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中药复方糖耐康干预KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路作用机制研究
目的 观察中药复方糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路的影响.方法 将KKAy小鼠40只采用随机数字表法分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡格列酮组各10只,另取10只C57bl/6J小鼠作为正常对照组.各药物组灌胃相应剂量药物,正常对照组及模型组灌胃无菌水,连续给药60天.给药期间每周测量小鼠随机血糖、饮水量及体重变化,60天后测定小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns),计算胰岛素敏感指数(ISI),Western blot法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中蛋白激酶B(PKB/Akt1 α Ser 473)磷酸化、糖元合成激酶3β(GSK-3β)蛋白的表达.结果 随给药时间的延长,糖耐康对多饮症状的改善逐渐明显,对体重无明显影响.糖耐康高剂量组FPG、FIns、ISI水平均较模型组显著降低(P＜0.05),PKB/Akt1αSer 473蛋白磷酸化水平较模型组明显升高(P＜0.05),GSK-3β蛋白表达较模型组明显下降(P＜0.05).结论 调节胰岛素信号转导受体后途径中PKB/Akt1 α Ser 473磷酸化、GSK-3β蛋白表达,可能是中药复方糖耐康改善胰岛素抵抗状态的作用机制之一.
关键词： 糖耐康 胰岛素信号转导受体后通路 蛋白激酶B 糖元合成激酶3 KKAy小鼠 -
糖肾宁对糖尿病肾病KKAy小鼠的肾脏保护作用及其对Notch/Snail1信号转导通路的影响
目的:明确糖肾宁是否通过干预Notch/snail1通路抑制KKAy小鼠糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化.方法:KKAy小鼠30只,经过10周专用鼠料饲养,血糖＞16.7 mmol·L-1,24h尿蛋白＞0.4 mg为糖尿病肾病动物模型.造模成功小鼠按血糖和体质量分层随机分为模型组、厄贝沙坦组与糖肾宁组,灌胃给药,雌性C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组.检测小鼠一般状况,称体重、测24h尿蛋白定量.干预16周后取材,检测血糖、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血清肌酐(Serum creatinine,Scr);肾组织行HE、Mallory染色.原位杂交及Western blotting法检测小鼠肾组织中Notch/snail1通路、α-SMA、E-Cadherin蛋白及mRNA表达.SPSS20.0软件进行统计学处理.结果:与模型组比较,糖肾宁组小鼠一般状态改善,体质量、24 h尿蛋白定量显著减少(P＜0.01),血清BUN及Scr含量降低(P＜0.01,P＜0.05),病理染色显示肾间质纤维化明显减轻,糖肾宁组肾组织Notch/snail1通路和α-SMA蛋白及mRNA表达明显降低,有显著统计学差异(P＜0.01),E-Cad蛋白及mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:糖肾宁可以保护糖尿病肾病肾功能,延缓糖尿病肾病进展,抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞转分化肾间质纤维化,改善糖尿病肾病EMT的机制可能是通过抑制Notch/snail1通路表达实现.
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糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究
目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:10％ FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中.每组8个复孔,加入6％的各组合药血清培养,分别于12、24、48、60h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形.MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P＜0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P＜0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P＜0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较RhoA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P＜0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P＜0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P＜0.05).正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P＜0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P＜0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程.
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糖肾平含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的研究
目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖.Western blotting检测肾小管上皮细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形.MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P＜0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P＜0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P＜0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P＜0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P＜0.05).Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P＜0.01);与高糖组比,各组E-Cadhenn蛋白表达增加,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P＜0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05),RhoA蛋白表达减少(P＜0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组RhoA、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05).结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展.
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匙羹藤对胰岛素抵抗小鼠脂肪组织蛋白激酶B的影响
目的：观察匙羹藤对胰岛素抵抗（IR）KKAy小鼠脂肪组织中蛋白激酶B表达及磷酸化的影响以及调节机制。方法：将18只胰岛素抵抗KKAy小鼠按体质量随机分为模型组（DM）和匙羹藤水提物组（GS），并选取9只C57BL/6J小鼠为正常对照组（NC），连续灌胃给药8周。实验结束后取血测定空腹血糖（FPG），空腹血清胰岛素（Fins），并计算胰岛素敏感指数（ISI），测定附睾脂肪组织中磷酸激酶依赖的激酶1（PDK1）、蛋白激酶B（PKB）、P-PKB（Ser473），P-PKB（Thr308）蛋白相对含量，及磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）mRNA相对含量。结果：与DM组相比，GS组小鼠FPG、Fins降低，ISI升高，P-PKB（Ser473）蛋白相对含量及其磷酸化水平升高，P-PKB （Thr308）蛋白相对含量升高，PDK1蛋白相对含量降低，PTEN mRNA表达量降低。结论：匙羹藤可通过增加脂肪组织中P-PKB（Ser473）蛋白相对含量，增强Ser473位点磷酸化水平，以及增加P-PKB（Thr308）蛋白相对含量激活PKB，进而改善IR。
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中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响
目的：探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法：12周龄雄性KKAy小鼠50只，按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组，每组10只，另设10只C57BL/6J小鼠为正常组，正常组和模型组给予0.9豫氯化钠溶液，其余组给予对应浓度的药液灌胃，用药8周后处死，取肾脏组织，进行Mosson、PAS染色，免疫组化染色观察平滑肌肌动蛋白（α-SMA），E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达分布；Western Blot检测转化生长因子-β1（TGF-β1）表达。结果：与正常组相比较，模型组小鼠肾纤维化面积显著增大（P<0.01），α-SMA蛋白表达呈现较强阳性，E-cadherin蛋白表达弱阳性。与模型组比较，缬沙坦组、糖耐康各剂量组肾纤维化面积显著减小（P<0.01），α-SMA蛋白表达显著减少（P<0.01），而E-cadherin蛋白表达明显增加（P<0.05）。KKAy小鼠肾脏组织TGF-β1蛋白表达较正常小鼠显著升高（P<0.01）；与模型组比较，缬沙坦组、糖耐康低、中和高剂量组TGF-β1蛋白表达含量都显著降低（P<0.01），其中糖耐康高剂量组与缬沙坦组相比较TGF-β1显著降低。结论：中药复方糖耐康可抑制肾小管上皮细胞EMT的发生，减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。
关键词： 糖耐康 KKAy小鼠 肾小管上皮细胞转分化 肾脏保护 -
益气养阴清热方对糖尿病KKAy小鼠血清胰岛素及TNF-α、IL-6的影响
目的 观察益气养阴清热方对糖尿病KKAy小鼠血清胰岛素及肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)的影响.方法 5 周龄雄性SPF(Specificpathogen-free,SPF)级自发性2型糖尿病KKAy小鼠50只,随机分为模型组、二甲双胍组(0.2 g/kg)、益气养阴清热方高剂量组(2 g/kg)、益气养阴清热方中剂量组(1 g/kg)、益气养阴清热方低剂量组(0.5 g/kg),每组10只.取同周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠10只为正常组.正常组和模型组灌服生理盐水.干预8周后,检测各组小鼠体重、血糖、血清胰岛素、TNF-α、IL-6水平,计算小鼠胰岛素抵抗指数(Homa-Insulin,HOMA-IR).结果 与正常组比较,模型组小鼠空腹及随机血糖、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数明显升高(P＜0.01 ).干预8 周后,与模型组比较,益气养阴清热方高、中、低剂量组小鼠体重、胰岛素水平、HOMA-IR指数均明显下降(P＜0.01 ).益气养阴清热方高、中剂量组能降低TNF-α水平,剂量呈依赖性(P＜0.01 ),其中益气养阴清热方高剂量组效果优;益气养阴清热方高、中、低剂量组均能使IL-6水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05 ),剂量呈依赖性.结论 益气养阴清热方能改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗,降低空腹及随机血糖,其机制可能是通过抑制炎症反应来实现.
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辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏IRS-2/PI3K通路的影响
目的 研究辛开苦降方对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响.方法 将小鼠随机分为辛开组、苦降组、辛开苦降组、罗格列酮组、模型组.对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只.对照组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC).灌胃给药四周后测血浆葡萄糖(FBG),及胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法(Western blotting)测定肝组织IRS-2、P-IRS-2(磷酸化胰岛素受体底物-2)、PI3K、P-PI3K(磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶)、IRS-3、IRS-4蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝组织PI3K 、IRS-2、IRS-3、InsR(胰岛素受体)的mRNA表达水平.结果 与模型组比较,苦降组、马来酸罗格列酮组血糖明显降低(P＜0.05).与模型组比较,各给药组小鼠胰岛素浓度均降低,IAI均升高(P＜0.05).辛开苦降组、辛开组、苦降组可增强T2DM KKay小鼠IRS-2及其磷酸化形式的蛋白表达(P＜0.05),抑制负性调节因子IRS-3、4蛋白表达(P＜0.05).辛开苦降组可以增强PI3K、P-PI3K蛋白表达量及PI3-K mRNA表达(P＜0.05).各给药组间相比,各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 辛开苦降方及其拆方可改善胰岛素抵抗,可能是通过恢复肝脏细胞内正调控和负调控IRS蛋白的平衡实现的.
关键词： 2型糖尿病 辛开苦降方 KKAy小鼠 胰岛素抵抗 IRS-2/PI3K通路 -
辛开苦降方对初发2型糖尿病KKA y小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的影响
目的：观察辛开苦降方干预初发2型糖尿病（T2DM）KKAy小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的影响。方法：10周龄雄性初发T2 DM KKAy小鼠40只按血糖值随机分为4组：模型组、罗格列酮组、辛开苦降低剂量组、辛开苦降高剂量组。正常对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。正常组及模型组给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液（CMC）灌胃。各组连续灌胃给药四周后取材，测定其空腹血糖（Fasting Plasma glucose，FPG）、血清胰岛素（Fasting Insulin，FINS）、血脂，肝糖原、肝脂质含量。显微镜下观察肝脏组织形态。结果：给药四周后，与正常组相比，模型组胰岛素敏感指数（Insulin Sensitivity Index，ISI）明显降低（P＜0.01）， FPG、FINS、总胆固醇（Total Cholesterol，TC）、三酰甘油（Triglyceride，TG）、游离脂肪酸（Free Fatty Acid，FFA）、肝脏TC、肝脏TG均明显升高（P＜0.01），肝糖原含量降低（P＜0.01）。与模型组相比，罗格列酮组ISI好转（P＜0.01），FPG、FINS、TC、TG、FFA、TG明显降低（P＜0.01，P＜0.05），肝糖原含量明显增加（P＜0.01）。辛开苦降低剂量组及其高剂量组2组FINS、ISI、肝糖原含量均高于模型组（P＜0.05，P＜0.01），TG水平低于模型组（P＜0.05，P＜0.01）；辛开苦降高剂量还能显著降低FPG、TC水平、FFA水平（P＜0.05，P＜0.01）。辛开苦降低剂量组还可显著降低肝脏TG水平（P＜0.05）。肝脏病理显示：正常组小鼠肝脏结构正常，而模型组小鼠肝脏脂肪变性明显。罗格列酮组小鼠肝脏脂肪变性较模型组有所减轻。辛开苦降低剂量组和辛开苦降高剂量组小鼠肝脂肪变性较模型组有明显改善。结论：辛开苦降方可增加KKAy T2 DM小鼠胰岛素敏感性，减轻肝胰岛素抵抗，肝糖原合成增加，从而改善血糖水平，并能降低血及肝脏脂质水平，减轻肝脏脂肪变性，有效保护肝脏组织形态结构。
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黄芪注射液与葛根素注射液联用对2型糖尿病小鼠心脏损害的干预作用
目的:观察黄芪注射液与葛根素注射液合用对糖尿病心脏损害的干预作用.方法:选取60只KKAy雄性小鼠,以高脂饲料饲喂的建立2型糖尿病(T2DM)小鼠模型,将30只C57BL/6J雄性小鼠作为其正常对照组.用高脂饲料饲喂4周后(即12周龄时)把随机血糖≥13.9 mmol/L的小鼠随机分为观察组和模型组,分别注射黄芪注射液与葛根素注射液或等量生理盐水,给药8周、12周及16周后分批次处理小鼠,观察小鼠一般体征,检测其血液生化指标,观察心肌组织形态并运用TUNEL法检测细胞凋亡水平.结果:黄芪注射液与葛根素注射液联用能够改善2型糖尿病小鼠精神不佳,尿量增多,毛发欠光泽,肥胖等各种情况,对给药6周和给药12周糖尿病小鼠能显著降低其空腹血糖及血脂(P<0.05),减少心肌细胞凋亡,改善心肌组织纤维化,但是给药16周效果不明显.结论:黄芪注射液与葛根素注射液联合使用能够使2型糖尿病小鼠的一般状态得到显著改善,对模型小鼠的高血糖和高血脂有降低作用,可抑制心肌细胞凋亡并减轻心脏纤维化.
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益消方对自发性糖尿病模型KKAy小鼠认知功能影响的Morris水迷宫观察
目的:探讨益消方对糖尿病KKAy小鼠学习记忆行为的影响.方法:24只雄性KKAy小鼠随机分为模型组及中药组,12只雄性C57BL/6J小鼠为正常组.中药组予以中药复方益消方灌服,模型组及正常组予灌服等量蒸馏水,在灌胃4周和8周后分别进行Morris水迷宫观察.采用Morris水迷宫图像自动采集和软件分析系统记录逃避潜伏期、游泳轨迹、圆台穿越次数、初始角度等.结果:定位航行试验中,与正常组比较,灌胃4周、8周后模型组逃避潜伏期均明显延长,差异有统计学意义(P<0.05);灌胃8周后,中药组逃避潜伏期在训练第4、5天时与模型组比较明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05).空间探索试验中,灌胃8周后模型组目标象限游泳时间占总时间百分比、圆台穿越次数较4周后有所减少,且与正常组及中药组差距增加,初始角度与正常组比较明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结果显示益消方缩短糖尿病动物模型小鼠逃避潜伏期,增加原圆台穿越次数及目标象限游泳时间.结论:益消方具有一定延缓糖尿病小鼠认知功能障碍发生进程的功效,改善其学习记忆行为.
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糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素信号转导的影响
目的:观察糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素抵抗及胰岛素信号转导途径中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3-K)、葡萄糖转运子4(GluT4)mRNA表达的影响.方法:将SPF级KKAy小鼠40只按血糖值随机分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡咯列酮组,并选C57b1/6J小鼠为正常对照组,连续灌喂给药60 d.60 d后测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),游离脂肪酸(FFA)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并对胰岛进行病理学检查.用实时定量RT-PCR法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中PI3-K及GluT4的mRNA的表达.结果:糖耐康高剂量组的FPG、TNF-α水平较模型组显著降低(P＜0.05),高,低剂量组PI3-K及GluT4mRNA表达较模型组明显升高(P＜0.05或P＜0.01),且糖耐康在一定程度上能够保护胰岛β细胞,延缓β细胞衰竭,对血脂及FFA有降低趋势.结论:通过提高胰岛素信号转导受体后途径中PI3-K的表达,从而改善GluT4的转位是糖耐康改善胰岛素抵抗状态的可能作用机制之一.
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镰形棘豆总黄酮对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和胰岛素抵抗的作用
目的:以糖尿病KKAy小鼠为研究对象,观察镰形棘豆总黄酮对2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素抵抗的作用.方法:将40只雄性SPF级KKAy小鼠随机分为5组,分别为模型组、镰形棘豆总黄酮低、中、高剂量组、阳性药组,每组8只;另选8只C57BL/6J小鼠为正常组.正常组和模型组ig生理盐水,镰形棘豆总黄酮低、中、高剂量组,分别按100,200,400 mg·kg-1·d-1剂量ig,阳性药组ig吡咯列酮10 mg·kg-1·d-1.连续4周.每周监测小鼠体重、空腹血糖和餐后血糖.4周后,眼眶静脉取血,离心取血清;取胰腺组织.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠空腹胰岛素水平,并计算胰岛素分泌指数(ISI),胰腺组织苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察胰岛结构变化.结果:与正常组比较,模型组KKAy小鼠空腹血糖明显升高,餐后2h血糖明显升高,胰岛素水平明显升高,胰岛素敏感指数明显降低(P＜0.05),模型组KKAy小鼠胰腺组织病变较为明显;镰形棘豆总黄酮对降低糖尿病小鼠体重作用不明显,与模型组比较,在ig7,28 d时,空腹血糖明显降低,在ig14d后,餐后2h血糖明显降低(P＜0.05),在治疗28 d后,与模型组比较,镰形棘豆总黄酮高剂量具有促进胰岛素分泌的作用;中剂量组具有增强胰岛素敏感性的作用(P＜0.05),HE染色显示各药物组具有保护胰岛β细胞、延缓胰岛衰竭的作用.结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上具有降低2型糖尿病小鼠血糖,促进胰岛素分泌,改善胰岛素抵抗的作用.
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辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏胰岛素抵抗及IRS-2/PI3K通路的影响
目的:研究辛开苦降方中药对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素抵抗及胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响,探讨其改善肝胰岛素抵抗(IR)的分子机制.方法:将T2DMKKay小鼠按血糖轻重程度分层随机分为4组,即模型组,辛开苦降组、辛开苦降大剂量组、罗格列酮组.正常组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只.正常组及模型组给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液(CMC)灌胃.各组连续灌胃给药4周后取材,采用葡萄糖氧化酶法测血浆葡萄糖(FPG),放射免疫分析法测血浆胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法测定肝组织IRS-2、磷酸化胰岛素受体底物-2(p-IRS-2)、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、胰岛素受体底物-3(IRS-3)、胰岛素受体底物-4(IRS-4)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法测定肝组织PI3K、IRS-2、IRS-3、胰岛素受体(InsR)的mRNA表达水平.结果:与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数明显降低(P＜0.01),FPG、FINS均明显升高(P＜0.01).辛开苦降组及其大剂量组两组FINS、胰岛素敏感指数均高于模型组(P＜0.01,P＜0.05).免疫蛋白质印迹结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显减少(P＜0.01),IRS-3、IRS-4蛋白表达与正常组比较明显增多(P＜0.01).辛开苦降组和辛开苦降大剂量组与模型组相比,小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显增多(P＜0.01,P＜0.05),IRS-3、IRS-4蛋白表达明显减少(P＜0.05),辛开苦降组和辛开苦降大剂量组两组之间无明显统计学差异.实时荧光定量PCR结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝组织PI3-K、IRS-2、IRS-3及InsR mRNA表达均降低(P＜0.01).与模型组相比,辛开苦降组PI3K mRNA表达升高(P＜0.05).结论:辛开苦降方可改善KKay T2DM小鼠的IR,增加胰岛素的敏感性,调节KKay小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、IRS-3、IRS-4蛋白和PI3K mRNA表达水平,提示调整肝脏的IRS2/PI3K通路相关的蛋白表达可能是辛开苦降方改善KKay T2DM小鼠的IR作用靶点,且单纯加大剂量并对相关蛋白及基因表达影响不大.
关键词： 辛开苦降方 2型糖尿病 KKAy小鼠 肝胰岛素抵抗 IRS-2/PI3K通路 -
中药复方糖耐康对2型糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢及肾脏形态学的影响
目的:探讨中药复方糖耐康对2型糖尿病KKAy小鼠血脂代谢及其早期肾脏病理改变的影响.方法:12周龄雄性KKAy小鼠50只按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,另设10只C57BL/6J小、鼠为正常组,模型组和正常组给予0.9％氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃,每2周检测体质量、空腹血糖,每4周测24h尿蛋白定量,8周后处死,检测血生化指标,观察肾脏病理变化,检测肾组织FN mRNA表达.结果:与同龄正常组小鼠比,模型组小鼠体质量显著增加(P＜0.01),各给药组较模型组同期体质量有显著下降(P＜0.05,P＜0.01):模型组较正常组小鼠的空腹血糖(FBG)、血甘油三脂(TG)、血总胆固醇(TC)、血胰岛素(TNS)显著升高(P＜0.01),糖脂代谢紊乱；24h尿蛋白定量、肾重升高(P＜0.05),20周龄模型组小鼠肾小球较正常组增大,细胞外膜基质增加,肾小管管腔扩大,蛋白管型明显,半定量分析肾组织病理损伤评分增大,RT-PCR定量分析肾组织FN mRNA表达显著增加(P＜0.05)；各用药组经缬沙坦、糖耐康治疗后,上述指标均较模型组有明显改善(P＜0.05).结论:糖耐康可调节KKAy小鼠糖脂代谢紊乱,对早期肾脏病理改变有较好的保护作用,抑制FN mRNA沉积改善肾纤维化是其可能的作用机制之一.
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匙羹藤提取物干预KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的实验研究
目的:探讨匙羹藤(GS)改善KKAy小鼠脂肪组织胰岛素抵抗(IR)的作用机制.方法:KKAy小鼠分为模型组(DM)和GS组,C57BL/6J小鼠为正常组(NC),给药8周后测定血清胰岛素(Fins)、胰岛素敏感指数(ISI)、过氧化物酶增殖体受体-γ(PPAR-γ)、PI3 κ-p85、Cb1衔接蛋白(CAP)、葡萄糖转运蛋白4(GluT-4) mRNA水平.结果:与DM比较,FPG、Fins降低,ISI升高,PPAR-γmRNA、PI3κ-p85mRNA、CAPmRNA、GluT-4 mRNA表达量升高.结论:GS可上调脂肪组织PPAR-γ、PI3 κ-p85、CAP、GluT-4mRNA的表达量,改善IR.
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红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究Ⅰ——改善胰岛素抵抗作用
探讨红景天、蛹虫草、大黄配伍(中药复方FF16)对小鼠胰岛素抵抗的治疗作用及其作用机制.结果显示,中药复方FF16具有明显增加机体整体和组织胰岛素敏感性作用；分别使IRF小鼠和KKAy小鼠的受损的胰岛素耐量之AUC降低24.1％,38.5％；升高的血清胰岛素水平下降46.0％,30.4％,HOMA-IR降低52.4％,81.2％；降低的GIR增加了119.3％,202.4％.FFI6使KKAy小鼠全身胰岛素敏感性指数ISWBI增加了1.0倍；肝脏、脂肪和骨骼肌胰岛素依赖的葡萄糖摄取能力分别增强1.5,2.8,2.2倍.此外,FF16抑制基因重组人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)蛋白活性的IC50为0.225 mg·L-1；使IRF小鼠肝脏升高的蛋白PTP1B表达下调了45.8％.结果说明,中药复方FF16具有显著的胰岛素增敏作用,该作用可能与抑制PTP1B活性有关.
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红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究Ⅱ——治疗肥胖症作用
利用高脂饮食诱导的胰岛素抵抗的IRF肥胖小鼠和2型糖尿病KKAy肥胖小鼠模型,观察红景天、蛹虫草、大黄配伍组成的中药复方FF16治疗肥胖症作用并初步探讨其作用机制.结果显示,FF16显著控制IRF小鼠和KKAy小鼠的体重增长；改善KKAy小鼠高TC血症和高TG血症；降低IRF小鼠的血清TC水平、增加血清HDL-C含量、减小脂肪指数.体外酶学实验显示,FF16可明显抑制分子靶点α-葡萄糖苷酶的活性.说明中药组方FF16具有明显降低肥胖小鼠体重、调节脂代谢紊乱等治疗肥胖症的作用,抑制α-葡萄糖苷酶是其作用机制之一.
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胰岛素抵抗糖尿病KKAy小鼠肌肉和肝组织PTEN蛋白表达增强
目的 观察胰岛素抵抗KKAy小鼠胰岛素敏感组织肌肉及肝组织PTEN蛋白的表达,了解PTEN在胰岛素抵抗机制中的作用.方法 实验分为对照组1(C57BL普通饲料喂养组),对照组2(C57BL高脂饲料喂养组),KKAy小鼠组.均尾静脉血测末梢血糖,连续两周随机血糖＞16.7 mmol/L诊断为糖尿病,取等量股四头肌、肝组织进行Western blot检测.结果 与对照组相比,KKAy组股四头肌、肝PTEN蛋白均明显增多(P＜0.01).结论 PTEN可能是一种重要的负性调节因子,调节三磷酸肌醇激酶(PI3Ks)/蛋白激酶B(Akt)所介导的信号传导通路,在胰岛素抵抗的发生、发展中起着重要的作用.
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麦冬多糖MDG-1对糖尿病小鼠糖耐量及肠道菌群的影响
目的:研究不同剂量麦冬多糖(MDG-1)对自发性肥胖型二型糖尿病KKay小鼠糖耐量及肠道菌群的影响.方法:正常对照组为周龄9-10 wk C57bl/6J鼠10只,实验组为KKay糖尿病小鼠26只；小鼠9 wk开始普通饲料喂养至12 wk,随后高脂饲料喂养8 wk.12 wk时测定随机血糖＞13.9mmol/L诊断为糖尿病.小鼠随机分为正常对照组、空白对照组、MDG-1 75、300 mg/kg及罗格列酮组.正常对照组与空白对照组每天灌胃蒸馏水(10 mL/kg),罗格列酮组每天灌胃2 mg/kg.连续治疗8 wk后,观察各组动物的一般情况,测定小鼠0、15、30、60、120 min耐糖血糖值,并对各组小鼠肠道菌群进行培养,统计菌群数量.结果:不同剂量的麦冬多糖MDG-1均可在不同程度上改善KKay小鼠的多饮、多食等症状,高剂量组的效果优于低剂量组.给药8 wk后,MDG-1低、高剂量均可显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖值（P＜0.05）；各模型组的葡萄糖耐量均不同程度受损,MDG-1 300 mg/kg和阳性药罗格列酮组糖耐量均有不同程度的改善（P＜0.05）;糖尿病小鼠肠道内大肠杆菌和链球菌数量显著升高,而乳酸杆菌和双歧杆菌的数量明显下降,MDG-1 300 mg/kg组可显著降低大肠杆菌和链球菌的数量（P＜0.05）,对双歧杆菌的增殖也有显著作用(P＜0.05）.结论:不同剂量的MDG-1可以在不同程度上缓解糖尿病小鼠的糖尿病症状,改善糖耐量,调节肠道菌群平衡.
