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精索静脉曲张大鼠睾丸HSP60表达的改变与生精功能损害的相关性
目的:探索精索静脉曲张大鼠睾丸热休克蛋白(HSP60)表达的改变对生精功能损害的影响.方法:选择30只SD大鼠,20只作为手术组,建立精索静脉曲张模型,10例作为假手术对照组.3个月后,取下睾丸常规染色切片,用Makler积分法随机选择曲细精管,手术组200个,对照组100个,并测量内径、管周膜厚度、细胞层数及生精细胞成熟程度,计算平均得分;免疫组化方法测定HSP60的表达量,并比较二组之间的差异.结果:手术组的曲细精管Makler评分显著低于对照组,二者有非常显著性差异(P＜0.01).在手术组曲细精管HSP60表达量为3.85±0.37,对照组表达量为2.10±0.32,二者有非常显著性差异(P＜0.01),且表达均定位于精子细胞,其表达量与评分值呈负相关(r=-0.9405,P＜0.01).结论:精索静脉曲张睾丸组织HSP60表达增加可导致生精功能损害,并影响精子细胞的成熟,可能是不育的原因之一.
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分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析
目的 检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用. 方法 克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达.提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用.利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建HpHsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸. 结果 构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238. 结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能.这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础.
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hsp60基因序列分析及其在病原菌鉴定中的应用
目的 研究致病菌hsp60基因序列的差异性,为建立致病菌快速鉴定方法及为其他研究提供科学依据.方法 在GenBank中查找所需hsp60基因序列,运用分子生物学软件Primer5.0和Oligo6.0设计合适的通用简并引物,采用合适的扩增条件扩增常见致病菌hsp60基因片段.利用分子生物信息学分析hsp60基因序列的保守性、变异性及菌株间种系进化关系.结果 可扩增出常见致病菌hsp60基因片段,序列比较研究显示hsp60基因序列保守与变异并存,保守区与变异区呈"锯齿状"分布.种系进化关系同16S rRNA、23S rRNA分析结果一致.结论 hsp60基因序列分布特点为建立致病菌的分子生物学快速鉴别诊断方法如基因芯片研制等提供了可靠的科学依据和重要的实验基础.
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热休克蛋白60与冠状动脉病变的联系及经皮冠状动脉介入治疗前后的变化
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白(stressprotein),是一组具有重要生理功能、进化上高度保守的蛋白质分子家族,根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP和泛素等.
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免疫荧光及激光共聚焦技术检测热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃黏膜组织细胞HSP60及ras蛋白表达
目的 研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(GAG)胃黏膜组织细胞HSP60及ras表达状态,以探讨CAG发病机制及长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系.方法 采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型,选取大鼠腺胃胃窦组织行激光扫描共聚焦显微镜标本制备并对组织细胞结构的变化进行动态观察.结果 正常组胃黏膜组织细胞未见阳性表达,热盐水组在第12周,在细胞质中可见HSP60及ras表达,呈均质颗粒状,到24周、32周及65周时表达更加明显.双标记中可见HSP60和ras共同表达.结论 热盐水长期灌胃可导致胃黏膜出现萎缩,HSP60和ras表达增加,提示在胃黏膜萎缩形成过程中,HSP60与ras蛋白参与了重要的细胞分化调节过程.
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口服HSP60对动脉粥样硬化大鼠血清TGF-β和调节性T细胞含量的影响
目的 研究口服热休克蛋白60(HSP60)对动脉粥样硬化(AS)大鼠血清TGF-β和调节性T细胞含量的影响.方法 40只4周龄健康雄性SD大鼠,体重100 g±10 g.随机分为4组:健康对照组(C组),动脉粥样硬化未干预组(AS组),AS造模前口服HSP60组(H1组),造模后口服HSP60组(H2组),以上4组每组10只.本实验采用高脂饲料和维生素D3粉剂造AS模型,于出生后180 d采血后处死,并取大鼠主动脉根部作为标本.MIAS-2000图像分析系统观察病理改变,并计算血管内膜(IT)与血管内径(ID)之比(IT/ID);ELISA法检测各组血清中TGF-β含量;流式细胞技术检测血清CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞含量.结果 高脂饮食可形成AS斑块,AS组主动脉内膜增厚,平滑肌细胞增生,排列紊乱,部分血管内膜突起,淋巴细胞、炎性细胞、泡沫细胞浸润,肌纤维断裂,斑块形成斑块处可形成夹层动脉瘤,甚至斑块有破裂出血.各组主动脉血管IT/ID值分别为:C组(6.1±1.3)%;AS组(38.3±6.5)%;H1组(15.8±7.4)%;H2组(26.9±3.3)%.各组血清中细胞因子TGF-β含量分别为:C组(88.7±20.1) pg/mL;AS组(53.6±15.4) pg/mL;H1组(291.9±71.7) pg/mL;H2组(161.3±49.0) pg/mL.各组外周血CD4+、CD8+、CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞比例分别为C组(2.55±0.36)%;AS组(1.66±0.36)%;H1组(5.58±0.22)%;H2组(3.28±0.61)%.结论 口服HSP60能增加AS大鼠血清TGF-β和调节性T细胞含量,增加免疫耐受程度,且造模前口服较造模后口服增加幅度为高.
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基于电镜和免疫组化的线粒体数目标志物评估肝癌的初步研究
目的:研究线粒体数目与肝癌生长的相关性.方法:利用电子显微镜技术定量肝癌组织中线粒体数目,利用免疫组织化学技术评估肝癌组织中的线粒体标志物COXⅣ及HSP60表达水平,分析电镜肝癌线粒体定量结果与COXⅣ及HSP60表达量之间的相关性,并比较肝癌中线粒体数目、COXⅣ及HSP60表达量与肝癌直径之间的关系.结果:与癌旁相比,肝癌组织中线粒体数目(P＜0.001)、COX Ⅳ及HSP60的表达量显著降低(P=0.0417,P=0.0290).COXⅣ及HSP60表达水平与线粒体数目无显著相关(r2=0.009,P=0.5468;r2=0.056,P=0.1396).线粒体数目与肿瘤直径显著负相关(r2=0.1086,P=0.0434),COXⅣ及HSP60表达量与肿瘤直径无显著相关(r2=0.0251,P=0.3287;r2=0.0461,P=0.1830).结论:线粒体数目是潜在的肝癌生长标志物.但常用的线粒体定量分子HSP60与COX Ⅳ并不能准确定量肝癌线粒体.
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HSP60及S100A9在结肠癌中的表达及意义
目的 探讨HSP60及S100A9蛋白在人结肠癌与癌旁正常结肠组织的差异表达及其与人结肠癌发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学染色法检测结肠癌40例及正常结肠组织30例中HSP60及S100A9蛋白的表达.结果 结肠癌中HSP60及S100A9阳性表达率分别为82.5％及77.5％,均显著高于正常组.结肠癌中HSP60与S100A9的表达呈正相关.结论 HSP60及S100A9的高表达可能与结肠癌的发生、发展有关,二者联合检测可以作为诊断结肠癌的潜在标志物.
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43℃热处理对体外培养的猴支持细胞中热休克蛋白105,70和60表达的影响
目的:研究热处理对原代培养的猴支持细胞中热休克蛋白(Hsps)105、70和60表达的影响,并分析可能的信号通路.方法:分离青春期恒河猴睾丸的支持细胞,以Western blot、实时定量PCR和免疫荧光化学法分析43℃热处理对三个热休克蛋白mRNA和蛋白表达的影响.结果:Hoechst 33342染核实验表明热处理后支持细胞并未发生凋亡.Hsp105在未处理的支持细胞有基础表达,热处理后12h其mRNA和蛋白水平升高了约20倍.未处理的支持细胞不表达Hsp70,但热处理显著诱导了它在胞浆中的表达.Hsp70表达的变化时相与Hsp105相似.与Hsp105和Hsp70相比,Hsp60在热处理后的变化要小得多,43℃处理后12h-48h,其蛋白水平仅为对照的1.5倍左右.胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)1/2的抑制剂U0126或磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide kinase-3,PI3K)抑制剂LY294002可部分阻断热处理对Hsp105和Hsp70的诱导作用.结论:这些结果表明ERK和/或PI3K信号通路可能介导热诱导的猴支持细胞热休克蛋白的表达,但这三种热休克蛋白的表达模式并不相同.该结果提示它们在支持细胞中可能有不同的调节功能.
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编码hsp60和IL-2的幽门螺杆菌减毒沙门菌核酸疫苗
目的:构建含幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)hsp60基因和细胞因子IL-2的核酸疫苗,体外转染COS-7细胞,并鉴定其表达蛋白的免疫原性,体内检测其免疫保护作用.方法:以H. pylori菌株基因组DNA为模板,PCR扩增hsp60基因,从pCIneo-IL-2扩增小鼠IL-2基因,检测hsp60及IL-2的核苷酸序列;通过酶切、连接反应把hsp60和IL-2同时克隆入pIRES;通过脂质体法将pIRES-hsp60-IL-2转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western 印迹法检测表达蛋白的免疫性.重组载体转化入LB5000,抽提质粒,再转化入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性.以该疫苗菌接种小鼠,4周后H. pylori攻击,再4周后鉴定感染状况.结果:成功扩增出长约1 640 bp的hsp60基因和510 bp的IL-2,测序结果表明扩增出的hsp60基因与H. pylori hsp60序列一致,IL-2序列和小鼠的IL-2序列一致.PCR和酶切鉴定结果证实hsp60和IL-2基因克隆入载体pIRES,成功构建了含hsp60基因和IL-2基因的幽门螺杆菌核酸疫苗pIRES-hsp60-IL-2,并且Western 印迹法检测到相对分子质量为60 000 hsp60蛋白和14 000的IL-2蛋白条带.体内实验显示pIRES-hsp60-IL-2及pIRES-hsp60疫苗接种组分别有79.9%、62.5%小鼠获免疫保护.结论:成功构建了编码hsp60和IL-2基因幽门螺杆菌减毒沙门核酸疫苗,体外实验验证了其免疫原性,体内实验证实其具有免疫保护性.
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109例幽门螺杆菌抗体检测分析
胃幽门螺杆菌(helicobacter pylor,Hp)不仅是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,也是引起胃癌的危险因子.Hp在全世界人群中的慢性感染率达50%以上,我国人群感染率达58.07%([1]).临床上诊断Hp感染的方法很多,包括病理学染色检查、14C-呼气试验(14C-UBT)、快速尿素酶试验等方法,近年来,应用免疫学方法诊断渐成为研究热点.我们通过对本院就诊的109例感染Hp患者检测血清CagA、VacA、Hsp60、Ure四种抗体,了解其在患者中抗体阳性率及其与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌的关系.
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粉尘螨Hsp60基因的测序、克隆和原核表达
目的 探索和发现粉尘螨新的变应原组分.方法 以粉尘螨热休克蛋白60(Heat shock protein 60,Hsp60)为研究对象,用简并引物PCR方法扩增出其cDNA片段,并对该片段进行了序列测定和分析.同时,对该基因片段进行了克隆、原核表达.结果与结论 成功确定粉尘螨Hsp60基因片段cDNA序列;构建了pET-28a(+)-Hsp60重组质粒,并在E.coli BL21中得到高效表达.
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鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究
目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在E.coli中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础.方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达.结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性.结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础.
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鸡源性肠炎沙门氏菌的流行病学调查
目的 与方法通过对一株分离自患病蛋鸡的沙门氏菌进行了生化鉴定、血清学鉴定、分子生物学检测和攻毒试验,确定了我国鸡群中存在肠炎沙门氏菌的感染;通过血清学试验,对我国部分鸡群进行了血清流行病学调查.结果 结果表明,从临床分离的沙门氏菌与肠炎沙门氏菌的微生物学和生物化学特征相符合,通过血清型鉴定、PCR检测、DNA测序和分析证明分离的肠炎沙门氏菌株与标准株肠炎沙门氏菌相符合;首次全国范围血清流行病学调查,从全国采集603份蛋鸡血清中发现9份阳性样本,利用肠炎沙门氏菌阳性血清检测从当地禽内、蛋样本中分离的8株可疑沙门氏菌,未检测到肠炎沙门氏菌.结论 本研究结果显示,我国部分地区蛋鸡群中存在肠炎沙门氏菌的感染,但是鸡群感染率不高.
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慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证与热休克蛋白60、70及CD44s、CD44v6的相关研究
为探讨慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)脾胃湿热证与热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白70(HSP70),细胞粘附分子标准型CD44蛋白(CD44s)及CD44的变异体(CD44v)之一CD44v6之间的关系,选择CAG患者71例进行胃镜检查,胃窦部活检标本行快速尿素酶试验及13C呼气试验,检测幽门螺旋杆菌(Hp),病理诊断和HSP60、HSP70、CD44s及CD44v6的免疫组织化学染色,分析比较它们的相关性.结果:①脾胃湿热组的萎缩和肠化程度高于脾虚组(P＜0.05～0.01);②正常对照组胃粘膜内HSP60主要呈阴性或弱阳性表达,CAG脾胃湿热组及脾虚组患者胃粘膜内HSP60表达增强,且二者Hp的感染率均高于正常对照组(P＜0.05～0.01),Hp的感染情况与HSP60的表达呈非常显著相关(P＜0.01).脾胃湿热组HSP60表达与脾虚组相比无显著性差异,但脾胃湿热组HSP60表达有增强的趋势;③脾胃湿热组HSP70的表达与正常对照组、脾虚组相比无显著性差异(P＞0.05),但脾胃湿热组强阳性表达率(71.0%)高于脾虚组(47.5%)(P＜0.05);④脾胃湿热组CD44s和CD44v6的表达与正常对照组和脾虚组相比无显著性差异(P＞0.05).说明:①CAG脾胃湿热组胃粘膜的萎缩和肠化程度均重于脾虚组,可能是由于脾胃湿热证与炎症关系密切所致.②CAG脾胃湿热组及脾虚组HSP60的表达均较正常对照组增强,原因可能与Hp感染有关.③CAG脾胃湿热组HSP70的强阳性表迭率强于脾虚组.④3组之间CD44s和CD44v6的表达无明显差异,说明CAG作为胃癌前疾病尚未出现CD44s和CD44v6的异常表达.
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胃癌患者血清热休克蛋白60检测的临床意义
目的 探讨血清HSp60水平与胃癌的关系.方法 采用酶联免疫吸附分析法分别对63例胃癌患者血清HSp60水平进行检测,并与30例慢性萎缩性胃炎伴重度不典型增生(CAGD)患者及30例正常对照组比较,分析其与胃癌恶性程度、转移和临床分期的关系.结果 胃癌患者血清HSp60水平均明显高于CAGD与正常对照组(P均<0.01),血清HSp60水平与胃癌恶性程度、转移和临床分期有关(P<0.05),HSp60检测可明显提高胃癌诊断的敏感度及准确性.结论 胃癌患者血清HSp60水平是胃癌发生、发展的重要因素,检测SSp60对胃癌患者诊断、治疗和预后判断等具有重要意义.
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HSP60在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞的表达
目的 观察热休克蛋白(hot shock protein,HSP)在早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞的表达及变化,探讨HSP60在糖尿病性白内障病变中的作用.方法 鼠龄为6～8周的SD大鼠随机分成糖尿病组及对照组,每组18只,糖尿病组在禁食12 h后一次性腹腔注射10g· L-1链脲佐菌素诱发糖尿病模型,成功诱导糖尿病模型后4周、8周、12周分别应用免疫组织化学法及Western blot分析晶状体上皮细胞上HSP60的表达变化.结果 对照组大鼠晶状体上皮细胞上未发现有HSP60表达,糖尿病组大鼠在造模后4周、8周、12周均可见晶状体上皮细胞上有HSP60表达,两组间有显著差异(均为P＜0.05).糖尿病组大鼠造模后4周和8周间表达量无明显差异(P＞0.05);而12周时其表达量开始减少,和4周及8周相比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞有大量HSP60表达,而且随着时间的延长,表达量呈下降趋势.
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黄芪多糖对THP-1巨噬细胞HSP60诱导下IL-6、TNF-α表达的影响
目的 探讨黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide,APS)对炎症模型细胞所释放的炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法 以人急性单核白血病细胞株(THP-1)为实验对象,以热休克蛋白60(HSP60)诱导,使分化为巨噬细胞(Mφ),并以APS干预.随机分为4组,分别是THP-1组、M中组、HSP60组、APS组.收集上清培养液,用ELISA法检测细胞上清中IL-6、TNF-α的浓度.结果 APS组较HSP60组IL-6、TNF-α表达明显下调.结论 APS对THP-1巨噬细胞HSP60诱导下的炎症反应具有一定干预作用.
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热休克蛋白60与肿瘤关系的研究进展
HSP60是一类进化上高度保守的蛋白质家族.生理状态时协助多肽或蛋白质的正确转位、折叠和装配,起"分子伴侣"的作用;在应激状态下,HSP60过表达或异位表达,作为一种自身抗原被免疫系统识别,诱发机体的保护性免疫应答,也可作为一种信号分子,在信号转导中发挥作用.近年来研究证实HSP60在自身免疫性疾病、传染病、动脉粥样硬化及慢性感染的发病中均发挥重要的作用.
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COX-2,HSP60,HSP70在镍铬合金修复体患者牙龈组织中的表达及意义
目的:研究镍铬合金修复体对口腔牙龈组织的影响.方法:本文运用免疫组化染色SP(Streptavidin-peroxidase)法检测COX-2(cyclooxygenase-2)、HSP60(heat shock protein 60)、HSP70(heat shock protein 70)在镍铬合金修复体患者牙龈组织和正常牙龈组织中的表达情况.经患者同意,从临床采集镍铬合金修复体患者牙龈30例作为实验组,采集口内无任何修复体患者的正常牙龈26例,将实验组中同一患者的牙龈组织分成3份,用免疫组织化学技术分别作COX-2、HSP60、HSP70的检测.每种指标检测30例,对照组同实验组.结果进行统计学分析.结果:HSP60和HSP70在镍铬合金修复体患者牙龈组织中表达明显高于对照组正常牙龈组织(P＜0.05).COX-2在实验组中的表达亦高于对照组(P＜0.05).结论:镍铬合金修复体在口腔中游离出的金属离子对牙龈组织具有致敏性和致炎性,但是否具有致癌性还有待研究.
