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金雀异黄素对人胃腺癌细胞中Akt及其磷酸化蛋白表达的影响
目的:研究金雀异黄素(Genistein)对人胃腺癌细胞SGC-7901中Akt及其磷酸化蛋白p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)表达的影响.方法:用浓度为0,5,10,20,40和80μmo1/L的Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测Genistein对SGC-7901增殖的抑制作用,Hoechst 33342染色观察Genistein对SGC-7901凋亡的诱导作用,Westem blot方法检测不同浓度Genistein处理后的SGC-7901细胞中Akt,p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)的表达情况.结果:5,10,20,40和80 μmol/L的Genistein对SGC-7901细胞增殖的抑制率分别为6.85%±3.71%,13.19%±1.90%,20.94%±1.83%,29.58%±1.19%和41.75%±1.92%.20-80μmo1/L的Genistein处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变.Genistein对细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响.不同浓度Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,均有两种磷酸化Akt蛋白的表达,两种磷酸化蛋白表达均随Genistein浓度的增加而逐渐减弱,80 μmo1/L Genistein处理组表达弱.结论:Genistein的抗癌活性与其抑制磷酸化Akt蛋白表达有关.
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蛋白激酶CK2抑制剂的研究进展
蛋白激酶CK2又称酪蛋白激酶2,是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,广泛分布于真核细胞的胞质及胞核中.全酶由两个催化亚基(α/α')和两个调节亚基(β)所组成.在细胞内CK2具有基础酶活性,可使300多个底物磷酸化,在细胞生长、增殖、凋亡和癌变等过程中发挥重要的作用,参与多种疾病的发生和发展进程.因此,CK2已成为一个有前景的治疗靶点.不同作用模式的CK2抑制剂相继诞生,有ATP竞争性和非ATP竞争性抑制剂,而后者又包括底物靶向抑制剂、CK2α亚基外部靶向抑制剂、CK2β亚基靶向抑制剂及阻断亚基相互作用的抑制剂等.
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以PLK1PBD为靶点小分子抑制剂的筛选及抗肿瘤活性研究
采用荧光偏振高通量筛选的方法进行PLK1 PBD小分子抑制剂的筛选,对筛选出的阳性化合物F083-0063进行体外抗肿瘤活性研究,以期为寻找抗肿瘤药物提供先导化合物.模型筛选获取一个对PLK1 PBD抑制率较高的化合物F083-0063,其在10 μg.mL-1时的抑制率达(99.7± 0.4)％;利用软件Graphpad Prism 5计算IC50为1.9±0.1 μmol.L-1;噻唑蓝比色法(MTT)研究该化合物对不同细胞系增殖的影响,结果显示F083-0063能抑制多种肿瘤细胞系的增殖;流式细胞仪检测发现,其能促进细胞凋亡且能导致细胞G2/M期阻滞;划痕实验测定F083-0063对细胞迁移的影响,结果显示其能抑制HeLa细胞迁移,在20 μmol.L-1时,迁移率低至(37.6± 0.7)％.利用分子连接技术探讨化合物与PLK1 PBD结构域的亲和力,发现F083-0063与PLK1 PBD有较好的亲和性;免疫印迹法(Western blotting)检测显示F083-0063可以引发周期相关蛋白表达的增加.综上所述,化合物F083-0063有明显的抗肿瘤活性,并有望成为靶向PLK1 PBD的抗肿瘤先导化合物.
关键词： 抗肿瘤药 荧光偏振法 PLK1 PBD抑制剂 丝/苏氨酸蛋白激酶 保罗样激酶 -
升清降糖合剂对氧化损伤胰岛β细胞Bcl -2、Bax、Akt表达的影响
目的:研究升清降糖合剂(SQ)对氧化损伤胰岛β细胞凋亡的保护作用,探讨其对凋亡蛋白Bcl -2和Bax、Akt蛋白表达的影响.方法:H2O2诱导胰岛细胞氧化损伤模型,流式细胞术测定胰岛细胞凋亡率,以荧光免疫法检测细胞凋亡蛋白Bcl -2和Bax的表达,免疫印迹测定细胞Akt磷酸化表达.结果:模型组细胞凋亡率增高,达(35.18±2.41)％,与正常组比较有差异(P＜0.01),与SQ保护组比较有差异(P＜0.01).模型组细胞内Bax荧光表达较正常组增加(P＜0.05)；SQ保护组Bcl -2荧光表达上升,Bax荧光表达下降,与模型组比较,均有统计学差异(P＜0.05).对于胰岛细胞瘤株RINm5F,模型组磷酸化Akt蛋白表达减少,与正常组比较有统计学差异(P＜0.05),与保护组比较有统计学差异(P＜0.01)；对于原代胰岛,模型组磷酸化Akt蛋白减少,与正常组比较有统计学差异(P＜0.05),与保护组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:升清降糖合剂可降低氧化损伤胰岛β细胞凋亡率,上调Bcl -2,抑制Bax蛋白表达,促进Akt磷酸化.升降糖合剂抗氧化和抗凋亡机制与调节凋亡蛋白Bcl -2和Bax及PBK - Akt通路有关.
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Streptomyces coelicolor A3(2) M145中丝/苏氨酸蛋白激酶基因prkC的功能初探
目的 对Streptomyces coelicolor A3(2)M145中编码丝/苏氨酸蛋白激酶PrkC的基因SCO3848进行功能初探.方法 对PrkC蛋白序列进行生物信息学分析,在S.coelicolor A3 (2) M145中敲除prkC基因,并进行互补、和过表达实验,对比突变菌株生长、次生代谢物产量、孢子萌发效率等.结果 prkC基因在S.coelicolor A3(2) M145孢子萌发、生长、次生代谢等方面均起重要作用.结论 prkC是一个多效调节基因,其具体生理功能和作用机制有待深入研究.
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过氧化氢对PC12细胞PI3K、Akt表达的影响
目的 探讨不同浓度过氧化氢(H2O2)对PC12细胞PI3K、Akt mRNA及蛋白表达的影响,为氧化损伤致PC12细胞凋亡提供实验依据.方法 PC12细胞贴壁后,换无血清DMEM培养液继续培养24 h,实验分为对照组、不同浓度H2O2组(100、150、200 μmol·L-1).24h后,采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达变化.结果 与对照组相比,各浓度H2O2均可降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,且随着H2O2浓度增加,与对照组相比,PI3K、Akt mRNA表达逐渐降低(P ＜0.05);PI3K、Akt蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05);且150 μmol·L-1H2O2可显著降低PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达(P＜0.05).结论 H2O2可剂量依赖性的降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,从而诱导PC12细胞的凋亡.
关键词： 过氧化氢 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 磷脂酰肌醇3激酶 丝/苏氨酸蛋白激酶 -
BCL11A、LKB1在非小细胞肺癌组织中的表达及意义
目的:本研究旨在探讨非小细胞肺癌中BCL11A、LKB1的表达情况,探索BCL11A与LKB1在肺癌发生及演变过程中的作用机制及两者之间的关系,为非小细胞肺癌的发生机制提供理论基础,并为非小细胞肺癌的早期诊断提供新思路.方法:(1)试验分组:60例非小细胞肺癌标本及40例正常对照肺组织.(2)采用免疫组织化学方法检测BCL11A及LKB1表达情况.结果:(1)非小细胞肺癌组织中,BCL11A阳性表达率显著高于对照组(P＜0.05).LKB1阳性表达率显著低于对照组(P＜0.05).两者的表达与性别、年龄及组织学类型无关,而与癌组织的分化程度、临床分期及淋巴结转移密切相关.(2)非小细胞肺癌组织中,BCL11A和LKB1两者表达强度之间呈负相关(P＜0.05).结论:(1)在非小细胞肺癌组织中BCL11A的高表达与LKB1的低表达密切相关,可能参与了非小细胞肺癌的演进.(2)LKB1基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度的非小细胞肺癌发生、发展中存在重要意义,可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标.
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补中益气汤含药血清对A549／DDP细胞PI3 K、AKT、S urvivin表达的影响
目的：观察补中益气汤含药血清对肺腺癌耐顺铂细胞株（A549/DDP）磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase， PI3K）、丝/苏氨酸蛋白激酶（protein kinase B，AKT）、生存素（Survivin）蛋白表达的影响，探讨其作用机制。方法制备中剂量补中益气汤含药血清（0.576 g/mL），将A549/DDP细胞分成4组：空白血清组、佳含药血清组、LY294002组、佳含药血清组＋LY294002组（即联合组）。采用免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法（western blot）方法检测PI3K、AKT和Survivin蛋白的表达。结果佳含药血清组和联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达显著低于空白血清组（P＜0.05），联合组PI3K、AKT、Survivin蛋白减少的更加明显，但与佳含药血清组相比无统计学差异；LY294002组Survivin蛋白的表达明显低于空白血清对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论补中益气汤含药血清作用于PI3K/AKT信号转导通路，能降低肺腺癌顺铂耐药细胞株PI3K、AKT、Survivin蛋白的表达，提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。
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CD151对脐静脉内皮细胞Akt-Ser473 位点磷酸化和细胞增殖的影响
目的:研究CD151对脐静脉内皮细胞(HUVEC)丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷酸化Akt-Ser473(p-Akt-Ser473)表达和细胞增殖的影响. 方法:通过构建pAAV-CD151质粒并转染HUVEC,HUVEC分为正常对照组、绿色荧光蛋白(GFP)组和CD151组.Western Blot检测CD151及Akt、p-Akt-Ser473表达,MTT法测定脐静脉内皮细胞的增殖能力. 结果:① CD151组CD151及p-Akt-Ser473表达明显增加,CD151组与正常对照组和GFP组比较有显著性差异(P＜0.05),而总Akt三组间无明显差异(P＞0.05).②MTT法检测正常对照组、pAAV-GFP转染组、pAAV-CD151转染组的A值分别为0.1663±0.0095、0.169±0.0085和0.2457±0.0044,pAAV-CD151转染组较pAAV-GFP转染组和正常对照组细胞增殖能力增强,且有显著性差异(P＜0.05). 结论:CD151具有促进内皮细胞增殖的作用.CD151可能是通过激活p-Akt-Ser473,增加Akt活力,达到促进细胞增殖的作用.
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特异性Aurora激酶抑制剂对人乳腺癌原代细胞增殖、周期、自噬、凋亡的影响及其机制
目的 观察特异性丝/苏氨酸蛋白(Aurora)激酶抑制剂AT9283对乳腺癌原代细胞增殖、细胞周期、自噬、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法 取对数生长期乳腺癌原代细胞,加入AT9283,培养48 h免疫荧光染色后镜下观察乳腺癌原代细胞细胞核和纺锤体变化.取对数生长期乳腺癌原代细胞,分为实验组(1、2、3、4、5组)和对照组,实验组分别加入2 mL的0.001、0.01、0.1、1、10 μmol/L AT9283,对照组不做任何处理,MTT法测算实验组细胞增殖抑制率,流式细胞仪分析各组细胞周期,Western Blotting法检测各组Aurora A、组蛋白H3(Histone H3)、p-AuroraA、p-Histone H3、p21、p53、Bcl-2、Bax蛋白.另取适量乳腺癌原代细胞,分为A、B、C、D四组,A、B、C组分别加入0.1、1、10 μmol/L的AT9283,D组不做任何处理,共培养24 h.采用吖啶橙染色法观察各组细胞自噬情况,采用流式细胞术观察各组细胞凋亡情况.结果 未处理乳腺癌原代细胞的细胞核和纺锤体没有改变,加入AT9283处理的乳腺癌原代细胞镜下可见细胞核形态改变,出现核分叶现象,产生多核细胞,纺锤体由双极变为单极,出现纺锤体紊乱.与对照组比较,培养24、48 h时1、2、3、4、5组细胞增殖抑制率均升高,且呈浓度依赖性(P均＜0.05).与对照组比较,各组G2/M期细胞所占比例升高,G0/G1、S期细胞比例降低(P均＜0.05),且呈剂量依赖性.与对照组比较,各组p-AuroraA、p-Histone H3、Bcl-2相对表达量降低,p21、p53、Bax相对表达量增加(P均＜0.05).A、B、C、D组自噬率分别为1.03％±0.01％、5.02％±0.31％、10.11％±0.31％、14.52％±0.21％,细胞凋亡率分别为3.03％士0.14％、8.25％±0.31％、12.15％±0.31％、44.52％±1.34％,组间两两比较,P均＜0.05.结论 AT9283可抑制乳腺癌原代细胞的增殖,使G2/M期细胞所占比例升高,促进细胞自噬、凋亡,且作用呈剂量依赖性.其机制可能为AT9283抑制乳腺癌原代细胞p-AuroraA、p-Histone H3、Bcl-2表达,促进p21、p53、Bax表达.
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Akt信号在苯丙胺致大鼠黑质损伤中的变化
目的 探讨Akt信号在苯丙胺致大鼠黑质损伤中的变化.方法 给大鼠腹腔注射苯丙胺(2.5 mg·kg-1·d-1),分为苯丙胺1h、1d、7d和14 d组.用透射电镜观察大鼠黑质超微结构的变化,用Western blot检测Akt和mTORC2蛋白在黑质的变化.结果 苯丙胺14 d组一些黑质神经元结构模糊,核固缩.许多髓鞘变形,髓鞘板层不清晰.苯丙胺1 h P-Akt(Thr308)表达没有显著性变化.苯丙胺1d组、7d组和14 d组的P-Akt (Thr308)表达明显减少.苯丙胺各组P-rictor(S1219)的表达均无显著性差异.结论 苯丙胺对大鼠黑质神经元的损伤可能与抑制Akt信号有关.
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丝/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70S6K信号通路在口腔鳞癌中的表达及临床意义
目的：探讨丝/苏氨酸蛋白激酶（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/p70S6K信号通路在口腔鳞癌组织中的表达情况，为口腔鳞癌的早期诊断和治疗提供参考。方法收集口腔鳞癌标本51例，癌旁黏膜组织10例，正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学SP法检测口腔鳞癌、癌旁黏膜组织及正常口腔黏膜中p-Akt、p-mTOR及p70S6K的表达情况，分析三者相互之间表达的相关性。结果 p-Akt、p-mTOR及p70S6K在口腔鳞癌组中的表达显著高于正常口腔黏膜组和癌旁黏膜组的表达。p-Akt、p-mTOR及p70S6K在口腔鳞癌的表达与患者的年龄、性别及临床分期无相关性，但与口腔鳞癌的分化程度及有无淋巴结转移有相关性。p-Akt、p-mTOR及p70S6K在口腔鳞癌的表达相互之间具有较强的正相关关系。结论 Akt/mTOR/p70S6K信号通路分子在口腔鳞癌中表达活跃，提示可能与口腔鳞癌的发生发展具有重要的相关性。
关键词： 丝/苏氨酸蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 P70S6K 口腔鳞癌 免疫组织化学 -
多发性骨髓瘤的治疗进展
本文通过分析多发性骨髓瘤的治疗进展,旨在为多发性骨髓瘤治疗提供新的靶点.研究发现磷脂酰肌醇3-激酶( phos-phatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸蛋白激酶Akt/及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,mTOR) 所组成的信号通路在多发性骨髓瘤中的发生发展中可以促进瘤细胞的增殖、抑制凋亡及促进血管新生.故通过多步骤抑制PI3K/ Akt/ mTOR信号转导通路联合抗肿瘤药物可以明显提高骨髓瘤细胞化疗效果.
