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补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究
目的 从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择佳含药血清的浓度.方法 采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5％和10％的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出佳含药血清浓度,计算出佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数.结果 补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系.5％高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5％中剂量组和5％低剂量组,并与5％空白血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).10％各剂量组对A549/DDP的抑制率与10％空白血清组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).经筛选,10％中剂量含药血清作用48 h为佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降(P＜0.05),对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46.结论 10％中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用.
关键词： MTT法 A549/DDP细胞株 A549细胞株 补中益气汤含药血清 耐药逆转 -
补中益气汤含药血清对A549／DDP细胞PI3 K、AKT、S urvivin表达的影响
目的：观察补中益气汤含药血清对肺腺癌耐顺铂细胞株（A549/DDP）磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase， PI3K）、丝/苏氨酸蛋白激酶（protein kinase B，AKT）、生存素（Survivin）蛋白表达的影响，探讨其作用机制。方法制备中剂量补中益气汤含药血清（0.576 g/mL），将A549/DDP细胞分成4组：空白血清组、佳含药血清组、LY294002组、佳含药血清组＋LY294002组（即联合组）。采用免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法（western blot）方法检测PI3K、AKT和Survivin蛋白的表达。结果佳含药血清组和联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达显著低于空白血清组（P＜0.05），联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白减少的更加明显，但与佳含药血清组相比无统计学差异；LY294002组Survivin蛋白的表达明显低于空白血清对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论补中益气汤含药血清作用于PI3K/AKT信号转导通路，能降低肺腺癌顺铂耐药细胞株PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达，提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。
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补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究
目的 探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响.方法 根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组.检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达.结果 与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15％补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P＜0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15％空白血清组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关.
