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补肾填精法对阿尔茨海默病小鼠PI3 K/Akt通路激活及氧化应激的影响
目的 探讨补肾填精法对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织氧化应激及学习记忆能力的影响.方法 雄性APPsw/PS1△E9转基因小鼠,灌服地黄饮子水煎液150天.避暗实验检测小鼠学习记忆能力;检测小鼠脑组织中Akt、GSK-3β的磷酸化水平,Bax、Bcl-2蛋白表达,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 地黄饮子可显著延长AD小鼠进入暗室的潜伏期并减少错误次数,提高SOD、GSH-PX活性,降低MDA含量,促进Akt、GSK-3β激活,降低Bax/Bcl-2比值(P＜0.01或P＜0.05).结论 地黄饮子可通过激活PI3K/Akt通路,抑制AD小鼠脑内氧化应激和细胞凋亡,保护线粒体,改善学习记忆.
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深刺"环跳"在大鼠坐骨神经损伤修复中的抗凋亡机制
目的:从细胞凋亡角度探讨深刺"环跳"对坐骨神经损伤修复的作用机制.方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、深刺组、浅刺组,每组12只.采用硅胶管挤压法复制大鼠坐骨神经慢性损伤模型.两个针刺组在高频小动物超声仪引导下针刺"环跳"穴,深刺组在高频超声引导下观察针尖触及神经干引发的神经冲动,浅刺组针尖刺入肌肉层下约3～5 mm,未触及神经干,不引发神经冲动,两组均连接电针仪治疗,每日1次,连续治疗14 d.检测大鼠坐骨神经功能指数(SFI)和运动神经传导速度(MNCV),苏木素伊红(HE)染色法观察坐骨神经病理形态的改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠L 4—L 5背根神经节中磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的表达情况.结果:模型组SFI、MNCV均低于空白组(P<0.01,P<0.05),坐骨神经损伤后神经细胞凋亡数以及L4—L5背根神经节中PI3K、AKT的表达高于空白组(P<0.05).与模型组比较,深刺组及浅刺组SFI、MNCV明显升高(P<0.01,P<0.05),坐骨神经损伤后神经细胞凋亡数明显降低(P<0.05),L 4—L 5背根神经节中PI 3 K、AKT的表达明显升高(P<0.05);且深刺组各项指标的变化较浅刺组更显著(P<0.01,P<0.05).结论:深刺"环跳"穴可以通过激活PI 3 K-AKT信号通路,抑制大鼠坐骨神经损伤后的神经细胞凋亡,促进神经损伤修复.
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清肺化瘀解毒方对A549靶向药物耐药细胞株PI3K-AKT信号通路的影响
目的:通过观察吉非替尼获得性耐药A549细胞株PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨清肺化瘀解毒方逆转肺癌靶向药物耐药的作用机制.方法:采用大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法诱导建立人肺腺癌A549细胞株吉非替尼获得性耐药系A549/R,细胞分为空白血清组、清肺化瘀解毒方含药血清组、吉非替尼组、清肺化瘀解毒方含药血清联合吉非替尼组,药物干预48h后,SRB法检测细胞耐药性,流式细胞术检测细胞周期变化,Western Blot、Real-time PCR技术检测PI3K、AKT蛋白及mRNA的表达变化.结果:清肺化瘀解毒方、清肺化瘀解毒方联合吉非替尼能明显抑制A549/R细胞增殖,降低其耐药倍数;清肺化瘀解毒方联合吉非替尼组Go/G1期细胞比例显著性高于吉非替尼组,S期细胞比例显著性低于吉非替尼组(P＜0.05);与空白血清组比较,吉非替尼组PI3K、AKT表达变化不明显,而清肺化瘀解毒方及清肺化瘀解毒方联合吉非替尼组PI3K、AKT蛋白及mRNA表达水平显著性下调(P＜0.05).结论:清肺化瘀解毒方逆转肺癌吉非替尼获得性耐药的机制可能与下调PI3K、AKT蛋白表达进而调节PI3K-AKT信号通路有关.
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基于PI3K-Akt途径探讨醒脑益智方对2型糖尿病认知功能障碍小鼠性激素及Erα、Erβ的影响
目的:探讨醒脑益智方基于PI3K-Akt对2型糖尿病(T2DM)痴呆小鼠性激素及Erα、Erβ的影响.方法:以C57BL/6作为空白组,检测随机血糖≥16.7mmol/L的KK-ay小鼠随机分为模型组、吡拉西坦组、醒脑益智组.给药前后各行1次Morris水迷宫实验,记录潜伏期和目标象限探索时间.小鼠麻醉后迅速取血、大脑海马制备样本,酶联免疫法检测性激素水平,采用实时定量PCR法检测Erα、Erβ和PI3K、Akt mRNA水平.结果:与模型组比较,醒脑益智方能改善CID,下调FSH、T、LH,上调P、E2、PRL水平及Erα、ErβmRNA及PI3K、 Akt mRNA在海马中的表达(P<0.01,P<0.05).结论:醒脑益智方能明显改善CID,与性激素及受体水平,激活 PI3K-Akt通路有关.
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运动改善心血管胰岛素敏感性及其信号转导机制
胰岛素抵抗是各种心血管疾病的共同发病机制.运动可改善心血管胰岛素敏感性.胰岛素信号转导通路在运动改善心血管胰岛素敏感性中发挥重要作用.本文综述胰岛素信号通路在运动改善心血管胰岛素抵抗中的调节机制.
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mTORC2功能及其在血液肿瘤中作用的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mammalian target of rapamycin complex,mTORC)是细胞生长、存活、代谢的重要调控中心,它对维持生命有机体的正常生理活动和内稳态的平衡有着重要作用.mTORC根据其蛋白组份可分为mTORC1和mTORC2.mTORC2的主要组成蛋白有mTOR、Rictor、mLST8、Deptor、mSinl、Protor和Hsp70.mTORC2通过作用于Akt,PKCα和SGK1等来调控多项生命活动,如胚胎发育,细胞骨架重建,细胞迁移,蛋白质翻译和修饰等.mTOR信号通路异常已被证实与肿瘤相关,同时发现多种肿瘤发生与mTORC2及其异常调节信号通路相关.因此,对mTORC2组成、功能以及参与的信号通路的研究,可能为进一步研制其相关的靶向抑制药物乃至肿瘤治疗提供新思路.本综述将介绍mTORC2的组成结构、功能、参与的信号通路,及其在血液肿瘤中作用的研究进展.
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PI3K-Akt信号通路在胰岛素生长因子-1诱导平滑肌细胞中的作用
目的 比较胰岛素生长因子-1(IGF-1)对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC)和脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖的影响并探讨其机制.方法 采用人源HUVSMC和HUASMC进行研究,噻唑蓝(MTT)法检测IGF-1对两种细胞增殖的影响,并通过Western blot技术检测IGF-1对两种细胞中PI3K-Akt信号通路的影响.结果 不同浓度的IGF-1对HUVSMC和HUASMC的增殖都有明显的促进作用,但对HUVSMC的促增殖作用明显高于HUASMC.进一步检测PI3K-Akt信号通路,IGF-1可激活PI3K-Akt信号通路,并且IGF-1对HUVSMC的激活明显强于HUASMC.wortmannin(渥曼青霉素)明显抑制IGF-1对细胞增殖的促进作用.结论 IGF-1可明显促进平滑肌细胞增殖,并且在HUVSMC更为明显;IGF-1主要通过激活PI3K-Akt信号通路来促进平滑肌细胞的增殖.冠状动脉搭桥术(CABG)后静脉移植物比动脉移植物更容易发生内膜增生的原因可能就在于此.
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胰岛素-PI3K/Akt通路在高游离脂肪酸所致的胰岛β细胞分泌功能紊乱中的作用
目的 探讨胰岛素-PI3K/Akt通路在高游离脂肪酸(FFA)所致的β细胞功能紊乱中的作用.方法 INS-1细胞分为对照组(NC组)、棕榈酸组(P组)及棕榈酸+NAC组(P+NAC组),分别用0.2 mmol/L棕榈酸和(或)0.2 mg/ml NAC进行干预,48 h后分别检测以下指标:(1)行胰岛素释放试验,检测INS-1细胞胰岛素分泌功能.(2)测定细胞内硝基酪氨酸含量:评价氧化应激水平.(3)Western blot检测胰岛素信号通路分子Akt磷酸化水平:评价胰岛素信号通路的功能状态.结果 (1)棕榈酸及NAC对INS-1细胞胰岛素分泌功能的影响:P组胰岛素释放指数(ISI)明显降低,P+NAC组ISI较P组增高(NC vs.P:2.12±0.17 vs.0.84±0.12;P<0.05;P vs.P+NAC:0.84±0.12 vs.1.16±0.11,P<0.05).(2)棕榈酸及NAC对INS-1细胞胰岛素合成的影响:棕榈酸降低INS-1细胞胰岛素mRNA及PDX-1 mRNA表达(P<0.05),P+NAC组与P组无统计学差异(P>0.05).(3)棕榈酸及NAC对INS-1细胞氧化应激水平的影响:棕榈酸干预增加细胞内硝基酪氨酸水平,P组与NC组比较,有统计学差异(P<0.05),NAC干预组细胞内硝基酪氨酸水平显著降低,P+NAC组与P组比较,有统计学差异(P<0.05).(4)棕榈酸及NAC干预对INS-1细胞Akt磷酸化的影响:棕榈酸组较对照组Akt磷酸化表达水平明显降低(P<0.05);而加入0.2 mg/ml NAC干预后,Akt磷酸化水平较单纯棕榈酸组升高(P<0.05).结论 FFA可以引发β细胞胰岛素分泌功能障碍,机制可能与FFA诱导的β细胞氧化应激增加,进而导致胰岛素介导的PI3K/AKT通路受阻有关.
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罗格列酮和二甲双胍治疗对胰岛素抵抗KKAy糖尿病小鼠肝及横纹肌组织PTEN蛋白表达的影响
目的 观察罗格列酮和二甲双胍治疗后胰岛素抵抗KKAy糖尿病小鼠肝及横纹肌组织PTEN蛋白表达的变化.方法 KKAy小鼠制备糖尿病模型后随机分为未治疗组、罗格列酮治疗组及二甲双胍治疗组.C57BL小鼠普通饲料喂养,为对照组.4周后处死小鼠,Western blot检测肝及横纹肌PTEN蛋白、胰岛素刺激后磷酸化473Akt的表达并进行定量分析.结果 罗格列酮及二甲双胍处理后KKAy糖尿病小鼠肝及横纹肌组织磷酸Akt升高倍数与KKAy糖尿病小鼠相比均无明显变化(P>0.05),罗格列酮和二甲双胍处理后肝及骨骼肌PTEN蛋白表达与糖尿病未治疗组相比差异没有统计学意义(P>0.05).结论 罗格列酮和二甲双胍不会影响PI3k-Akt通路活性及PTEN蛋白的表达,两者改善血糖和胰岛素抵抗可能与胰岛素敏感组织PTEN蛋白的表达无关.
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磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt信号通路与脑缺血再灌注损伤
缺血性脑卒中具有发病率、复发率、致残率及病死率高的特点.脑缺血再灌注损伤的防治一直是神经病学领域的重点,有关其相关机制的研究是当今亟待解决的问题,而缺血半暗带的神经细胞凋亡更是研究的热点.脑缺血再灌注后既启动了凋亡信号通路,也激活了抗凋亡信号通路,两者的动态平衡决定了细胞损伤的终转归.近来大量研究表明,磷脂酰肌醇3-激酶( phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt(简称PI3K-Akt)信号通路在一系列上游或旁路信号分子的影响下,作用于下游的信号分子,在脑缺血再灌注损伤的细胞凋亡过程中发挥着重要的作用.
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PI3K[MS1]/Akt信号通路与消化道肿瘤的研究进展
脂类激酶PI3K和它的下游靶点Akt,即蛋白激酶B,在各种酪氨酸激酶受体诱导的致癌信号通路中发挥了重要的作用.PI3K/Akt信号通路的成分在人类大多数恶性肿瘤中都发生了改变,尤其在消化道肿瘤的增殖、存活和抵抗凋亡、血管发生以及细胞运动中发挥了重要作用.因此,通过对PI3K通路的研究有望寻求肿瘤药物治疗的新靶点.
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糖代谢在月经病寒证证候研究中的意义
寒证为八纲之一,而月经病寒证是临床较为多见的病证之一,其主要病因为感受寒邪.目前对月经病寒证发生机制的研究多集中于盆腔微循环、能量代谢、免疫功能等系统,糖代谢是能量代谢的核心组成部分,已有研究证实,寒冷刺激下会引起糖代谢的异常,而胰岛素的主要信号通路PI3K-Akt通路参与了糖代谢的病理生理机制.本文通过总结月经病寒证的生物学机制,分析糖代谢及PI3K-Akt通路在其中的作用,希望对今后的研究提供新思路.
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舒芬太尼后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其与PI3K-Akt通路的关系
目的：研究舒芬太尼后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其与磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）通路的关系。方法：健康雄性SD大鼠24只，体重180~200 g，采用随机数字表法将其随机分为四组（n=6）：非糖尿病假手术组（NDM-S组）、非糖尿病缺血再灌注组（NDM-I/R组）、非糖尿病舒芬太尼后处理组（NDM-SP组）、非糖尿病舒芬太尼后处理+渥曼青霉素（PI3K抑制剂）组（NDM-SP+W组）。另取健康雄性SD大鼠，采用高糖高脂饮食喂养6周诱导胰岛素抵抗+腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg的方法制备2型糖尿病模型（血糖≥16.7 mmol/L），选取造模成功的大鼠24只，继续高糖高脂喂养2周后采取随机数字表法，将其分为四组（n=6）：糖尿病假手术组（DM-S组）、糖尿病缺血再灌注组（DM-I/R组）、糖尿病舒芬太尼后处理组（DM-SP组）、糖尿病舒芬太尼后处理+渥曼青霉素组（DM-SP+W组）。采用左冠状动脉前降支下穿线或结扎，阻断30 min，再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注的模型。其中假手术组只穿线不结扎；缺血再灌注组穿线后稳定5 min，阻断30 min，再灌注120 min；舒芬太尼后处理组于再灌注前5 min经舌下静脉注射舒芬太尼1.0μg/kg；舒芬太尼后处理+渥曼青霉素组于再灌注前5 min经舌下静脉注射渥曼青霉素15μg/kg和舒芬太尼1.0μg/kg。再灌注120 min后取血样，测定肌钙蛋白cTnI的浓度；处死后收集心肌组织，采用TUNEL法测定心肌细胞的凋亡指数（AI），采用Western blot法检测心肌组织Akt、p-Akt的表达水平。结果：非糖尿病和糖尿病大鼠I/R组、SP组、SP+W组与S组相比较，血浆cTnI的浓度升高、AI增加、p-Akt的表达增加（P<0.05）。舒芬太尼后处理可明显减轻NDM组的心肌缺血再灌注损伤，使升高的cTnI浓度降低、AI降低、p-Akt的表达增加（P<0.05），而对DM组心肌缺血再灌注损伤的各项指标均无明显的影响。NDM-SP组的血浆cTnI的浓度、AI明显低于DM-SP组而p-Akt的表达高于DM-SP组。结论：舒芬太尼后处理对2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤没有保护作用，PI3K-Akt通路不参与该过程。
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益气养阴活血中药减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤作用研究
目的 研究益气养阴活血中药(参麦注射液与丹参注射液联合应用,YYH)通过激活PI3K-Akt与ERKl/2信号通路,抑制mPTP开放,减轻心肌缺血再灌注(I/R)损伤,发挥心肌保护作用.方法 应用大鼠离体心脏I/R损伤模型,灌流2.5、5、10 μL/mL YYH及PI3K特异性抑制剂LY294002,检测心脏功能指标、灌流液肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、TTC染色观察心肌梗死面积、透射电镜观察心肌超微结构、Western blotting检测相关蛋白表达.YYH预处理离体心脏后进行I/R,分离心肌线粒体,以mPTP特异性抑制剂环孢素A(CsA)作对照,检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放情况;药物与线粒体孵育后检测mPTP开放.结果 YYH 10 μL/mL预处理能改善离体心脏功能指标,减少心肌梗死面积,减轻心肌组织超微结构损伤,5、10 μL/mL降低心脏灌流液中CK、LDH活性;其改善心功能指标、减少心肌梗死面积的作用被LY294002部分或完全抵消;YYH处理后心肌组织p-Akt、p-ERKl/2、p-GSK-3β蛋白表达上调,LY294002阻断了YYH诱导的p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达上调;在外源性钙刺激下,YYH预处理组mPTP比模型组更容易开放;YYH、参麦注射液能够直接抑制mPTP开放.结论 YYH预处理通过激活PI3K-Akt与ERK1/2信号通路,抑制mPTP开放,减轻心肌I/R损伤,发挥心肌保护作用;其抑制mPTP开放的作用机制与CsA不完全相同.
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缺血后处理心肌保护作用的研究进展
1986年,Murry等[1]首次提出心肌在经受了多次短暂的缺血再灌注后,能在随后的长时间缺血中延迟并减轻心肌损伤,即缺血预处理(ischemic preconditioning,IP).
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CXCL8/PI3K-Akt信号通路在缺氧诱导的人脑胶质瘤细胞血管生成拟态中的作用
目的 探讨CXCL8/PI3 K-Akt信号转导通路在缺氧诱导的人脑胶质瘤细胞株U87MG和U251血管生成拟态中的作用.方法 用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧环境,将人脑胶质瘤细胞株U87MG和U251置中培养.分别加入PI3 K-Akt信号通路激动剂CXCL8及PI3K-Akt信号通路抑制剂LY294002干预48 h,体外成管实验检测各组细胞成管能力;Western印迹检测各组Akt、P-Akt蛋白的表达情况.结果 缺氧可导致U87MG细胞和U251细胞形成的管腔样结构明显增加,Akt蛋白的磷酸化活化表达显著增加(P＜0.05).加入CXCL8干预可使管腔样结构直径进一步增长,而加入LY294002干预48 h则可使其管腔样结构在数量和直径上显著少于缺氧组(P＜0.05).CXCL8能够有效激活Akt磷酸化,LY294002则显著抑制其磷酸化活化(P＜0.05),而总Akt蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 CXCL8/PI3 K-Akt信号转导通路在缺氧诱导的人脑胶质瘤细胞株U87MG和U251血管生成拟态中发挥重要的促进作用,可望成为胶质瘤治疗有效靶点.
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白藜芦醇对大鼠缺血心肌的保护及对凋亡的抑制作用
目的 探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌的保护及对心肌细胞凋亡的影响,并分析与PI3K-Akt信号通路的关系.方法 50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即假手术组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R +Wom组)；结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型；监测血流动力学,记录左心室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左心室变化速率大值(±dp/dtmax)在缺血前、缺血30 min、再灌注60、90、120 min等几个时间点的变化情况,并同步监测肢体Ⅱ导联心电图；测定再灌注心肌组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)的含量,并用TUNEL方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达,利用Western印迹测定蛋白激酶B(又称PKB)及磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)含量.结果 与I/R组及Res+ Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Res组P-Akt蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 白藜芦醇对缺血而再灌注心肌有较好的保护作用,能够抑制再灌注所引起的细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K-A kt信号通路活化有关.
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ERK1/2及PI3K-Akt途径在雌激素促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制
目的 探讨ERK1/2、PI3K-Akt途径在雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制.方法 分别用E2、雌激素受体抑制剂ICI182780(ICI)、ERK1/2抑制剂PD98059(PD)和PI3K-Akt抑制剂LY294002(LY)单独或联合处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率,Western blot法检测细胞ERα、ERβ、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 E2可促进FRO细胞增殖及ERα、Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达;ICI可抑制Bcl-2蛋白的表达,对Bax蛋白的表达无明显影响;PD和LY可抑制E2对FRO细胞的上述作用.结论 E2可通过激活ERK1/2、PI3K-Akt通路,增加Bcl-2/Bax的比值,促进FRO细胞增殖.
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PI3K-Akt信号通路与肿瘤相关性的研究进展
PI3K-Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在体内发挥着促进细胞增殖和抑制凋亡的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生和发展密切相关.本文就PI3K-Akt信号通路的功能、调节与肿瘤的相关性及其在肿瘤治疗中的应用等方面进行文献综述,以期能为以PI3K-Akt信号通路中某些关键分子为靶点的肿瘤治疗及靶向药物研究提供参考.
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PTEN抑制剂对高糖诱导的内皮细胞衰老的影响
目的： PTEN抑制剂对高糖诱导内皮细胞衰老的影响。方法原代内皮细胞的培养和鉴定,CCK8检测细胞生存率,实验分为正常组( C)、高糖组( HG),PIC处理组( PIC)。 C组糖浓度为5．6 mmol·L-1(C组),HG浓度为30 mmol·L-1(HG),PIC组过氧钒(PIC)浓度为10、100 nmol·L-1,预培养半小时后加高糖。流式细胞测定细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色试剂盒( SA-β-Gal)染色测定阳性细胞数,实时定量PCR测定p16、PTEN基因表达,Western 印迹检测总PTEN p16蛋白表达水平。结果高糖降低内皮细胞生存率,高糖诱导内皮细胞PTEN基因及蛋白表达增加,增加β-半乳糖苷酶染色性阳性细胞数, p16、PTEN基因及蛋白表达增加。 PIC增加高糖诱导的内皮细胞生存率,降低高糖诱导的内皮细胞p16、PTEN基因及蛋白的表达。高糖可以诱导内皮细胞凋亡,PIC降低高糖诱导的内皮细胞凋亡率。结论适当浓度PTEN抑制剂降低高糖诱导的内皮细胞衰老。高糖作用时间6 d可以诱导内皮细胞凋亡,PIC降低高糖诱导的内皮细胞凋亡率。
