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补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响
目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.
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胃癌组织Ki-67和pAKT表达相关性的研究
目的:探讨细胞核增殖指数(Ki-67)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAKT)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移和复发等生物学行为的关系.方法:收集有完整临床病理资料、经手术及术后病理学确诊的60例胃癌患者作为观察组,并以20例癌旁异型增生胃黏膜组织和20例活检正常胃黏膜组织作为对照组,应用免疫组织化学SP法检测Ki-67、pAKT的表达,用CD31标记血管计数MVD,比较:1)Ki-67、pAKT的表达在胃癌、癌旁组织和正常胃黏膜组织中的表达差异；2)与肿瘤分化程度的关系；3)与癌组织浸润深度和转移的关系.结果:观察组中Ki.67(73.3％,44/60)、pAKT(75.0％,48/64)的表达明显高于对照组癌旁异型组织(35.0％,7/20)和正常黏膜组织(10.0％,2/20),差异有统计学意义,x2=9.538,P=0.002;x2 =24.621,P=0.000.Ki-67、pAKT在高级别与低级别胃癌组织中的表达差异有统计学意义,P＜0.05.Ki-67、pAKT在进展期胃癌显著上调,与早期癌表达差异有统计学意义,P＜0.05.Ki-67、pAKT与癌组织淋巴结转移有关,P＜0.05.结论:Ki-67、pAKT异常表达与胃癌的发生、发展密切相关,在胃癌组织中表达上调,促进了肿瘤形成、发展、侵袭和转移,Ki-67、pAKT检测对于判断胃癌生物学行为有一定的价值,可作为临床参考指标.
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FAK及pAKT在乳腺癌中的表达及预后分析
目的 探讨黏着斑激酶(FAK)及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在乳腺癌组织中的表达情况及临床价值.方法 收集从1997至2008年于我院行乳腺癌根治手术的271例有完整存档蜡块标本,采用组织微阵列芯片和免疫组化SP法检测FAK和p-AKT在乳腺癌组织中的表达,并对两者的表达情况及其与乳腺癌临床病理因素和患者生存情况的关系进行分析.结果 FAK、p-AKT的高表达率分别为53.9%(146/271)、36.2%(98/271),两者的表达水平呈正相关(r=0.397,P<0.01).FAK/pAKT同时均高表达的比率为29.2%(79/271).FAK高表达与孕激素受体(PR)呈负相关(P=0.046),pAKT高表达与组织学分级(P=0.024)、淋巴结转移(P=0.016)呈正相关,FAK与pAKT共同高表达的患者更倾向于出现淋巴结转移、骨/软组织转移(P=0.019,P=0.022).FAK高表达人群中,p-AKT高表达者的总生存期(OS)明显短于低表达者(P=0.047).单独分析FAK及p-AKT表达与总体人群预后无关,将两者联合分析后,FAK/pAKT均高表达患者的OS明显缩短(P=0.027).亚组分析显示:HER2阳性患者,FAK/pAKT高表达者的OS缩短(P=0.015),FAK/pAKT高表达是HER2阳性乳腺癌的独立预后因素(HR=3.352,P=0.021).结论 在乳腺癌组织中FAK和p-AKT两者密切相关,FAK/pAKT联合检测能够预测乳腺癌患者的预后,并能够成为HER2阳性乳腺癌的独立预后指标.
关键词： 乳腺癌 黏着斑激酶 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 预后 -
川芎含药血清对大鼠肝星状细胞大麻素受体1相关信号通路的影响
目的 观察川芎含药血清对血小板源生长因子(PDGF-BB)活化的大鼠肝星状细胞(HSCs)大麻素受体1(CB1)、黏着斑激酶(FAK)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法 制备川芎含药血清,MTT法检测川芎含药血清对肝星状细胞增殖情况,Western blot法分析肝星状细胞CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,PDGF-BB作用24h能刺激HSCs增殖,上调CB1、FAK、p-Akt蛋白的表达;川芎含药血清、秋水仙碱及大麻素受体1抑制剂AM251均能明显抑制上述效应;且加入AM251后,川芎含药血清对上述效应的抑制效果增强,且作用呈剂量依赖性.结论 川芎含药血清可能通过大麻素相关信号通路抑制HSCs增殖,从而发挥防治肝纤维化的作用.
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基于p-Akt信号评价加减薯蓣丸对脑缺血大鼠海马神经元损伤的保护作用
目的:观察补益精血方“加减薯蓣丸”对脑缺血大鼠海马神经元及磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-serine-threonine kinase,p-Akt)的影响.方法:40只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和中药组,其中模型组、中药组采用改良双侧颈总动脉永久阻断法制作脑缺血大鼠模型,假手术组不予结扎颈总动脉.中药组予加减薯蓣丸10g·kg-1 ·d-1灌胃,其余3组用等量0.9％ NaCl溶液灌胃.灌胃6周后取材,HE染色观察海马组织形态学变化,免疫荧光法检测神经元核心抗原(NeuN)表达,Western blot法检测p-Akt表达.结果:HE染色结果显示,模型组大鼠海马细胞密度减少,锥体细胞层变薄,细胞间隙大,排列疏松,细胞核萎缩;中药组大鼠海马细胞密度增加,锥体细胞层变厚,细胞间隙减小,排列紧密,细胞核萎缩减少.模型组大鼠海马组织p-Akt表达较假手术组明显下降(P＜0.05),NenN表达较假手术组明显增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组海马组织NenN及p-Akt表达均明显增加(P＜0.05).结论:加减薯蓣丸可促进脑缺血大鼠海马组织p-Akt及NeuN表达,从而可能促进脑缺血引起的大鼠海马神经损伤修复,抑制神经元凋亡.
关键词： 脑缺血 加减薯蓣丸 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 海马 神经元核心抗原 -
pAKT、HIF-1α在胃癌中的表达及与血管生成的关系
目的:研究磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAKT)、缺氧诱导因1 α(HIF-1 α)在胃癌中的表达及AKT/HIF-1α途径与胃癌的发生和血管生成的相关性.方法:免疫组化法检测64例胃癌及26例癌旁正常组织中pAKT蛋白和HIF-1α的表达,以CD34标记血管内皮,计数微血管密度(MVD).结果:64例胃癌组织中pAKT呈阳性表达48例(75%),HIF-1α阳性表达42例(65.6%),均显著高于癌旁组织(χ2分别为26.936、15.950,P＜0.05);pAKT、HIF-1α表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移显著相关(P＜0.05).胃癌及癌旁组织MVD分别为43.54-12.7、26.2±12.3,P＜0.05(t=5.614);pAKT、HIF-1α均阳性患者MVD显著多于pAKT、HIF-1α均阴性者(仁3.947,P＜0.05),pAKT与HIF-1α的表达呈正相关(Pearson r=0.583,P＜0.05).结论:pAKT蛋白过表达于胃癌组织,AKT蛋白的磷酸化可增强胃癌细胞的侵袭能力,促进胃癌的转移,又可以通过调节HIF-1α的表达促进胃癌新生血管的生成.同时检测胃癌组织中pAKT、HIF-1α和MVD的表达状态,对于胃癌的早期诊断和治疗有重要的指导价值.
关键词： 缺氧诱导因子1α 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 胃肿瘤 微血管密度
