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小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关蛋白表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高浓度分别为0.1、1.0、2.5mg/mL用于实验,Western Blot法检测B16细胞中TYR、TRP-1、TRP-2蛋白的表达.结果:与对照组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR、TRP-2蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);小柴胡汤中、高浓度组较对照组降低TRP-1活性(P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1、TRP-2的基因表达、蛋白合成三方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响
目的 研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2) mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达.结果 90％高良姜素浓度为1.0～10.0 μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P＜0.01),而在浓度为20.0 μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P＞0.05),浓度为0.5～20.0 μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P＜0.05、0.01),浓度为1.0～20 μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P＜0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99％高良姜素浓度在0.5～20.0 μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P＜0.01),而对黑素合成无促进作用(P＞0.05).90％高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0 μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P＜0.05);99％高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响.结论 99％高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90％高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90％高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的.
关键词： 高良姜素 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
葡萄籽原花青素抑制小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的影响
目的:研究葡萄籽原花青素对小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用,并对其机理进行初步探究.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测小鼠B16黑色素瘤细胞增值率;左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活;NaOH裂解法测定黑色素合成;分别采用RT-PCR法和Western-blotting法检测B16-F0细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达水平.结果:葡萄籽原花青素显著抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,且与浓度和作用时间相关;12.5～200 μg/ml浓度范围的葡萄籽原花青素显著抑制细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成.当葡萄籽原花青素浓度为200 μg/ml作用时间为48 h时,对B16-F0细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制效果佳.此外,与对照组相比,经浓度为100 μg/ml和200 μg/ml,作用时间为48 h的葡萄籽原花青素处理,B16-F0细胞内TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低.结论:葡萄籽原花青素抑制B16黑色素瘤细胞的增殖及黑色素的合成,其机制可能是通过抑制TYR、TRP-1、TRP-2的表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的.
关键词： 葡萄籽原花青素 酪氨酸酶 黑色素生成 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达
目的克隆酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)编码基因,表达TRP-2蛋白.方法从培养的人黑素细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,通过PCR方法扩增TRP-2编码基因,克隆至pUC19载体并测序,再亚克隆至谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达TRP-2/GST融合蛋白.结果从培养的人黑素细胞中扩增出编码TRP-2的cDNA,序列测定证实与文献报道的序列一致;成功构建了GST融合表达载体pGEX-4T-1/TRP-2;表达了TRP-2/GST融合蛋白.结论成功克隆了人TRP-2基因,构建了GST融合表达载体并表达了TRP-2/GST融合蛋白.
关键词： 酪氨酸酶相关蛋白-2 克隆 融合表达 白癜风
