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白藜芦醇靶向mTORC2/Rictor抑制HUVECs的增殖迁移及管腔形成
目的 探讨白藜芦醇对腺病毒介导的Rictor基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖、迁移及管腔形成的影响.方法 将PCR扩增得到的目的基因Rictor定向克隆入GV314载体获得重组质粒,经AdMax包装系统与辅助包装质粒在HEK 293T细胞中重组构建Rictor过表达腺病毒载体(Ad-Rictor),不含目的基因的Ad-Null为阴性对照组.分离培养HUVECs后分别用Ad-Rictor及Ad-Null重组腺病毒感染细胞,另设空白对照组及白藜芦醇干预组Ad-Rictor+Res.感染后荧光显微镜及 Western blot 检测重组蛋白表达;CCK8、划痕实验和血管形成实验观察HUVECs增殖、迁移及血管形成能力.结果 重组腺病毒Ad-Rictor及Ad-Null构建成功.与对照组相比,Ad-Rictor感染HUVECs显著上调基因Rictor的表达,提高了HUVECs的增殖活力,迁移和体外管腔形成能力(P<0.05);白藜芦醇干预显著抑制了Rictor过表达情况下HUVECs的增殖、迁移和体外管腔形成(P<0.05).结论 白藜芦醇可以靶向mTORC2/Rictor抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成.
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mTORC2功能及其在血液肿瘤中作用的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mammalian target of rapamycin complex,mTORC)是细胞生长、存活、代谢的重要调控中心,它对维持生命有机体的正常生理活动和内稳态的平衡有着重要作用.mTORC根据其蛋白组份可分为mTORC1和mTORC2.mTORC2的主要组成蛋白有mTOR、Rictor、mLST8、Deptor、mSinl、Protor和Hsp70.mTORC2通过作用于Akt,PKCα和SGK1等来调控多项生命活动,如胚胎发育,细胞骨架重建,细胞迁移,蛋白质翻译和修饰等.mTOR信号通路异常已被证实与肿瘤相关,同时发现多种肿瘤发生与mTORC2及其异常调节信号通路相关.因此,对mTORC2组成、功能以及参与的信号通路的研究,可能为进一步研制其相关的靶向抑制药物乃至肿瘤治疗提供新思路.本综述将介绍mTORC2的组成结构、功能、参与的信号通路,及其在血液肿瘤中作用的研究进展.
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联合抑制mTORC2与热休克蛋白90对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨mTORC2与HSP90共同受抑对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞在培养过程中分别加入雷帕霉素20 nmol/L、17-AAG 600 nmol/L、雷帕霉素20 nmol/L+ 17-AAG 600 nmol/L、PBS溶液进行干预,比较各组的细胞抑制率、形态变化、凋亡率以及caspase-3和AKT蛋白的表达.结果:联合使用雷帕霉素和17-AAG对多发性骨髓瘤细胞生长抑制作用明显的大于单一使用相同浓度相应药物;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组细胞的凋亡率明显的大于PBS对照组,并且联合用药干预细胞的凋亡率明显大于单一使用相同浓度相应药物的干预细胞的凋亡率;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组U266细胞的caspase-3蛋白表达明显的大于PBS对照组,并且联合用药干预细胞中caspase-3蛋白表达明显大于单一使用相同浓度相应药物;雷帕霉素、17-AAG及两药联合干预组U266细胞AKT蛋白表达明显小于对照组,联合用药干预组细胞AKT蛋白表达明显小于单一使用相同浓度相应药物,其差异均具有显著性(P＜0.05).结论:联合抑制mTORC2与HSP90能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖并且诱导细胞的凋亡.
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PP242对Ph+急性淋巴细胞白血病细胞增殖的抑制作用及对AKT1-Ser473磷酸化的影响
目的 观察ATP竞争性哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)抑制剂PP242对体外培养的Ph染色体阳性(Ph+)急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖和AKT1473位丝氨酸磷酸化的影响.方法 对Ph+ ALL细胞株SUP-B15进行培养及传代,Cell Counting Kit-8比色法检测PP242(100 nM,250 nM,500 nM,750 nM,1 000 nM)处理细胞株SUP-B15后12 h、24 h、48 h细胞生长情况；应用免疫印迹法及实时定量RT-PCR检测使用PP242(100 nM,250nM,500 nM)培养细胞48 h后AKT1及磷酸化水平情况.结果 100 nM、250 nM、500 nM、750 nM、1 000 nM PP242对Ph+ ALL细胞株SUP-B15作用12 h、24h及48 h后,其抑制率:12 h组:10.17％,13.25％,20.13％,22.54％,27.61％；24h组:11.33％,20.54％,36.18％,41.66％,47.27％;48 h组:23.13％,39.24％,55.72％,61.88％,66.93％,与对照组相比差异均有统计学意义(P ＜0.05)；100 nM、250 nM、500 nM PP242处理SUP-B15细胞48 h后,免疫印迹法检测结果显示AKT1蛋白的表达水平无明显变化,而473位丝氨酸(Ser473)磷酸化水平逐渐降低；实时定量RT-PCR检测结果显示,AKT1的mRNA表达无明显变化,绝对定量mRNA结果分别为:0.673±0.124,0.751±0.133,0.689±0.154,与正常对照组(0.679±0.167)相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ATP竞争性mTORC2抑制剂PP242对体外培养的Ph+ ALL细胞株SUP-B15细胞的增殖存在抑制作用,其作用强度呈浓度和时间依赖性；SUP-B15细胞中存在AKT1的表达；PP242在抑制Ph+ ALL细胞株SUP-B15细胞的增殖过程中可下调AKT1 Ser473磷酸化水平.
关键词： Ph+急性淋巴细胞白血病 mTORC2 PP242 AKT1 -
mTOR对iNKT细胞发育和分化的影响
iNKT细胞是近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群.其发育分化受多种因素的影响,新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用.mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mTORC2在iNKT细胞由阶段1到2转变过程中起重要作用.促进mTORC1与mTORC2活化的主要有RasGRP1、PDK1和RheB.旨在阐明mTOR对iNKT细胞发育分化的影响.
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第二代mTOR抑制剂的抗肿瘤研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是PI3K/Akt/mTOR等多种信号通路的下游分子,在细胞增殖、分化、转移和存活中发挥重要作用,已成为癌症治疗的一个重要靶标.传统的mTOR抑制剂主要是雷帕霉素及其衍生物,能特异性抑制mTORC1,但在部分癌症临床治疗中未达到预期疗效,且易产生耐药性.第二代mTOR抑制剂即双重或多重mTOR抑制剂能与mTOR的催化位点竞争ATP,高度选择性地抑制mTORC1和mTORC2,比单靶点mTOR抑制剂具有更大的治疗优势.此外,某些天然来源产物也具有对mTOR的抑制作用,且毒性、副作用更小.综述近几年有关mTOR及其抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展.
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mTORC1和mTORC2调控前列腺癌雄激素受体和Akt磷酸化
目的 观察mTORC1和mTORC2在前列腺癌C4-2细胞中的作用.方法 噻唑蓝(MTY)比色法检测转染siRNA raptor和siRNA rictor后C4-2细胞增殖改变;流式细胞术(FCM)检测敲除mTORC1(raptor)和mTORC2(rictor)后C4-2细胞凋亡;Western blot检测siRNA raptor和siRNArictor后C4-2细胞雄激素受体(AR)和Akt磷酸化表达.结果 MTT显示敲除raptor生长抑制率无显著变化[(25.37±2.63)%比(27.49±2.96)%,P＞0.05],而敲除rictor组[(25.37±2.63)%比(62.86±5.61)%,P＜0.01]显著地抑制了细胞的生长;FCM显示敲除raptor显著增加了细胞凋亡[(11.76±1.45)%比(38.23±3.71)%,P＜0.01],而敲除rictor对C4-2细胞凋亡无显著性变化[(11.76±1.45)%比(14.25 ±1.68)%,P＞0.05];Western blot检测显示敲除mTORC1显著增加C4-2细胞AR[(0.21±0.04)%比(0.73 ±0.12)%,P＜0.01]和Akt磷酸化表达[(0.23±0.06)%比(0.68±0.11)%,P＜0.01],而敲除mTORC2显著地抑制了C4-2细胞AR[(0.21 ±0.04)%比(0.07 ±0.02)%,P＜0.01]和Akt磷酸化表达[(0.23±0.06)%比(0.06±0.03)%,P＜0.01].结论 mTORC2对前列腺癌C4-2细胞的存活是必须的,mTORC2是治疗前列腺癌有希望的靶目标.
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Akt信号在苯丙胺致大鼠黑质损伤中的变化
目的 探讨Akt信号在苯丙胺致大鼠黑质损伤中的变化.方法 给大鼠腹腔注射苯丙胺(2.5 mg·kg-1·d-1),分为苯丙胺1h、1d、7d和14 d组.用透射电镜观察大鼠黑质超微结构的变化,用Western blot检测Akt和mTORC2蛋白在黑质的变化.结果 苯丙胺14 d组一些黑质神经元结构模糊,核固缩.许多髓鞘变形,髓鞘板层不清晰.苯丙胺1 h P-Akt(Thr308)表达没有显著性变化.苯丙胺1d组、7d组和14 d组的P-Akt (Thr308)表达明显减少.苯丙胺各组P-rictor(S1219)的表达均无显著性差异.结论 苯丙胺对大鼠黑质神经元的损伤可能与抑制Akt信号有关.
