmol·L-1对 NF-κB信号通路中的相关蛋白NF-κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα、IκB激酶β(IKKβ)和磷酸化IKKβ表达的影响;ELISA法检测穿心莲内酯对A549细胞核内NF-κB DNA结合活性的影响.结果 穿心莲内酯的浓度和作用时间与A549细胞的存活率密切相关,穿心莲内酯30 μmol·L-1作用24 h,A549细胞的存活率下降到(22.0±1.2)%,而穿心莲内酯1.5 μmol·L-1作用24 h或者穿心莲内酯30 μmol·L-1作用4 h对A549细胞的存活率几乎无影响.Western印迹法显示,穿心莲内酯能够抑制TNF-α诱导的NF-κB信号通路中IKKβ的磷酸化,抑制IκBα的磷酸化,推迟IκBα的降解,对IKKβ的表达无影响.穿心莲内酯还能够抑制TNF-α诱导的A549细胞核内NF-κB p65蛋白的DNA结合活性,抑制率达32%.结论 穿心莲内酯通过影响NF-κB信号通路抑制A549细胞的生长.
-
补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究
目的 从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择佳含药血清的浓度.方法 采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5％和10％的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出佳含药血清浓度,计算出佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数.结果 补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系.5％高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5％中剂量组和5％低剂量组,并与5％空白血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).10％各剂量组对A549/DDP的抑制率与10％空白血清组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).经筛选,10％中剂量含药血清作用48 h为佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降(P＜0.05),对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46.结论 10％中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用.
关键词： MTT法 A549/DDP细胞株 A549细胞株 补中益气汤含药血清 耐药逆转 -
C595对人肺癌A549细胞株增殖及凋亡作用
目的 探究C595对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡作用.方法 MUC1蛋白核心的重复序列IgG3单克隆抗体(C595)经免疫荧光标记及流式细胞术检测,分析C595对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡.结果 A549细胞膜表面覆盖97.3％MUC1表达量,阴性对照组覆盖MUC1表达量1.03％;C595浓度增加,A549细胞株增殖抑制效果越强,凋亡率增加,存活率降低.结论 单克隆抗体C595在体外抑制人肺癌细胞A549生长,C595浓度增加,A549细胞存活率降低,凋亡率增加.
-
三种鸡胚绒膜尿囊膜移植瘤模型对比分析
目的 通过比较三种不同癌细胞株在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的生长情况,从中筛选佳移植癌细胞株,建立移植瘤模型并观察生物学特性.方法 分别将人肺癌A549株、舌鳞癌TCA8113株与人肝癌QGY7703株接种于7日龄鸡胚CAM上,对各自鸡胚成活率、瘤株成活、成瘤率和诱导血管生成情况等指标进行检测,并观察筛选移植瘤模型生长特性.结果 与人肺癌A549株和肝癌QGY7703株接种组相比,舌鳞癌TCA8113株接种组成瘤率高(P < 0.05),为佳移植癌细胞株,佳接种癌细胞数量为8.0×106/个,接种后瘤体佳生长周期为4 ~ 8 d,佳实验时间为接种后第7 天.结论 筛选建立了舌鳞癌TCA-CAM移植瘤模型,为深入研究肿瘤生长生物学特性、血管生成机制、侵袭转移机制和筛选抗肿瘤药物提供了良好的实验动物模型.
-
六君子汤含药血清对A549/DDP细胞及E-cadherin和N-cadherin表达的影响
目的 研究六君子汤含药血清对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂(DDP)耐药的作用及其对上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响.方法 采用血清药理学方法制备含药血清,随机将40只SD大鼠分为血清对照组和六君子汤(高、中、低剂量)含药血清组,每日灌胃给药1次,连续5天后提取血清.再用培养液将各组血清稀释成5％和10％浓度作用于A549/DDP细胞株12h、24h、48h,以此筛选出佳浓度及佳作用时间点.MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,计算耐药逆转倍数;免疫细胞化学法和Western blot检测各组细胞中E-eadherin和N-cadherin蛋白的表达.结果 六君子汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系,中剂量10％浓度含药血清作用48h作用较强且细胞毒性低,在此浓度下,TGF-β1诱导的A549/DDP的IC50明显下降(R0.05),对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数为4.12,E-cadherin表达水平上调,N-cadherin的表达水平下调.结论 六君子汤含药血清逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药可能与抑制细胞上皮-间质转化,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.
-
FTY720与吉西他滨对非小细胞肺癌A549和H520细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨FTY720、吉西他滨以及两种联合应用对非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤细胞株A549和H520增殖和凋亡的影响.方法 培养NSCLC肿瘤细胞株A549和H520,采集对数生长周期的A549、H520,接种于培养板中,分别向培养孔加入不同浓度的FTY720以及两种药物的联合,培养48h后计算细胞存活率,应用双染流式细胞检测技术检测细胞凋亡情况.结果 FTY720不同浓度下培养24h、48h、72h,A549细胞、H520细胞的存活率均呈浓度依赖性,药物浓度越高,细胞存活率越低.联合用药的细胞存活率明显低于单独用药(P＜0.05),细胞凋亡率明显高于单独用药(JP＜0.05).结论 FTY720与吉西他滨联合应用有效提高吉西他滨对NSCLC肿瘤细胞株A549、H520的敏感性,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.
-
抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞的研究
目的:探讨抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞株的可行性.方法:构建c-FLIPL序列特异性siRNAs表达载体并转染A549细胞抑制c-FLIPL基因表达,化学抑制剂他莫昔芬抑制c-FLIPL蛋白表达.RT-PCR和Western blot法检测c-FLIPL 的mRNA和蛋白表达的变化.Western blot法检测caspase-8的活化情况.流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,MTT法检测联合应用RNAi+rhTRAIL和他莫昔芬+rhTRAIL对A549细胞的杀伤活性.结果:特异性siRNA片段能显著降低A549细胞中c-FLIPL的mRNA水平和蛋白水平.他莫昔芬可以显著抑制c-FLIPL蛋白的表达.两者均可以实现caspase-8的活化,并促进rhTRAIL对A549细胞诱导凋亡作用,凋亡率从2.52%提高到64.5%和59.2%(P<0.05),他莫昔芬和siRNA均可显著促进rhTRAIL蛋白对A549细胞的增殖抑制作用,抑制率分别提高到73.2%和69.5%(P<0.05).结论:靶向抑制FLIP蛋白表达能增加A549细胞对rhTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的研究应用.
关键词： 重组TRAIL蛋白 凋亡抑制基因FLIP A549细胞株 非小细胞肺癌 -
Akt磷酸化在A549细胞抵抗rsTRAIL蛋白诱导细胞凋亡的研究
目的：研究Akt磷酸化抵抗rsTRAIL蛋白诱导肺癌A549细胞株凋亡的作用机制。方法：rsTRAIL蛋白和哌立福新单独和联合作用于细胞株A549，Western blot检测A549细胞中Akt磷酸化水平变化、c-FLIPLL表达水平变化、caspase-8蛋白活化变化情况。流式细胞术进行细胞凋亡检测。 MTT法检测A549细胞增殖率。结果：Western blot结果显示，rsTRAIL蛋白可以导致A549细胞中Akt磷酸化水平的增加，哌立福新能够抑制A549细胞中Akt的磷酸化水平及c-FLIPLL表达水平，增强A549细胞中caspase-8的活化。哌立福新能提升rsTRAIL蛋白诱导A549细胞的细胞凋亡率至（76．5±3．02）％和杀伤活性到（83．2±2．54）％。结论：Akt磷酸化是导致A549细胞对抵抗rsTRAIL 诱导细胞凋亡的重要原因，抑制其活性可以促进rsTRAIL蛋白发挥抗NSCLC的活性。
-
稳定表达p120ctn的人肺腺癌A549细胞株的构建
目的:构建稳定表达p120ctn的A549细胞株,以研究p120ctn蛋白在肺癌发生和转移过程中的作用.方法:通过分子克隆,将pcDNA3.1多克隆位点插入Flag标签的编码序列,得到pcDNA.Flag表达载体.然后PCR扩增p120ctn的编码序列,插入Flag标签下游,构建pcDNA.Flag-p 120ctn质粒,筛选阳性克隆并进行酶切及测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000将pcDNA.Flag-p120ctn质粒转染到肺癌细胞A549中,通过G418筛选得到稳定转染细胞株,免疫印迹法检测p120ctn的表达.结果:本文构建了融合有Flag标签的p120ctn真核表达载体并转染到A549中,免疫印迹结果表明p120ctn蛋白在A549细胞中高效的表达.结论:本文成功构建了稳定高表达p120ctn的A549细胞模型,为深入研究p120ctn在肺癌的发生和转移过程中的作用奠定了基础.
-
三草方提取物对肺腺癌A549细胞的作用
目的:研究三草方(夏枯草、白花蛇舌草、仙鹤草)的不同极性提取部位及其配伍后对人肺腺癌A549细胞株增殖活性的影响.方法:采用醇提取法和水提取法分别制备三草方的95%、60%、30%醇提部位、水提部位;以MTT法测定水煎液和各不同极性部位及其配伍后对A549细胞的增殖活性的影响.结果:在三草方60%醇提部位对A549细胞的IC_(50)低;60%和95%醇提部位配伍后有明显的协同抑瘤活性.结论:三草方的95%和60%醇提部位间的配伍具有良好的抗肺癌作用.
-
基底应变对肺癌细胞形态调整的影响
目的从肺腺癌A549细胞对拉伸应力响应时释放出的细胞形变调整行为,解读肿瘤细胞骨架异常与其生物学行为的相关性.方法使用单向等轴应变加载装置对培养的肺腺癌A549细胞施以周期性基底拉伸加载,通过计算机图像处理并与对照组进行比较.结果(1)A549细胞的形态在加载中有明显的变化,铺展面积明显增大,细胞外形变得非常不规则,即,细胞不规则度增加;(2)与对照组比较,加载组细胞细胞核的铺展面积增大,拉伸引起细胞核形态的变化比较小,加载组与对照组细胞核的形态差别不大;(3)周期性拉伸引起了细胞取向的调整,细胞调整到与主应变近似垂直的方向,许多细胞拉长首尾连成一线,线的取向趋于与主应变方向垂直.结论A549细胞的细胞骨架各组份间对应力的响应协同反应下降;肺腺癌A549细胞对应力方向的呼应尚属正常.
-
半夏总生物碱对人肺癌细胞增殖的抑制作用
目的 探讨半夏总生物碱(total alkaloids from Pinellia Ternata,TATP)对人肺癌细胞株A549增殖的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolil tetracolium,MTT)比色法以及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对A549细胞株的生长抑制作用.应用单细胞凝胶电泳分析检测TATP导致A549细胞的DNA损伤情况.结果 人肺癌细胞A549经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义.单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量、尾长及尾动量与对照组相比差异显著(P＜0.01),且呈现浓度依赖性.结论 在体外培养的条件下,TATP能明显抑制A549细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关.
-
ID3蛋白在肺腺癌中的表达及临床病理学意义
目的 研究分化抑制因子3(ID3)蛋白在肺腺癌中的表达及与临床病理学参数的意义.方法 用间接免疫荧光技术检测ID3在人肺腺癌A549细胞株中的表达情况;用酶免疫组织化学染色技术检测30例肺腺癌和25例正常肺组织标本中ID3的表达情况,分析ID3表达与临床病理参数关系.结果 ID3蛋白在A549细胞中主要表达在细胞核;肺腺癌的阳性表达率为76.7%(23/30);ID3蛋白表达程度与肺腺癌的病理分化程度有关(P<0.05).结论 ID3蛋白在人肺腺癌细胞株呈低水平表达而在人肺腺癌组织中表达量比较高,并与肿瘤分化程度相关.
-
下调微小RNA-3917对肺腺癌A549细胞增殖及PER2表达的影响
目的探讨微小RNA-3917(miR-3917)对肺癌细胞增殖及对生物钟基因Period2(PER2)表达的影响.方法取复苏后的肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,采用脂质体法向A549细胞转染10、20、50 nmol/L靶向miR-3917的 siRNA表达载体pEGFP-miR-3917-siRNA质粒,转染48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达;根据实验设计分为对照组、空载体组和干扰组,空载体组及干扰组的质粒浓度均为50 nmol/L,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染48 h后的 miR-3917相对表达量,QPCR和Western blotting分别检测转染48 h后的PER2 mRNA和蛋白水平,采用CCK-8法检测各组转染24、48、72 h的A549细胞增殖抑制率,双荧光素酶靶标实验验证miR-3917与PER2的相互关系.结果QPCR检测发现对照组、空载体组和干扰组的miR-3917相对表达量依次为1.007±0.018、1.068±0.084和0.171±0.052,干扰组的miR-3917相对表达量低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).对照组、空载体组和干扰组的PER2 mRNA相对表达量依次为1.060±0.129、1.086±0.229和2.920±0.927,蛋白表达量依次为0.204±0.046、0.183±0.043和0.512±0.117,干扰组的 PER2 mRNA和蛋白水平均高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组和空载体组比较,干扰组的A549细胞增殖能力下降,转染24、48、72h后的增殖抑制率依次为(34.192±5.268)％、(33.527±6.603)％和(30.591±7.788)％,均高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05).miR-3917可显著抑制野生型PER2-3' UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型PER2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响.结论下调miR-3917可抑制肺癌细胞增殖并升高PER2水平, miR-3917对PER2有靶向调控作用,可作为肺癌防治的新靶点.
-
鼠肌核心蛋白聚糖的研制
目的:从动物组织中提取纯化核心蛋白聚糖(Decor in),检测其活性.方法:以大鼠肌肉为原料,采用匀浆、透析、层析等步骤分离、纯化Decorin,经SDS-PAGE检测其分子量和纯度,并经细胞株A549检测生物学活性结果:Decorin在SDS-PAGE显示分子量约为37～38 kD两条带 ,得率约为2 mg/g组织,对A549具有明显的抑制生长活性,抑制率＞50%.结论:此法获得的Decorin将有可能作为天然药物用于治疗肿瘤.
-
榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响
目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用.用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化.结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性.作用24h后G/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加.结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡.
-
一种简单可靠的A549裸小鼠原位接种模型的建立
目的:建立一种易操作、可靠的A549原位接种模型.方法:人肺腺癌细胞株A549悬浮于matrigel中,接种于裸小鼠左肺或右侧前肢皮下,观察肿瘤生长状况及化疗药卡铂的抗肿瘤作用.结果:肿瘤在胸腔中形成,并扩展至对侧肺.与皮下肿瘤模型相比,生长在肺中的肿瘤对卡铂不敏感.结论:该A549原位接种模型简单可行,可用于筛选新型抗肺癌活性化合物.
-
多西紫杉醇对人非小细胞肺癌细胞株A549生长的影响及机制的体外研究
目的:探讨多西紫杉醇诱导肺癌细胞株A549细胞的生长抑制作用及其对凋亡相关基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法测定整合素α5β1,bcl-2,bax等凋亡相关基因mRNA的表达.结果:(1)多西紫杉醇在1.33～108μ/ml浓度范围内可抑制A549细胞增殖,且此作用与药物浓度、作用时间呈明显相关关系(r=0.947、0.979,P=0.014、0.004).(2)4～36μg/ml多西紫杉醇作用12～48 h,A549细胞可见典型的凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率随药物浓度增加而升高,呈浓度依赖性(r=0.999,P=0.034).(3)RT-PCR结果显示,多西紫杉醇可明显抑制A549细胞中表达α5,整合素亚基基因,使其bcl2/bax比值明显降低,差异均有统计意义(t=10.147、4.583,P=0.01、0.044).但多西紫杉醇对A549细胞表达VEGF、bFGF、β1整合素亚基基因无明显影响(P＞0.05).结论:多西紫杉醇可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制是通过抑制Bcl-2/Bax表达比例诱导其凋亡,并可能抑制整合素α5β1表达而影响A549细胞的增殖、黏附,以及转移能力.
-
沉默表达miR-26a A549细胞株的构建
目的 构建稳定沉默表达miR-26a的人肺腺癌细胞株(A549).方法 体外合成成熟的人miR-26a-5p(Hsa-miR-26a-5p)特异性互补序列,在片段两侧添加Age I、EcoRI酶切位点,与经双酶切后的GV280载体连接,构建GV280-miR-26a-down慢病毒载体.应用DNA测序对此重组载体进行鉴定.将GV280-miR-26a-down慢病毒载体与病毒包装质粒pGC-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒.依据293T细胞绿色荧光蛋白的表达量确定病毒滴度.将沉默表达miR-26a的慢病毒转染A549细胞,嘌呤霉素筛选后获得稳定细胞株.应用Western blot法检测miR-26a一个靶基因SMAD1的表达情况,验证此细胞株的功能.结果 经DNA测序鉴定,成功构建了GV280-miR-26a-down慢病毒载体.在293T细胞中将该载体包装成慢病毒,测定病毒滴度为2×1012 TU/L.重组慢病毒转染A549细胞的效率高达95％,用2.5 mg/L嘌呤霉素筛选2周后几乎100％的A549细胞表达GFP.Western blot结果显示miR-26a的靶基因SMAD1的表达量在miR-26a沉默组比空载病毒组和空白对照组明显上调.结论 成功构建了GV280-miR-26a-down慢病毒载体,并构建稳定沉默表达miR-26a的A549细胞株,为后续研究奠定了基础.
