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靶向PLK1 PBD小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型的建立
目的 建立适用于靶向PLK1 PBD小分子抑制剂规模化筛选的荧光偏振高通量筛选模型.方法 以pET-28a-PLK1 PBD质粒转化E.coli Rosetta BL21(DE3),诱导表达并纯化PLK1 PBD蛋白.利用荧光偏振原理,以FITC-Poloboxtide作为分子探针,优选分子探针和PLK1 PBD佳工作浓度,建立适用于PLK1 PBD小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型.同时采用上述建立的荧光偏振筛选模型检测poloxin的抑制活性.结果 成功诱导表达并纯化PLK1 PBD蛋白.选用30 nmol/L分子探针和200 nmol/L PLK1 PBD蛋白建立荧光偏振高通量筛选模型,其Z'因子可达0.74.基于该方法,检测poloxin的抑制活性,其IC50值为(4.27±0.69)μmol/L.结论 成功建立了适用于靶向PLK1 PBD小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型.
关键词： 荧光偏振免疫测定 高通量筛选分析 PLK1 PBD抑制剂 -
以PLK1PBD为靶点小分子抑制剂的筛选及抗肿瘤活性研究
采用荧光偏振高通量筛选的方法进行PLK1 PBD小分子抑制剂的筛选,对筛选出的阳性化合物F083-0063进行体外抗肿瘤活性研究,以期为寻找抗肿瘤药物提供先导化合物.模型筛选获取一个对PLK1 PBD抑制率较高的化合物F083-0063,其在10 μg.mL-1时的抑制率达(99.7± 0.4)％;利用软件Graphpad Prism 5计算IC50为1.9±0.1 μmol.L-1;噻唑蓝比色法(MTT)研究该化合物对不同细胞系增殖的影响,结果显示F083-0063能抑制多种肿瘤细胞系的增殖;流式细胞仪检测发现,其能促进细胞凋亡且能导致细胞G2/M期阻滞;划痕实验测定F083-0063对细胞迁移的影响,结果显示其能抑制HeLa细胞迁移,在20 μmol.L-1时,迁移率低至(37.6± 0.7)％.利用分子连接技术探讨化合物与PLK1 PBD结构域的亲和力,发现F083-0063与PLK1 PBD有较好的亲和性;免疫印迹法(Western blotting)检测显示F083-0063可以引发周期相关蛋白表达的增加.综上所述,化合物F083-0063有明显的抗肿瘤活性,并有望成为靶向PLK1 PBD的抗肿瘤先导化合物.
关键词： 抗肿瘤药 荧光偏振法 PLK1 PBD抑制剂 丝/苏氨酸蛋白激酶 保罗样激酶
