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小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关蛋白表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高浓度分别为0.1、1.0、2.5mg/mL用于实验,Western Blot法检测B16细胞中TYR、TRP-1、TRP-2蛋白的表达.结果:与对照组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR、TRP-2蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);小柴胡汤中、高浓度组较对照组降低TRP-1活性(P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1、TRP-2的基因表达、蛋白合成三方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
HBV感染者血清抗TRP-1抗体与HSP70检测及相关性分析
目的 检测HBV感染者血清抗TRP-1抗体及HSP70,并对二者的相关性进行分析.方法 选取HBV感染组血清标本88例,其中大三阳组28例,小三阳组60例;抗体阳性组标本64例,其中既往感染组32例,疫苗接种组32例;全阴性对照组64例.用ELISA法检测所有标本抗TRP-1抗体及HSP70表达水平,对各组检测结果进行统计并分析两者的相关性.结果 大三阳组、小三阳组、既往感染组、疫苗接种组、全阴性对照组血清标本中抗TRP-1抗体的OD值依次为2.071±0.574、1.855±0.873、0.166±0.068、0.220±0.048和0.260±0.034,抗TRP-1抗体阳性率分别为92.86％(26/28)、83.33％(50/60)、0％(0/32)、0％ (0/32)和0％ (0/64).HSP70检测的OD值分别为2.135±0.456、1.816±0.874、0.165±0.073、0.166±0.042和0.206±0.033,高水平的HSP70占有率分别为100％(28/28)、83.33％(50/60)、0％(0/32)、0％(0/32)和0％ (0/64).经比较HBV感染组抗TRP-1抗体与HSP70表达水平显著高于抗体组及全阴性对照组(P＜0.01).高水平的抗TRP-1抗体与HSP70表达水平呈正相关(r=0.926,P＜0.01).抗体组与全阴性对照组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大部分HBV感染者体内同时存在高水平抗TRP-1抗体及HSP70,两者呈正相关,可能是该类患者黑素细胞遭受破坏的早期标志,也是继发白癜风的重要原因.
关键词： 乙型肝炎病毒 酪氨酸酶相关蛋白-1 自身抗体 热休克蛋白70 白癜风 -
普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗TRP-1抗体的检测及其临床意义分析
目的 检测普通及合并白癜风的HBV感染者血清抗酪氨酸酶相关蛋白-1自身抗体(autoantibodies to tyrosinaserelated protein-1,a-TRP-1)水平并分析其临床意义.方法 选取白癜风患者126例(其中合并HBV感染8例,合并a-TP0、a-TG阳性34例,其他白癜风病84例);无白癜风病史的普通HBV感染者84例(HbsAg、HbeAg、HbcAb阳性24例,HbsAg、HbeAb、HbcAb阳性60例);乙肝抗体阳性对照者96例(HbsAb、HbeAb、HbcAb阳性48例,HbsAb阳性48例);乙肝五项全阴性的健康对照者96例.用ELISA法和细胞免疫荧光法检测所有标本a-TRP-1表达水平,并对结果进行统计分析.结果 白癜风组a-TRP-1总阳性率为6.3％ (8/126),其中合并HBV感染者、合并a-TPO及a-TG阳性者、其他白癜风患者a-TRP-1浓度为分别为948.2±68.3 U/mL、36.1±0.1U/mL、54.3±12.8U/mL,各组阳性率分别为100％ (8/8)、0％ (0/34)、0％(0/84);健康对照组为46.9±0.1U/mL,阳性率为0％(0/96).白癜风组中合并HBV感染者与健康对照组抗体浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.01),而a-TPO、a-TG阳性者、其他白癜风患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).普通HBV感染组中,HbsAg、HbeAg、HbcAb阳性者与HbsAg、HbeAb、HbcAb阳性者a-TRP-1浓度分别为868.7±161.4U/mL、756.7±157.5U/mL,阳性率分别为91.7％ (22/24)、85.0％ (51/60),与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);乙肝抗体阳性对照组中HbsAb、HbeAb、HbcAb阳性者与HbsAb阳性者分别为26.8±0.1U/mL、33.3±0.1U/mL,阳性率分别为0％ (0/48)、0％ (0/48),与健康对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫荧光法检测结果显示,ELISA法检测的a-TRP-1抗体阳性血清与黑素细胞培养固定物反应后,在胞浆和胞膜处发出明亮荧光,荧光强度+++～++++,合并a-TPO、a-TG阳性及部分其他白癜风患者血清在胞膜处也有荧光,荧光强度约++,健康对照血清荧光暗淡或无荧光.结论 a-TRP-1抗体的高表达与HBV感染有密切关系,该抗体应该不是大部分白癜风患者具有代表性的血清标志物,在大部分没有白癜风的普通HBV感染者体内也可高水平存在,这可能是该类患者继发白癜风的预兆和重要原因.
关键词： 乙肝病毒 酪氨酸酶相关蛋白-1 自身抗体 白癜风 -
不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响
目的 研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2) mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达.结果 90％高良姜素浓度为1.0～10.0 μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P＜0.01),而在浓度为20.0 μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P＞0.05),浓度为0.5～20.0 μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P＜0.05、0.01),浓度为1.0～20 μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P＜0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99％高良姜素浓度在0.5～20.0 μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P＜0.01),而对黑素合成无促进作用(P＞0.05).90％高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0 μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P＜0.05);99％高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响.结论 99％高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90％高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90％高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的.
关键词： 高良姜素 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
他卡西醇对人黑素细胞生物学性状的影响
目的:观察他卡西醇对体外培养的正常人黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(TYR)mRNA表达、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)mRNA表达的影响,探讨他卡西醇治疗白癜风的机制.方法:体外黑素细胞培养,给予不同浓度他卡西醇(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)处理,用MTT法测定细胞增殖,碱裂解法测定黑素合成,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,半定量RT-PCR法检测TYR、TRP-1 mRNA的表达.结果:10-8 mol/L他卡西醇能刺激黑素细胞增殖,10-8、10-9 mol/L能促进黑素合成,10-9～10-6 mol/L的他卡西醇能显著增强正常人黑素细胞酪氨酸酶活性并上调TYR、TRP-1mRNA的表达.结论:他卡西醇可促进黑素细胞增殖,并提示该药物可能通过上调酪氨酸酶家族中关键基因TYR、TRP-1mRNA的表达来提高酪氨酸酶活性,终增加黑素合成.
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葡萄籽原花青素抑制小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的影响
目的:研究葡萄籽原花青素对小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用,并对其机理进行初步探究.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测小鼠B16黑色素瘤细胞增值率;左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活;NaOH裂解法测定黑色素合成;分别采用RT-PCR法和Western-blotting法检测B16-F0细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达水平.结果:葡萄籽原花青素显著抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,且与浓度和作用时间相关;12.5～200 μg/ml浓度范围的葡萄籽原花青素显著抑制细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成.当葡萄籽原花青素浓度为200 μg/ml作用时间为48 h时,对B16-F0细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制效果佳.此外,与对照组相比,经浓度为100 μg/ml和200 μg/ml,作用时间为48 h的葡萄籽原花青素处理,B16-F0细胞内TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低.结论:葡萄籽原花青素抑制B16黑色素瘤细胞的增殖及黑色素的合成,其机制可能是通过抑制TYR、TRP-1、TRP-2的表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的.
关键词： 葡萄籽原花青素 酪氨酸酶 黑色素生成 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
抗酪氨酸酶相关蛋白-1B细胞表位区多克隆抗体的制备及鉴定
目的: 制备多克隆抗体并初步用于TRP-1抗原表位区的研究, 为白癜风、恶性黑素瘤的免疫治疗提供实验依据.方法: 在大肠杆菌中表达PRSETA/TRP-1融合蛋白, 用所获得的蛋白免疫新西兰白兔得到多克隆抗体, 并用ELISA、Western-blot方法进行此抗体的鉴定.结果: ①表达了PRSETA/TRP-1融合蛋白; ②制备了抗TRP-1 B细胞表位区的多克隆抗体; ③并用多克隆抗体检测了毕赤酵母表达的6His-TRP1蛋白, 证实此抗体效价高、特异性强.结论: 此抗体可用于TRP-1 B细胞表位肽段的进一步研究.
关键词： 酪氨酸酶相关蛋白-1 B细胞表位区 抗体 -
TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究
目的为进一步探索酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)人源B细胞表位,利用甲醇营养型酵母Pichia pastoris表达系统表达TRP-1的B细胞表位区.方法将本实验室已构建好的质粒pUC19/TRP-1进行双酶切,将目的片段亚克隆至带有6His标签的pRSETA载体,将6His融合的TRP-1整体PCR扩增出来,克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上,构建成重组质粒pPIC3.5K/6His-TRP1.该质粒转化酵母菌GS115,经G418筛选得到高拷贝转化子.转化菌体经Mut表型鉴定后,用含0.5%甲醇的培养基诱导表达,表达产物利用Ni-NTA agarose柱通过金属螯合亲和层析进行纯化后,测定其生物学活性.结果通过4天的诱导,该系统成功表达了6His-TRP1蛋白,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为18 kD,纯度可达96%.Western blotting及ELISA实验证实,表达产物具有良好的抗原性和特异性.生物学活性检测证实其具有结合白癜风病人IgG的能力.结论在 Pichia pastoris 表达系统中,获得了具有生物学活性的可溶性重组TRP-1的B细胞表位肽段,为深入研究TRP-1人源表位及白癜风的发病机制、免疫治疗及恶性黑素瘤的免疫治疗奠定了基础.
关键词： 酪氨酸酶相关蛋白-1 B细胞表位 毕赤酵母
