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骨髓间充质干细胞移植对大鼠心肌梗死后细胞凋亡的作用
目的:探讨骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心肌梗死区细胞凋亡的影响.方法:取大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养、增殖和标记,同时以液氮冷冻左室游离壁建立心肌梗死模型,4周后分别将2×106个细胞悬液或冷D-Hanks液注入心肌梗死区数个不同部位.于移植后1周、2周和4周依次获取心肌梗死区标本.随机于第2周实验组与对照组中各抽取两个标本进行透射电镜检查,凋亡细胞计数,RT-PCR检测所有标本bcl-2 mRNA的表达.结果:部分心肌细胞呈调亡细胞初期形态改变,实验组和对照组调亡指数分别为0.02和0.08.bcl-2 mRNA在术后第1,2及4周的表达水平实验组与对照组相比均增加(P<0.01),且随着时间的推移其表达量两组均呈迅速降低的趋势(P<0.01).结论:骨髓间充质干细胞心肌移植可促进心肌梗死区Bcl-2蛋白表达,并减轻大鼠心肌梗死后细胞凋亡.
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紫杉醇对大鼠平滑肌细胞凋亡的影响
目的观察术后抗再狭窄药物紫杉醇对平滑肌细胞凋亡的影响及量效、时效关系.方法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,培养至4到9代.根据紫杉醇作用时间不同将细胞分成24小时组和72小时组,每一时间组根据加入不同浓度紫杉醇分四组:0 μmol/L, 0.1 μmol/L, 1 μmol/L, 10 μmol/L组.用流式细胞仪检测紫杉醇是否引起细胞凋亡,并观察此作用与药物浓度和时间的关系.结果紫杉醇作用VSMC 24小时后0 μmol/L组及低、中、高浓度紫杉醇组细胞凋亡率分别为2.2%、3.6%、6.8%、22.6%;72小时后细胞凋亡率分别为6.1%、10.4%、15.4%、42.7%. 结论紫杉醇能促进平滑肌细胞的凋亡,随着药物浓度提高,作用时间延长,细胞凋亡率也相应升高.故促进平滑肌细胞调亡可能是紫杉醇抑制平滑肌细胞过度增殖的重要机制.
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乳腺浸润性导管癌bak基因的表达及意义
目的 研究细胞凋亡相关基因bak在乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma;IDC)组织中的表达,探讨bak基因在IDC发生演变过程中的意义.方法 采用原位分子杂交技术检测46例IDC组织中bak mRNA的分布及表达.结果 bak mRNA的检出率:46例IDC组织为58.7%(27/46),癌旁组织为53.3%(9/16);在癌组织与癌旁组织中,bak基因表达无显著差异(P＞0.05);但在IDC中,bak mRNA的表达II级组织强于III级组织(P＜0.05).结论 bak mRNA表达可能与IDC的分化程度有关.
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全反式维甲酸对人视网膜色素上皮细胞D407增殖及凋亡的影响
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对体外培养条件下的人视网膜色素上皮细胞株(retinal pigment epithelial cells,RPE)D407增殖及调亡的影响,探讨ATRA诱导D407细胞调亡影响的机制.方法 将常规传代培养的D407细胞计数后加入浓度为10μg/mL的ATRA完全培养基作为实验组,并与所设空白对照组相比较,继续培养72h后进行活细胞计数并观察药物对D407细胞的抑制作用.同时观察传代细胞培养24h后ATRA对传代细胞贴壁行为的影响.光镜、电镜下观察经ATRA药物作用后D407细胞形态学的改变,应用流式细胞仪检测实验组和对照组的细胞调亡率.结果 体外培养的D407细胞ATRA实验组细胞存活数显著少于空白对照组.ATRA能诱导D407细胞发生调亡现象,药物作用72h后发生调亡细胞多为早期调亡细胞.结论 ATRA能有效地抑制体外培养的D407细胞的增殖和黏壁,发生抑制作用的机制可能与诱导细胞调亡有关.
关键词： 全反式维甲酸 人视网膜色素上皮细胞D407 增殖 调亡 -
血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对大隐静脉内膜平滑肌细胞增生的影响
目的 研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大隐静脉平滑肌细胞增殖的影响,为临床防治再狭窄提供新的思路.方法 体外培养人体大隐静脉,随机分成5组:AngⅡ组,Val组,Val+AngⅡ组,空白对照组和HSV组.培养14 d后收集标本,分别行HE染色、Masson染色、PCNA染色及TUNEL染色.采用病理图像分析系统进行分析,统计VSMC增殖指数和凋亡百分比,并采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析.结果 大隐静脉体外培养14 d后,AngⅡ组内膜厚度及内膜增生指数,以及内膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞百分数明显增加,而Val+AngⅡ组内膜厚度及内膜增生指数均明显低于AngⅡ组;PC-NA阳性细胞百分数明显减少;TUNEL阳性细胞百分数明显升高.结论 血管紧张素受体桔抗剂缬沙坦可显著抑制体外培养血管紧张素Ⅱ诱导的大隐静脉平滑肌细胞增生和新生内膜形成,且可促进平滑肌细胞调亡.
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氡致小鼠肺损伤及对肺上皮细胞凋亡和p53蛋白表达影响
目的 现察氡吸入染毒小鼠肺及支气管组织的病理学改变、肺细胞凋亡及p53蛋白表达的变化.方法 建立氡染毒小鼠模型,观察吸入不同剂量即30和60个工作水平月(WLM)和不同时间段(24 h、30 d、90 d和180 d )氡小鼠肺组织的病理变化;采用TUNEL法检测小鼠肺上皮细胞调亡程度;用Westem-blot技术测定小鼠肺及支气管组织神3蛋白的表达水平.结果 病理学结果显示,染毒后肺组织的病理表现存在多样性和时相性,早期为急性损伤性反应,后期演变为上皮细胞及肺间质成纤维细胞的增生及组织的纤维化;随着染毒剂量的增加和染毒后随着时间的延续,小鼠肺组织中的肺上皮细胞凋亡指数及p53蛋白表达量比对照组明显升高.结论 氡吸入染毒可对小鼠肺造成不同类型的病理损伤,p53在氡吸入导致的肺上皮细胞凋亡过程中可能起到了一定的作用.
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调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用
[目的]探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制.[方法]宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组.利用siPORT NeoFX Transfection Agent,阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control,miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsamiR-99b miRNA Precursor.实时定量PCR方法检测miR-99b表达,四甲基偶氮唑蓝(MTTr法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A(CDC25A)蛋白表达.[结果]实时定量PCR结果显示,miR-99b调控组细胞,miR-99b表达增加107.23倍.正常对照组、阴性对照组和miR99b调控组细胞增殖率分别为(3.26 ±0.44)%、(3.65 ±0.47)%和(2.24±0.45)%,细胞凋亡率分别为(8.12±1.54)%、(8.75±1.67)%和(14.26±1.70)%,细胞CDC25A蛋白表达分别为0.50±0.06、0.59±0.05和0.31±0.05.与正常对照组和阴性对照组比较.miR-99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因.
关键词： SIHa细胞 microRNA-99b 增殖 调亡 -
HSP60在糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡中的作用
目的 观察HSP60在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞上的表达及其对糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡的影响,探讨HSP60在糖尿病性白内障病变中的作用. 方法 鼠龄为6~8周的SD大鼠随机分成糖尿病组及对照组,每组8只,糖尿病组在禁食12 h后一次性腹腔注射1%链脲佐菌素诱发糖尿病模型,成功诱导成糖尿病模型4周后应用免疫组织化学法及Western blot 检测晶状体上皮细胞上HSP60 的表达. 晶状体上皮细胞(SRA01/04细胞珠)在含20%胎牛血清的低糖(5.5 mmol/L) DMEM培养液中培养传代后加入含高渗葡萄糖(25 mmol/L)的培养液中,分为两组,其中一组加入10 mg/L HSP60蛋白,培养72 h后Western blot 检测caspase-3的含量. 结果 在对照组大鼠晶状体上皮细胞上未发现有HSP60表达,糖尿病组大鼠可见晶状体上皮细胞上有HSP60表达,Western blot检测HSP60差异有统计学意义( P<0.05 ). 细胞培养实验结果显示,加入HSP60蛋白后,晶状体上皮细胞中caspase-3的表达量下降. 结论 早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞能够表达HSP60,且对高渗糖诱导的晶状体上皮细胞凋亡有保护作用.
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还元注射液抗凝血酶所致星形胶质细胞凋亡作用的研究
目的观察中药还元注射液抗凝血酶所致星形胶质细胞凋亡的作用.方法将体外培养的大鼠星形胶质细胞随机分为正常对照组、凝血酶组和还元注射液组, 24h后通过检测亚二倍体细胞数及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)反映细胞凋亡程度.结果还元注射液组细胞凋亡率明显低于凝血酶组.结论还元注射液有减轻凝血酶所致星形胶质细胞凋亡的作用.
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中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展
自Kerr1972年提出调亡(opoptosis)的概念以来，人们逐渐认识到：细胞凋亡是普遍存在于多细胞生物体内的一种自发、主动的细胞死亡过程，是生物体维持细胞数量相对稳定的固有机制，这一机制若有障碍或发生异常，就可能引发肿瘤或其他病变。肿瘤是一种细胞凋亡过少而增殖过多的疾病，若能抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其调亡，则肿瘤细胞就有可能停止生长。近年来，中药诱导肿瘤细胞凋亡已成为一条很有希望治疗肿瘤的新途径，其研究方兴未艾。本文就其近期内研究进展情况作一综述。
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缺氧预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的抗凋亡保护作用
目的研究缺氧预处理对正常肝细胞株L02缺氧复氧损伤的抗凋亡细胞保护机制.方法建立缺氧预处理细胞模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组(hypoxia reoxygenation,H/R组)和缺氧预处理组(hypoxic precondition,H/P组).使用流式细胞术,检测细胞缺氧复氧处理后l、6、12、18、24 h细胞凋亡率,并分别检测各组细胞缺氧复氧处理后12 h时bcl-2、bcl-xl、bax和P53蛋白的表达量,同时通过透射电镜观察细胞超微结构变化.结果H/P组和H/R组比较,细胞凋亡率显著下降,bcl-2、bcl-xl蛋白表达显著升高,P53、bax蛋白表达量显著降低,透射电镜下可见细胞结构基本维持正常.结论缺氧预处理对缺氧复氧导致的L02肝细胞损伤有明显的保护作用.肝缺氧预处理过程中,bcl-2、bcl-xl、bax及P53蛋白参与了细胞凋亡调控作用.
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钙离子再灌注后两种胶质细胞凋亡规律比较研究
近年来,凋亡现象与神经系统疾病之间的关系正随着研究的不断深入而得到更多的认识；神经胶质细胞是中枢神经系统结构和功能的重要组成部分，在病理条件下其凋亡的特性和规律必然影响到其功能实现。目前，对于星型胶质细胞和少突胶质细胞在钙离子再灌注条件下的凋亡发生规律尚无明确报道。本实验在对星形胶质细胞和少突胶质细胞分离培养、纯化的基础上，用钙离子再灌注法诱导凋亡，观察在相同凋亡诱导因素作用下两种细胞凋亡发生发展的规律及其间的差异。
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Hid基因与Ras依赖的生存信号
人体内,Ras被激活可导致细胞的调亡率下降,是人类肿瘤发生中基因组普遍发生的改变.研究发现,rpr,hid和grim是果蝇基因中控制细胞凋亡的三种基因.rpr和grim只在即将死亡的细胞上表达,而hid在即将死亡的细胞和部分活着的细胞上均有表达,提示
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肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体与肝病
肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL)在机体不同的生理条件下,促进或抑制某些调亡相关基因的表达,调节细胞调亡.TRAIL在病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的发生发展及其治疗中也有重要作用,有望成为新一代的抗肿瘤药.
关键词： 肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体 调亡 病毒性肝炎 肝细胞癌 -
卵泡发育的基本理论及促超排卵
1 卵泡发育的基本理论卵母细胞是人类体内大的单细胞,其发育过程大致为原始生殖细胞的迁移分化形成始基卵泡,然后启动生长形成初级卵泡、次级卵泡,终发育为成熟排卵.人类在出生时的始基卵泡数量约为30万～50万个,其中终能够发育成熟并排卵的不过400个左右,只占总数的0.1%,大部分的卵母细胞在生长过程都发生了调亡和闭锁.
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大鼠骨髓间充质干细胞的培养及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究
目的:探讨在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的方法.方法:分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞并用β-巯基乙醇诱导分化为神经元样细胞,使用免疫组化方法鉴定其神经元特异性巢蛋白(nestin)的表达,同时应用脱氧核糖核营酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)对神经元样细胞的凋亡情况进行定性检测.结果:β-巯基乙醇诱导后MSCs分化为具有典型的神经元形态的细胞,免疫组化实验显示Nestin呈强阳性反应,表明MSCs在体外诱导分化为神经元样细胞.但该细胞在诱导5小时后开始死亡,形态学观察和TUNEL法均确定该死亡为细胞调亡,提示MSCs诱导为神经元样细胞后出现凋亡现象.结论:大鼠MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞,其随后发生的细胞死亡属细胞凋亡.
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槲皮素对肺腺癌细胞系A549细胞中凋亡相关因子Bcl-2表达的影响
目的 探讨槲皮素对肺腺癌细胞系A549细胞中凋亡相关因子Bcl-2表达的影响.方法 采用RT-PCR与Western Blot技术检测槲皮素在不同时同、不同浓度作用A549细胞后的Bcl-2 mRNA和蛋白表达的变化.结果 槲皮素作用A549细胞后,A549细胞的Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平逐渐降低,并且呈现出一定的时间和浓度依赖性.结论 槲皮素诱导A549细胞调亡可能通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达而起作用.
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脑外伤后神经细胞凋亡的研究进展
急性脑损伤后神经元损伤可分为两种形式,一种称为原发性神经元损伤,指损伤暴力对神经元的机械损伤,在创伤的同时发生.另一种称为迟发性神经元损伤,由多种因素引起,在创伤几小时、几天或更长时间后发生,并且经大量实验证实,这种迟发性损伤主要表现在神经元的程序性死亡.因此,近几年来,越来越多的动物实验开始对脑损伤后细胞凋亡的发生及机制进行了研究.本文就这一研究进展综述如下.
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术前新辅助化疗对大肠癌组织Smad4表达的影响
目的 探讨术前新辅助化疗对大肠癌Smad4表达的影响及其与细胞增殖凋亡的关系.方法 应用免疫组化S-P技术及原位末端标记法(TUNEL法)对15例经术前新辅助化疗的患者进展期大肠癌标本进行Smad4、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞凋亡的检测,并以18例经5-FU静脉化疗及21例未经化疗进展期大肠癌作为对照.结果 在3组中Smad4的表达呈递增趋势(P＜0.05);在3组中PCNA的表达呈递减趋势(P＜0.05);凋亡指数(AI)在3组中也呈递增(P＜0.05).从未经化疗的空白对照组→5-FU化疗组→新辅助化疗组,Smad4与AI呈正相关(r=1,P＜0.01),与PCNA呈负相关r=-1,P＜0.01).结论 术前新辅助化疗可使进展期大肠癌组织中Smad4表达更为明显增高,并可更有效的抑制大肠癌细胞增殖促进凋亡,术前新辅助化疗可作为比5-FU静脉化疗更为有效的一种治疗进展期大肠癌的辅助化疗手段.
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燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢TGF-α的影响
目的:动态观察燃煤型氟中毒对雌鼠卵巢转化生长因子(TGF-α)的影响.方法:SD雌鼠90只,随机均分为对照组、中氟组和高氟组,于不同时间段(60d、120 d、180 d)观察氟斑牙,用离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量;电镜下观察卵巢凋亡情况,用TUNEL技术检测卵巢凋亡细胞数,用免疫组化法检测卵巢TGF-α的表达.结果:随着染氟剂量增加和染氟时间的延长,雌鼠氟斑牙症状逐渐加重,尿氟、骨氟含量增加,染氟组卵巢凋亡细胞数明显增加;与对照组相比,相同染氟时间各染氟组卵巢颗粒细胞TGF-α蛋白表达量均降低(P＜0.05),高氟组低于中氟组,差异有统计学意义(P＜0.05);相同染氟剂量,随着染氟时间延长,各染氟组TGF-α含量逐渐减少,中氟组60d高于120 d和180d,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:氟中毒可能导致卵巢组织细胞超微结构损伤,严重破坏颗粒细胞中线粒体,影响卵巢细胞的能量供应,促使卵巢颗粒细胞凋亡;氟中毒可导致TGF-α分泌减少使其参与阻碍卵泡凋亡和闭锁的作用减弱,促使卵巢颗粒细胞的凋亡增加.
