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自噬参与氢溴酸樟柳碱对缺氧状态下PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究氢溴酸樟柳碱对缺氧状态下肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rats pheochromocytoma cells,PC12)自噬相关因子的影响.探讨氢溴酸樟柳碱对缺氧损伤神经细胞模型的保护作用及机制.方法:运用氯化钴(CoC12)处理PC12细胞建立化学性缺氧模型,设空白组,模型组,阳性组(丁基苯酞),氢溴酸樟柳碱高、中、低浓度组(100,50,25 μmol·L-1).采用倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞相对存活率,单丹磺酰尸胺荧光染色(MDC)和透射电镜技术检测自噬小体的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测微管相关蛋白1轻链3(LC3),Beclin-1等蛋白的表达.结果:氢溴酸樟柳碱干预后细胞存活率显著提高,细胞形态恢复较好.MDC荧光染色和透射电镜下自噬小体的数量增多,LC3-Ⅱ及Beclin-1的表达显著提升.结论:自噬在缺氧状态下对细胞有保护作用,氢溴酸樟柳碱通过诱导低氧状态细胞自噬发挥了神经保护作用.
关键词： 氢溴酸樟柳碱 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 缺氧 自噬 神经保护 -
甲醛致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡作用
目的 研究甲醛诱导肾上腺嗜铬细胞损伤特征及机制.方法 将肾上腺嗜铬细胞瘤细胞与不同浓度甲醛(20,40,80,160 μmol/L)共培养,24 h以后用四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡;分光光度法检测乳酸脱氢酶漏出量;硝酸还原酶法检测细胞上清液一氧化氮含量;生化法检测总一氧化氮合酶活性和诱导型一氧化氮合酶活性;磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素/碘化丙啶双染法、流式细胞仪分析细胞死亡;免疫着色实验技术检测半胱氮酸蛋白酶-3前体表达.结果 20～160 μmol/L甲醛诱导细胞死亡,低剂量甲醛(<80 μmol/L)主要诱导凋亡,高剂量甲醛(>80 μmol/L)主要诱导细胞坏死;细胞乳酸脱氢酶漏出量具有甲醛浓度依赖性,从(374.04±15.64)U/L增加至(800.18±24.84)U/L,且一氧化氮含量逐渐升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).甲醛浓度依赖性诱导总一氧化氮合酶及型一氧化氮合酶活性表达增加,半胱氨酸蛋白酶-3前体蛋白酶原表达随甲醛浓度逐渐增强;氨基胍保护组细胞损伤明显减轻.结论 甲醛呈浓度依赖性诱导肾上腺嗜铬细胞瘤细胞死亡;机制与半胱氨酸蛋白酶激活有关;氨基胍对细胞损伤有保护作用.
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过氧化氢对PC12细胞PI3K、Akt表达的影响
目的 探讨不同浓度过氧化氢(H2O2)对PC12细胞PI3K、Akt mRNA及蛋白表达的影响,为氧化损伤致PC12细胞凋亡提供实验依据.方法 PC12细胞贴壁后,换无血清DMEM培养液继续培养24 h,实验分为对照组、不同浓度H2O2组(100、150、200 μmol·L-1).24h后,采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达变化.结果 与对照组相比,各浓度H2O2均可降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,且随着H2O2浓度增加,与对照组相比,PI3K、Akt mRNA表达逐渐降低(P ＜0.05);PI3K、Akt蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05);且150 μmol·L-1H2O2可显著降低PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达(P＜0.05).结论 H2O2可剂量依赖性的降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,从而诱导PC12细胞的凋亡.
关键词： 过氧化氢 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 磷脂酰肌醇3激酶 丝/苏氨酸蛋白激酶 -
消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤PC12细胞的保护作用
目的:观察消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注损伤肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的作用.方法:以PC12细胞缺氧缺糖再灌注损伤模拟脑缺血再灌注损伤,研究消栓肠溶胶囊在0.01～10.00mg/L浓度范围内对其的作用,采用噻唑蓝法(MTT法)检测PC12细胞的存活率;乳酸脱氢酶(LDH)法检测PC12细胞损伤程度;酶联免疫(ELISA)法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和凋亡相关因子P53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,BCL-2)、BCL-2关联X蛋白(bcl2-associated Xprotein,Bax)和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测p53mRNA、Bax mRNA和caspase-3 mRNA的表达;分光光度法检测超氧化歧化酶(SOD)和丙二醛(M DA)的水平,以及采用荧光酶标仪检测活性氧(ROS)的表达.结果:与模型组比较,消栓肠溶胶囊各剂量组干预后,缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞的存活率显著增加(P＜0.05),细胞外LDH比例显著减少(P＜0.05),MMP-9、P53、Bax、Caspase-3、MDA和ROS表达都显著减少(P＜0.05),而BCL-2表达和SOD活性都显著增加(P＜0.05).结论:消栓肠溶胶囊对缺氧缺糖再灌注诱导的PC12细胞损伤具有明显保护作用,能减少细胞凋亡相关因子表达,其机制可能与抑制MMP-9表达和减轻氧化应激损伤有关.
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高频电刺激对PC12细胞形态及代谢水平的影响
目的:研究细胞外高频电刺激(HFS)对PC12类交感神经细胞的形态及代谢水平的影响.方法:将HFS作用于传代的PC12类交感神经细胞株,高频电流参数为130 Hz,500μA,60μs;每天固定时间刺激3 h,持续3 d.分别用H-E染色、免疫组织化学、电子显微镜等方法检测经HFS后PC12类交感神经细胞在光镜、电镜下的形态变化及细胞代谢水平的变化.结果:相比对照组,HFS后PC12类神经细胞光镜下突起长度显著缩短,突起个数明显减少;酪氨酸羟化酶免疫组织化学结果显示HFS后PC12细胞胞质灰度降低,提示酪氨酸羟化酶代谢水平下降;电镜下可见胞质中的线粒体、分泌颗粒减少,突起和突触减少.结论:HFS对PC12类交感神经细胞有抑制作用,它抑制PC12类交感神经细胞突起的生长以及颗粒分泌的代谢水平.
关键词： 高频电刺激 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 形态 酪氨酸羟化酶 -
长链非编码RNA BC088414在神经细胞缺氧缺血损伤中的作用
目的：探讨长链非编码RNA BC088414在神经细胞缺氧缺血损伤中的作用。方法将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞分为常氧组、氧糖剥夺处理组（OGD组）、小分子RNA常氧组（siRNA组）及siRNA OGD组，n=3。以无葡萄糖无血清DMEM培养液于37℃、1%O2+99％N2/CO2条件下培养细胞6 h，建立缺氧缺血体外模型。采用实时定量PCR法检测BC088414、肾上腺素受体β2（Adrb2）和半胱氨酸蛋白酶6（Casp6） mRNA的表达；利用小分子干扰RNA（siRNA）抑制PC12细胞中BC088414的表达；采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果 OGD组细胞凋亡指数明显高于常氧组（P<0.01），抑制BC088414表达后，PC12细胞的凋亡指数明显低于OGD组（P<0.05）。经OGD处理后，PC12细胞中BC088414、Adrb2和Casp6 mRNA表达水平较常氧组均明显增加（P<0.05）；抑制BC088414表达，可导致PC12细胞中Adrb2和Casp6 mRNA表达水平较常氧组降低，且可抑制OGD诱导的Adrb2和Casp6 mRNA表达上调（P<0.05）。结论长链非编码RNA BC088414可能通过Adrb2和Casp6促进凋亡，加重缺氧缺血引起的神经细胞损伤。
关键词： 长链非编码RNA 氧糖剥夺 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 -
NGF-PBCA-NP的制备与性能评价及其对体外AD细胞模型的保护作用
目的 制备神经生长因子-聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(NGF-PBCA-NP)并评价其性能,检测其对Aβ1-40诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)增殖抑制和细胞凋亡的作用. 方法 采用乳化聚合法制备NGF-PBCA-NP,透射电镜观察形态,紫外分光光度法检测包封率和载药量.PC12细胞用10μg/mL的Aβ1-40处理,制备体外AD细胞模型后,用NGF (NGF对照组)和NGF-PBCA-NP(NGF-PBCA-NP组)分别作用于细胞,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 NGF-PBCA-NP呈圆球形,包封率为80.87％,载药量为19.88％.与NGF对照组相比,NGF-PBCA-NP组细胞增殖抑制程度减轻,细胞凋亡率下降,差异有统计学意义(P＜0.05).其中50 μg/L NGF-PBCA-NP处理后细胞增殖比达峰值. 结论 乳化聚合法制备的NGF-PBCA-NP,形态一致,包封率和载药量较高,性能稳定,在体外具有一定的神经细胞保护和修复作用.
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大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的神经型烟碱受体电流
本实验采用膜片箝技术观察了神经生长因子分化5～10 d的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞上烟碱受体离子通道电流.在全细胞膜片箝条件下,当箝制电压为-80mV时,灌流乙酰胆碱(ACh, 30 μmol/L)诱发一内向电流,快速始发并衰减.此乙酰胆碱诱发电流(IAch)随膜去极化和超级化而分别减小和增大,且被筒箭毒所阻断,可见此电流是由烟碱受体引起的.全细胞IACh呈较强的内向整流.其衰减相可被一双指数函数拟合,时间常数(τ)分别在秒和分级.τf对浓度的依赖性较τs强.PC12细胞表面含有与交感神经元相似的烟碱受体,因此提供了一个交感神经元样的同源细胞株.它是研究神经烟碱受体调节的一个很好的模型系统.
关键词： 烟碱受体 肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 膜片箝技术 大鼠
