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白藜芦醇靶向mTORC2/Rictor抑制HUVECs的增殖迁移及管腔形成
目的 探讨白藜芦醇对腺病毒介导的Rictor基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖、迁移及管腔形成的影响.方法 将PCR扩增得到的目的基因Rictor定向克隆入GV314载体获得重组质粒,经AdMax包装系统与辅助包装质粒在HEK 293T细胞中重组构建Rictor过表达腺病毒载体(Ad-Rictor),不含目的基因的Ad-Null为阴性对照组.分离培养HUVECs后分别用Ad-Rictor及Ad-Null重组腺病毒感染细胞,另设空白对照组及白藜芦醇干预组Ad-Rictor+Res.感染后荧光显微镜及 Western blot 检测重组蛋白表达;CCK8、划痕实验和血管形成实验观察HUVECs增殖、迁移及血管形成能力.结果 重组腺病毒Ad-Rictor及Ad-Null构建成功.与对照组相比,Ad-Rictor感染HUVECs显著上调基因Rictor的表达,提高了HUVECs的增殖活力,迁移和体外管腔形成能力(P<0.05);白藜芦醇干预显著抑制了Rictor过表达情况下HUVECs的增殖、迁移和体外管腔形成(P<0.05).结论 白藜芦醇可以靶向mTORC2/Rictor抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成.
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鸢尾素抑制血小板衍生生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和炎性反应的研究
目的 观察鸢尾素对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移和炎性反应的抑制作用.方法 培养原代大鼠胸主动脉VSMC,经鸢尾素预孵育后再加入PDGF-BB刺激,噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)检测VSMC的增殖和DNA合成,Transwell检测VSMC的迁移,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Westernblot检测VSMC合成分泌白细胞介素(IL)-1β、IL-6、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症细胞因子mRNA和蛋白表达.结果 与对照组比较,经PDGF-BB刺激后,VSMC增殖[(144.84±12.63)％比100.00％,￡=12.300,P =0.000] 、DNA合成[(174.65±14.37)％比100.00％,t=15.580,P=0.000]和迁移[(180.24±17.83)％比100.00％,t=15.590,P=0.000]明显增加,IL-1β (2.05 ±0.26比1.00,t=12.230,P=0.000;0.80 ±0.05比0.29 ±0.06,t=10.820,P=0.000) 、IL-6(2.01 ±0.22比1.00,t=13.980,P =0.000;0.79 ±0.06比0.35 ±0.04,t=11.400,P=0.000) 、MCP-1 (2.05 ±0.24比1.00,t=12.920,P=0.000;0.72 ±0.04比0.30 ±0.07,t =9.140,P =0.000) 、ICAM-1(1.89 ±0.34比1.00,t=7.890,P=0.000;0.81 ±0.02比0.42 ±0.03,t=21.870,P=0.000)和TNF-α (2.36±0.18比1.00,t 23.260,P=0.000;0.76±0.03比0.35 ±0.01,t =21.650,P =0.000) mRNA和蛋白表达明显上调.与PDGF-BB刺激组比较,经鸢尾素预孵育后再加入PDGF-BB刺激,VSMC增殖[(120.64 ±9.73)％,t=5.260,P=0.000]、DNA合成[(146.39±18.24)％,t 3.650,P=0.008]和迁移(138.57±11.65％,t=6.780,P=0.000)明显降低,IL-1β(1.50±0.24,t =4.740,P =0.000;0.59±0.05,t=4.680,P =0.009) 、IL-6(1.52 ±0.30,t =4.000,P =0.004;0.63±0.03,t=4.370,P =0.032) 、MCP-1(1.57±0.44,t=2.870,P=0.026;0.55 ±0.03,t=5.910,P=0.007) 、ICAM-1(1.51±0.23,t 2.800,P=0.042;0.63±0.06,t =5.420,P =0.006)和TNF-α(1.68±0.26,t =6.600,P=0.000;0.57 ±0.08,t=3.910,P=0.019) mRNA和蛋白表达明显下调.结论 鸢尾素可抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移增殖和炎性反应.
