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补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响
目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.
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异钩藤碱对人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药的逆转作用
目的:探讨异钩藤碱对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/DDP耐药的逆转作用及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度异钩藤碱对A549细胞和A549/DDP细胞的增殖抑制效应;MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对A549,A549/DDP细胞增殖的抑制作用及加用异钩藤碱时的变化;流式细胞仪检测钩藤碱对VCR引起细胞凋亡的影响,采用电感耦合等离子质谱法检测细胞内顺铂蓄积浓度.结果:1.5 mg·L-1及更低浓度的异钩藤碱对A549和A549/DDP细胞无明显细胞毒性作用.A549/DDP对VCR,VP-16,ADM和DDP的耐药倍数分别为19.58,11.97,21.74和24.29.加入0.5,1.0和1.5 mg·L-1异钩藤碱后,A549/DDP对VCR,VP-16和DDP的耐药逆转倍数均成倍增加.加入1.5 mg·L-1异钩藤碱后,A549/DDP对上述化疗药物的凋亡率提高更明显.1.5 mg·L-1异钩藤碱可明显提高DDP在A549/DDP细胞内的蓄积.结论:异钩藤碱可以逆转A549/DDP细胞的多药耐药,逆转效果与药物浓度有关,逆转机制可能与增加细胞内化疗药物蓄积和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.
关键词： A549/DDP细胞株 异钩藤碱 多药耐药 逆转 凋亡 -
补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究
目的 从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择佳含药血清的浓度.方法 采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5％和10％的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出佳含药血清浓度,计算出佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数.结果 补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系.5％高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5％中剂量组和5％低剂量组,并与5％空白血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).10％各剂量组对A549/DDP的抑制率与10％空白血清组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).经筛选,10％中剂量含药血清作用48 h为佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降(P＜0.05),对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46.结论 10％中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用.
关键词： MTT法 A549/DDP细胞株 A549细胞株 补中益气汤含药血清 耐药逆转 -
六君子汤含药血清对A549/DDP细胞及E-cadherin和N-cadherin表达的影响
目的 研究六君子汤含药血清对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂(DDP)耐药的作用及其对上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响.方法 采用血清药理学方法制备含药血清,随机将40只SD大鼠分为血清对照组和六君子汤(高、中、低剂量)含药血清组,每日灌胃给药1次,连续5天后提取血清.再用培养液将各组血清稀释成5％和10％浓度作用于A549/DDP细胞株12h、24h、48h,以此筛选出佳浓度及佳作用时间点.MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,计算耐药逆转倍数;免疫细胞化学法和Western blot检测各组细胞中E-eadherin和N-cadherin蛋白的表达.结果 六君子汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系,中剂量10％浓度含药血清作用48h作用较强且细胞毒性低,在此浓度下,TGF-β1诱导的A549/DDP的IC50明显下降(R0.05),对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数为4.12,E-cadherin表达水平上调,N-cadherin的表达水平下调.结论 六君子汤含药血清逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药可能与抑制细胞上皮-间质转化,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.
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补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤的抑瘤作用及MRP蛋白表达影响的研究
目的 探讨补中益气汤对A549/DDP及A549细胞株荷瘤裸鼠移植瘤的的抑瘤作用及对MRP蛋白表达影响.方法 体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗.测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织MRP蛋白的表达.结果 顺铂使A549/DDP移植瘤体积无显著变化(P＞0.05),而A549移植瘤体积显著缩小(P＜0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P＜0.05),抑瘤率均增加(P＜0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加;顺铂上调A549/DDP移植瘤组织中MRP蛋白表达(P＜0.05),下调A549移植瘤组织中MRP蛋白表达(P＜0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤组织中MRP蛋白表达均下调(P＜0.05),随着中药剂量的增加,MRP蛋白水平越来越低.结论 补中益气汤可有效减小移植瘤体积,增加顺铂的抑瘤率,下调MRP蛋白表达,且在顺铂敏感及顺铂耐药的肺癌组织中均有疗效.
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基因工程腺病毒H101逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药性的实验研究
背景及目的:耐药性产生是化疗失败的主要原因之一,克服耐药性的方法之一是使用逆转剂.目前尚无一种理想的、可应用于临床的顺铂(DDP)耐药逆转剂.本研究探讨基因工程腺病毒H101对DDP耐药性的逆转作用及其机制.方法:体外利用人肺腺癌细胞株A549的DDP耐药模型A549/DDP,采用MTT法检测H101对A549/DDP细胞耐药性的逆转作用.用流式细胞仪(FCM)测定细胞多药耐药蛋白1(multidrug resistant protein 1,MRP1)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)及TOPO-Ⅱ蛋白表达量,荧光-考马斯亮蓝法检测细胞内GSH含量,原子吸收法测定细胞内铂浓度.结果:A549/DDP细胞对DDP的耐药指数为14.3.加入H101后,DDP对A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)由352.4 μmol/L降至61.6 μmol/L,逆转倍数为5.7倍.FCM检测结果显示,A549/DDP细胞的GST和TOPO-Ⅱ蛋白水平均较A549细胞高,而两种细胞内均未检测到MRP1的表达,经H101处理后的A549/DDP细胞胞内GST蛋白和TOPO-Ⅱ蛋白水平均明显下降.A549/DDP胞内GSH含量比A549高2倍多;H101感染A549/DDP细胞后,胞内的GSH含量下降,随着H101剂量的增加,胞内GSH含量逐渐下降,达A549细胞内GSH水平.原子吸收法测定细胞内铂含量的结果显示,A549细胞内铂含量是A549/DDP细胞内铂含量的3倍,加入H101后,A549细胞内铂的含量无明显变化,但A549/DDP细胞内铂的含量明显增加.结论:H101能逆转A549/DDP对DDP的耐药性,H101逆转DDP耐药性的机制可能是减少A549/DDP细胞内GSH和TOPOⅡ蛋白的水平,增加了A549/DDP细胞内铂的蓄积.
关键词： 基因工程腺病毒/治疗应用 基因转染 肺肿瘤 A549/DDP细胞株 顺铂/药理学 耐药 -
人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究
背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一.从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点.本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制.方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化.结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用.②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24 h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P＜0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P＜0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P＜0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P＜0.001).④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P＜0.05).结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡.
关键词： 人参单体Rh2 肺肿瘤 A549/DDP细胞株 凋亡 -
CIK细胞对人肺腺癌A549／DD P耐药细胞株的抗增殖及诱导凋亡形态学研究
目的：研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK ）对A549/DDP肺癌耐药细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用。方法应用细胞计数法设计细胞浓度，通过相差显微镜下观察CIK细胞对A549/DDP肺癌耐药细胞株形态学影响。结果随着CIK细胞与肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长，抑制率明显增强，CIK细胞作用于肺癌细胞24 h后，形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死。结论体外制备的CIK细胞对肺癌耐药细胞株A549/DDP具有抑制增殖和促进凋亡作用。
关键词： 肺癌 CIK细胞 A549/DDP细胞株 抗肿瘤 细胞凋亡 -
榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制
目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制.方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂(cisplatin,DDP)合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123(rhodamine-123,Rh123)蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响.结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应.单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63.同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上p-gP的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A549/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达.结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关.
关键词： 肺癌 耐药性 榄香烯 P糖蛋白 A549/DDP细胞株 -
榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药
目的：探讨榄香烯乳（ elemene，ELE）逆转人肺腺癌耐顺铂（ cisplatin，DDP）细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法：采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧（ reactive oxygen species，ROS）水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/（ GSSG﹢GSH）比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果：不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长，呈时间-剂量依赖性效应，联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降，ROS浓度增加，GSH/（ GSSG﹢GSH）比值降低，上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达，下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论：榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜，活化胞内氧化还原体系，诱导线粒体凋亡路径有关。
关键词： 肺癌 榄香烯 线粒体 凋亡 A549/DDP细胞株
