血管紧张素Ⅱ2型受体基因对血管平滑肌细胞的促凋亡作用

目的:探索血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型(AT2)受体基因对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的影响.方法:用同源重组技术构建携带AT2受体基因的复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-AT2R),将VSMC分为对照组及转染组(体外转染培养的大鼠VSMC),用流式细胞术检测其细胞转染率,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测AT2受体、bcl-2和bax mRNA表达,流式细胞术、原位末端标记法检测VSMC凋亡.结果:构建的AdCMV-AT2受体体外转染培养的VSMC的表达率为89.51%,VSMC表达AT2受体后,其凋亡发生率较对照组增加4.2倍(P＜0.01),bax表达增加76.3%,bcl-2则无明显变化,原位末端标记法检测结果表明转染组出现大量凋亡细胞.结论:转染AT2受体基因可显著增加VSMC的凋亡,这对血管再狭窄的防治是有益的.

大鼠急性心肌梗死后的心肌细胞凋亡和调亡相关基因的表达

感觉神经肽及其受体拮抗剂作用下增生性瘢痕细胞凋亡相关基因的变化

目的 探讨感觉神经肽(substance P,SP)及其受体拮抗剂对增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)中成纤维细胞(fibroblast,FB)凋亡相关基因表达的影响.方法 体外培养Hs及正常皮肤(normalskin,NS)的FB,免疫组化检测在SP及SP受体拮抗剂作用下FB的增殖细胞核抗原(proliferating cell nu-clear,PCNA)、bax、bcl-2的表达变化.结果 SP可以促进FB的PCNA、bcl-2表达,抑制bax表达,在HS中SP作用强于NS,且主要由NK1受体介导起作用.结论 SP参与FB凋亡相关基因的表达.

NADH对X射线诱导的细胞凋亡信号传递的影响

目的 研究NADH抗辐射诱导的细胞凋亡及其作用机制.方法 通过MTT法和流式细胞仪检测L02细胞受照后加和不加NADH(400μg@ml-1)条件下细胞活性、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白p53、p21、p16、bcl-2阳性细胞表达率.结果 细胞活性随X射线辐射剂量增大而减少,细胞凋亡率增加,NADH能增加肝细胞受照后细胞活性和减少细胞凋亡率.与假照射组相比,L-02细胞离子辐射后p53、p21和p16阳性表达率上升,bcl-2下降;加入NADH后,明显上调受照后肝细胞bcl 2蛋白表达和下调p53、p21和p16表达,差异非常显著(P<0.05).结论 X射线诱导正常肝细胞L-02凋亡及NADH抗辐射作用可能与p53信号传递途径有关.

联合PTEN、p14ARF、Survivin在肺癌中的检测及治疗意义

目的 联合检测PTEN、p14ARF、Survivin在肺癌中的表达及相互关系,为肺癌诊断、监测发展及基因治疗提供理论依据.方法 用免疫组织化学法检测2009年1月～2015年12月本院87例支气管肺癌组织和13例正常肺组织中PTEN、p14ARF、Survivin基因的表达及其相关性.结果 PTEN、p14ARF表达在正常肺组织高于肺癌,而Survivin 则相反;PTEN、p14ARFF表达随肺癌细胞恶性程度增加而减少,而Survivin则相反,且在高、中、低分化各组间表达差异有统计学意义(P＜0.01);在临床分期组随临床分期的增大,PTEN、p14ARF表达减少,而Survivin表达增强,且三者在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期表达比较,差异有统计学意义(P＜0.01).PTEN、p14ARF有协同作用(r=0.6489,P＜0.01),Survivin与PTEN,与p14ARF互为反作用(r=0.5743,P＜0.01;r=0.6860,P＜0.01).结论 PTEN、p14ARF和Survivin共同调控肺癌细胞的凋亡和增殖,为三者在肺癌中的联合治疗提供理论依据.

红毛五加多糖诱导人胃癌细胞凋亡

目的研究红毛五加多糖对人胃癌细胞SGC-7901的诱导凋亡作用.方法采用细胞增殖法来研究时间-效应和剂量-效应.采用超微形态结构,凝胶电泳技术和流式细胞术(FCM)对细胞凋亡进行分析.结果 1.0×10-4mol/L AGP显著抑制了胃癌细胞的增殖. 胃癌细胞在1.0×10-4 m ol/L AGPⅣ作用36 h后,癌细胞浓缩、深染,胞膜起泡,致密的染色质沿核膜下凝聚,有凋亡小体形成;细胞DNA电泳呈现梯状带型;细胞周期分析G1峰前出现明显的细胞凋亡峰,定量分析凋亡细胞在1.0×10-4 mol/L AGPⅥ作用72小时发生率为62.6%.细胞周期分析表明四种红毛五加多糖均使细胞周期停滞在G0/G1期.结论 AGP对胃癌细胞的增殖抑制作用具有剂量-效应和时间-效应关系.AGP可诱导胃癌细胞凋亡 .AGPⅡ可能是AGPⅣ的主要有效成份.

TOLL样受体4在哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在哮喘状态下气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、凋亡中的作用.方法:建立哮喘大鼠模型,分离、培养哮喘大鼠气道平滑肌细胞,应用小分子RNA干扰技术、脂质体转染法进行小分子RNA-TLR4的转染、MTT,法检测细胞增殖、TUNNEL法检测细胞凋亡情况、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot 检测细胞中,TLR4的mRNA和蛋白的表达水平.结果:TNF-α组ASMCs增殖反应显著高于对照组、siRNA-TLR4转染组,TNF-α+siRNA-TLR4转染组,而siRNA-TLR4转染组的ASMCs增殖反应显著低于对照组siRNA-TLR4转染组和TNF-α+siRNA-TLR4转染组细胞调亡率显著高于对照组,而TNF-α组ASMCs的凋亡率显著低于对照组、siRNA-TLR4转染组、TNF-α+siRNA-TLR4转染组;对照组和TNF-α组TLR4的mRNA和蛋白表达水平显著高于siRNA-TLR4转染组、TNF-α+siRNA-TLR4转染组,而TNF-α组TLR4的mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组.结论:TLR4的激活可能促进哮喘气道平滑肌细胞的增殖,抑制调亡,从而在哮喘气道重构中起重要作用.

产前应激对成年子代大鼠缺血性卒中后细胞凋亡的影响

目的:研究产前应激对雄性子代大鼠大脑中动脉缺血/再灌注后神经功能的影响.方法:SD孕鼠随机进行产前应激处理(孕期每日3次限制活动)和无产前应激处理,并对其雄性子代大鼠采用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血(MCAO)模型,共分为假手术组、产前应激+假手术组、MCAO模型组、产前应激+MCAO组(n=10).于再灌注24h后进行神经功能评分,并检测脑梗死面积、神经细胞凋亡情况和凋亡相关蛋白表达.结果:产前应激+ MCAO组子代大鼠神经功能评分、脑梗死面积百分比、TUNEL阳性细胞、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和活化的Caspase 3蛋白表达均较MCAO组显著增加(P＜0.05),而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达较MCAO组减少(P＜0.05).结论:产前应激可能通过促进子代大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡,加重神经功能缺损.

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺组织内质网应激介导的凋亡的变化

目的:探讨内质网应激介导的凋亡在低氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的变化及意义.方法:清洁级雄性SD大鼠22只随机被均分成对照组和低氧组(n=11).采用常压低氧法复制慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压模型,4周后,测定肺动脉平均压(mPAP)、右心室游离壁(RV)和左心室加室间隔(LV+S)重量比、肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、管腔面积/管总面积(CA/TA)及肺细小动脉中膜厚度(PAMT)作为模型指标.Hoechst染色检测肺组织调亡细胞核.RT-PCR检测肺组织中胱冬酶12(caspase12)和葡萄糖调节蛋白78与94(GRP78、GRP94)mR-NA的表达水平.免疫组化法检测肺组织GRP78、GRP94蛋白的表达.结果:①与对照组相比,低氧组mPAP高50.5 %,RV/(LV+S)高37.3%,WA/TA高72.5 %,PAMT高137%,而CA/TA低41.9%(均P＜0.01).②Hoechst染色结果显示低氧组肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞可见较多呈高蓝光细胞核,肺血管中膜平滑肌细胞见低蓝光细胞核.③半定量RT-PCR结果显示,与对照组相比,低氧组肺组织caspase12 mRNA高144%,GRP78 mRNA高137%,GRP94 mRNA高80.7%(均P< 0.05).④免疫组化半定量结果显示,低氧组GRP78、GRP94蛋白明显高于对照组(均P<0.01),棕黄色颗粒表达主要位于肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞,而中层平滑肌层表达不明显.结论:内质网应激介导的凋亡与大鼠慢性低氧性肺动脉高压、肺血管改建的病理过程有关.

细胞凋亡与椎间盘退变

1972年,Kerr 等[1]提出了细胞凋亡的概念,随后的研究证实,细胞凋亡在机体发育和许多生理、病理过程中均起着重要作用.退行性疾病是多种因素作用下机体某些器官的功能过早减退,组织学上表现为特定器官内功能细胞的数量减少.有研究表明[2～5],细胞凋亡参与了骨性关节炎等退行性疾病的发生与发展.颈椎病和腰椎间盘突出症均可严重影响人们的健康,目前公认,其发生、发展的根本原因是椎间盘退变.本文对细胞凋亡与椎间盘退变的关系综述如下.

Caspase-3抑制剂对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用

目的 探讨Caspase-3抑制剂在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用.方法 颈内动脉穿刺制作大鼠蛛网膜下腔出血模型.将大鼠随机分成3组:实验组(38只)模型制作后腹腔注射Caspase-3抑制剂 Z-VAD-FMK(10 μmol/L,0.3 mL);对照组(38只)注射等体积二甲基亚砜(DMSO);正常组(16只)未进行任何处理.72 h记录死亡率、神经功能评分、脑水肿、血脑屏障通透性等脑损伤指标;TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,免疫组化、Western Blot检测Caspase-3表达.结果 Caspase-3抑制剂可降低大鼠死亡率(47.4%vs28.9%,P<0.05),减轻脑水肿,保护血脑屏障,减少Caspase-3蛋白表达及神经元细胞凋亡(P<0.05),但对神经功能评分无明显影响(P>0.05).结论 细胞凋亡在SAH后早期脑损伤中起重要作用,可减轻SAH后早期脑损伤.

缺血后处理心肌保护作用的研究进展

1986年,Murry等[1]首次提出心肌在经受了多次短暂的缺血再灌注后,能在随后的长时间缺血中延迟并减轻心肌损伤,即缺血预处理(ischemic preconditioning,IP).

凋亡相关基因与脑缺血再灌注损伤

脑缺血再灌注损伤可诱导神经元的凋亡,但确切的机制还不清楚.在脑缺血损伤过程中,Caspase家族、Bcl-2家族、Fas/Fasl、P38MAPK、CHOP等基因被诱导和表达.Caspase家族各基因参与缺血神经元凋亡的信号传导,其中Caspase-3是调亡信号转导通路中重要的蛋白酶.Bcl-2基因家族包括促凋亡和抑凋亡基因,这两种基因相互协调,共同对缺血神经元的凋亡进行调控.Fas/Fasl、P38MAPK、CHOP等基因的过表达诱导缺血神经元的凋亡,可能参与缺血神经元凋亡的信号传导机制.

中药活性成分抗神经细胞凋亡机理研究

抗神经细胞凋亡是当今研究的一大热点,文章就中药活性成分抗神经细胞凋亡的作用机理进行简要综圹述,主要包括:抗氧化、抑制细胞内钙超我以及相关基因的表达等方面.

TRAIL真核质粒联合紫杉醇诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子家族成员,TRAIL可以通过细胞表面受体途径和线粒体途径诱发多种肿瘤细胞发生调亡,而对正常细胞无明显杀伤作用,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景.

拓扑替康对人子宫内膜癌细胞株AN3CN抑制作用的研究

目的观察拓扑替康(TPT)对人子宫内膜癌细胞株AN3CN生长的抑制作用及TPT对诱导肿瘤细胞调亡的作用.方法共分为5组,对照组:不加TPT,治疗组根据所加TPT浓度的不同分为:20μg/L组、40μg/L组、80 μg/L组及160μgL组.MTT法检测各组在不同时间经TPT处理后的肿瘤细胞抑制率,流式细胞术检测各组细胞经TPT处理24小时后的细胞周期变化,电子显微镜观察各组肿瘤细胞形态学改变.结果治疗组不同浓度的TPT对AN3CN细胞的生长均有抑制作用,其中40μg/L组和80μg/L组随药物作用的延长,肿瘤抑制率也显著增大,各治疗组C0/G1期的细胞比例数增加,S期和G2/M期细胞减少,其中40μgL组、80μg/L组和160μgL组与对照组差异显著(P＜0.05),各治疗组的细胞在形态学上呈细胞调亡的表现.结论TPT对子宫内膜癌细胞株AN3CN的生长具有抑制作用,并且诱导肿瘤细胞调亡是TPT抗肿瘤作用的机理之一.

利用细胞块检测少精子症精液增殖与凋亡的研究

目的 探讨原因不明少精子症睾丸生精细胞增殖与凋亡的病理生理机制.方法 39例原因不明少精子症患者留取精液,制备细胞块切片,采用免疫组化技术观察生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及P16的表达;采用原位3′羟基末端标记法(ISEL)观察生精细胞凋亡.15例正常精液作为对照.结果 原因不明少精子症患者精液细胞块PCNA增殖指数(16.6±7.1)%,明显低于对照组的(35.1±5.7)%,P＜0.001;P16蛋白表达阳性率(17.4±8.9)%,明显高于对照组的(6.2±2.1)%,P＜0.01;生精细胞凋亡指数(1.9±1.1)%,明显高于对照组的(0.3±0.1)%,P＜0.01,差别均有显著性意义.结论 原因不明少精子症患者精子减少的主要原因之一是生精细胞增殖能力减少及凋亡增加造成增殖与凋亡平衡失调,此种失衡可能与P16蛋白的异常表达有关.精液细胞块监测生精细胞可以作为一种监测少精子症患者的非创伤性指标.

脑缺血后线粒体功能的变化机制及银杏叶制剂和氟桂嗪药物保护作用的研究进展

缺血性脑血管疾病是一种致死致残的常见病、多发病.脑缺血后神经元的死亡包括坏死与调亡过程,其机制尚未完全阐明.线粒体是细胞的能量转换器,三羧酸循环、电子传递和氧化磷酸化反应产生ATP的重要场所.

黄芪对衰老小鼠一氧化氮、自由基及细胞凋亡的影响

目的:研究黄芪的抗衰老作用及作用机制.方法:取2月龄小鼠正常条件下饲养11月,制成自然衰老模型,用黄芪黄酮浓缩液1mL/只灌服衰老小鼠6周,检测衰老小鼠胸腺中NO、MDA含量及SOD活性,用荧光显微镜研究细胞凋亡的形态学变化.结果:黄芪黄酮可明显降低衰老小鼠胸腺NO及MDA含量,提高SOD活性、抑制胸腺细胞调亡.结论:黄芪对衰老小鼠胸腺细胞的退行性变化具有改善或延缓作用.

紫杉醇对顺铂耐药卵巢癌细胞的影响

目的 研究抗癌药物诱导顺铂耐药细胞的调亡的规律,为卵巢癌的化疗提供理论依据.方法 紫杉醇作用于体外培养的顺铂耐药的卵巢癌细胞COC1细胞系通过HE染色、电子显微镜、流式细胞术等方法进行检测和观察.结果 经紫杉醇处理的卵巢癌COC1细胞出现典型的细胞调亡特征.紫杉醇诱导细胞调亡在一定范围内具有剂量依赖性,高达到39%,但是浓度加大〉50 nmol/ml,调亡率下降.结论 紫杉醇能有下得诱导顺铂耐药的肿瘤细胞的调亡.