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mTORC2功能及其在血液肿瘤中作用的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mammalian target of rapamycin complex,mTORC)是细胞生长、存活、代谢的重要调控中心,它对维持生命有机体的正常生理活动和内稳态的平衡有着重要作用.mTORC根据其蛋白组份可分为mTORC1和mTORC2.mTORC2的主要组成蛋白有mTOR、Rictor、mLST8、Deptor、mSinl、Protor和Hsp70.mTORC2通过作用于Akt,PKCα和SGK1等来调控多项生命活动,如胚胎发育,细胞骨架重建,细胞迁移,蛋白质翻译和修饰等.mTOR信号通路异常已被证实与肿瘤相关,同时发现多种肿瘤发生与mTORC2及其异常调节信号通路相关.因此,对mTORC2组成、功能以及参与的信号通路的研究,可能为进一步研制其相关的靶向抑制药物乃至肿瘤治疗提供新思路.本综述将介绍mTORC2的组成结构、功能、参与的信号通路,及其在血液肿瘤中作用的研究进展.
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胰岛素促进胰腺癌细胞SW1990吸收钠离子机制的研究
目的：为解释新发糖尿病合并胰腺癌预后差的现象，本研究拟探讨胰岛素影响胰腺癌细胞钠代谢的分子机制。方法在高糖DMEM中培养胰腺癌细胞SW1990，用不同浓度胰岛素刺激细胞，在不同时间检测培养上清中Na+浓度，分析Na+随胰岛素浓度和时间变化的规律。同时检测胰岛素对血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）的影响，并分析其中的信号通路。结果胰岛素刺激SW1990细胞后，培养上清中Na+浓度下降（P<0.05），SGK1蛋白表达量增加（P<0.05），且Na+浓度的下降幅度与SGK1蛋白水平相关（r=0.715，P<0.01）；胰岛素处理后乙酰化修饰关键基因CREBBP和EP300表达明显上调（P<0.05）。结论胰岛素可促进胰腺癌细胞吸收钠离子，与SGK1基因的表达水平相关，其中乙酰化修饰可能发挥一定作用。
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人SGK1超表达载体的构建及鉴定
目的:构建人血清及糖皮质激素诱导型蛋白激酶(SGK1)超表达载体质粒,为SGK1的体外研究提供有效的工具.方法:细胞中RNA经反转录合成cDNA,PCR扩增获取人全长SGK及构建于哺乳动物的表达载体.基因激活型(SD)及灭活型(KN)人SGK1经点突变获取.克隆基因的正确性通过酶切鉴定及DNA测序证实.用磷酸钙沉淀法转染人胚肾293(HEK293)细胞,测定其转染率.结果:构建的人SGK1质粒能在人胚肾细胞中超表达.结论:人SGK1超表达载体的成功构建为糖尿病肾病发病机制的研究提供了新的工具.
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SGK1调节T细胞亚群失衡在儿童哮喘中的作用
目的：探讨SGK1在儿童哮喘T细胞中的表达及对T细胞分化的影响,揭示SGK1调节T细胞分化在儿童哮喘中的作用。方法收集在西安市儿童医院收治的儿童支气管哮喘患儿28例,依据临床诊断进行分级。通过ELISA分别检测IL-4、IL-13和IL-17A在哮喘患儿血清中的表达水平。从哮喘患儿外周血( peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中,磁珠分选CD4+T细胞,通过Real-time PCR检测SGK1的表达。从PBMC中分选获得Na?ve T细胞,体外诱导分化,通过Real-time PCR检测SGK1在Th1、Th2和Th17细胞中的表达。以siRNA干扰SGK1,FCM分别检测Th2和Th17细胞分泌IL-4和IL-17A的能力。构建哮喘小鼠模型,以shRNA-SGK1 Na?ve T细胞静脉回输,观察shRNA-SGK1对哮喘气道炎症的影响。结果与健康儿童相比,哮喘患儿血清中IL-4、IL-13和IL-17A的水平明显升高,且随病程进展,血清中这三种因子的水平越高。哮喘患儿中,SGK1在外周血CD4+T细胞中的表达显著升高,且SGK1的表达与IL-13和IL-17A呈明显正相关。在体外诱导分化的Th2和Th17细胞中,SGK1的表达明显升高,而在Th1细胞中表达变化不明显。抑制SGK1的表达,Th2和Th17相关的细胞因子IL-4和IL-17A都明显下降。在体内,shRNA-SGK1抑制了哮喘小鼠IL-13和IL-17A的血清水平,气道炎症明显降低。结论高表达的SGK1通过调节T细胞亚群的分化促进了儿童哮喘的进展。
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曲尼司特对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和SGK1表达的影响
目的 探讨曲尼司特对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能的机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机均分为4组:正常对照组、模型组、低剂量及高剂量曲尼司特治疗组.后3组均一次性给予链脲佐菌素(STZ) 30 mg/kg尾静脉注射建立糖尿病大鼠模型.正常对照组给予等量柠檬酸缓冲液尾静脉注射；模型组不再给药；低、高剂量曲尼司特组于造模后1 w分别给予曲尼司特100 mg·kg-1·d-1和400 mg·kg-1·d-1.造模后8 w处死大鼠,免疫组化检测肾间质组织中的TGF-β1及SGK1表达；Masson染色观察肾间质绿染面积.结果 与正常大鼠相比,糖尿病模型大鼠的血糖、尿蛋白定量、肾重/体重、肌酐清除率明显升高(P＜0.05);经过曲尼司特处理后,以上指标均有下降,尿蛋白定量、肾重/体重、肌酐清除率下降(P＜0.05),且高剂量组与低搅量组相比,尿蛋白定量下降(P＜0.05).Masson染色可见模型组肾间质内大量胶原纤维增生,肾小球局灶性节段性硬化,而曲尼司特组上述改变均有减轻.免疫组化示TGF-β1及SGK1表达趋势一致,正常对照组均低于其他组(P＜0.01),曲尼司特组低于模型组,高剂量曲尼斯特组低于低剂量组(P＜0.05).结论 曲尼司特能改善糖尿病大鼠的生化指标,下调TGF-β1和SGK1表达,发挥抗纤维化的作用.
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百事乐胶囊对抑郁模型大鼠海马GR/p-GR/SGK1表达的影响
目的:探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠学习记忆的保护作用.方法:将SD大鼠随机分为6组,即空白对照组、抑郁模型组、氟西汀组及百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方法建立抑郁模型,造模同时灌胃给药,连续21 d Morris水迷宫测定对大鼠行为学的影响,放射免疫法观察大鼠血浆CORT含量的变化,Western-blotting观察大鼠海马GR,p-GR,SGK1蛋白表达的变化.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期(EL)、目标象限潜伏时间显著增长(P＜0.01);穿越目标象限的次数显著降低(P＜0.05);CORT含量显著增高(P＜0.01),海马GR、p-GR的表达下调(P＜0.01),SGK1的表达增加(P＜0.01).与模型组比较,百事乐胶囊高剂量能缩短模型大鼠的EL(P＜0.05),并能缩短目标象限潜伏时间(P＜0.05),增加目标象限的穿越次数(P＜0.05);同时高、中剂量组大鼠血浆CORT的含量显著下降(P＜0.05或P＜0.01);高、中剂量组海马GR、p-GR的表达显著增加(P＜0.05或P＜0.01),高剂量组SGK1的表达显著降低(P＜0.05).结论:百事乐胶囊可能通过GR/p-GR/SGK1信号级联增加应激抑郁模型大鼠海马学习记忆的功能,进而实现抗抑郁的作用.
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瑞舒伐他汀通过激活SGK1上调ALI小鼠ENaC表达的实验研究
目的 探讨在急性肺损伤(ALI)状态下瑞舒伐他汀对肺组织钠离子通道(ENaC)的调节作用和相关机制.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组(Control组)、干预组(LPS+ ROS组)和模型组(LPS组),每组10只.在给予大肠埃稀杆菌内毒素(LPS)干预72小时后,采用HE染色对小鼠肺组织病理改变进行观察和肺组织损伤评分;使用湿干比(W/D比值)对肺水肿严重程度进行分析;使用RT-PCR和western blot对肺组织ENaC的α亚基(α-ENaC)mRNA和蛋白的表达进行分析;同时使用western blot对SGK1的活化水平(phospho-SGK1/totalSGK1)进行观察.结果 在给予雄性C57BL/6小鼠LPS干预72小时后,肺组织出现显著的病理学改变,肺损伤评分明显增加,肺水肿指标W/D比值显著升高,α-ENaC mRNA和蛋白的表达水平明显降低,SGK1的活化水平亦明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).同时LPS+ ROS组小鼠肺组织病理改变、肺损伤评分和W/D比值较LPS组小鼠明显减轻,而α-ENaC mRNA和蛋白的表达及SGK1的活化水平较LPS组小鼠明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 实验表明,在LPS诱导的小鼠ALI状态下,瑞舒伐他汀可以通过增加肺组织ENaC的表达有效地减轻肺水肿严重程度,并发现该机制与促进SGK1的活化密切相关.这为他汀类药物应用于急性呼吸窘迫综合症(ARDS)的临床治疗奠定了基础.
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胰岛素通过激活SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下钠离子通道的调节作用
目的 探讨胰岛素通过SGK1对LPS诱导的急性肺损伤状态下的钠离子通道的调节作用.方法 30只雄性Wistar大鼠随机平均分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+ Insulin组)和模型组(LPS组)每组10只.记录5个时间点(0、0.5、1、3、6 h)大鼠的血糖水平,并使用胰岛素使LPS+ Insulin组大鼠血糖控制在1.5到4.5mmol/L.通过HE染色观察肺组织病理学改变；使用湿/干比(W/D)分析肺水肿程度；使用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学对α-ENaC的表达进行测量;SGK1和磷酸-SGK1(phospho-SGK1)蛋白表达使用Western blot进行定量分析.结果 大鼠注射LPS后血糖明显上升并于3h达到大值.LPS干预6h后大鼠肺损伤评分和W/D比值明显增加,α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平明显下降,差异有显著统计学意义.同时发现,LPS+ Insulin组大鼠肺损伤评分和W/D比值较LPS组大鼠稍低,而α-ENaC表达量和磷酸化-SGK1水平较之升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胰岛素可以有效减轻LPS诱导的大鼠ARDS导致的肺水肿,其机制可能与促进SGK1的活化后上调了ENaC的表达相关.该结果为应用胰岛素治疗肺水肿奠定了理论基础.
