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小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关蛋白表达的影响
目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高浓度分别为0.1、1.0、2.5mg/mL用于实验,Western Blot法检测B16细胞中TYR、TRP-1、TRP-2蛋白的表达.结果:与对照组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR、TRP-2蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);小柴胡汤中、高浓度组较对照组降低TRP-1活性(P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1、TRP-2的基因表达、蛋白合成三方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.
关键词： 小柴胡汤 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
补骨脂对A375人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响
目的 探讨含补骨脂大鼠血清对A375细胞增殖及合成黑素功能的影响.方法 体外培养A375人黑素瘤细胞,于对数生长期添加不同浓度含补骨脂大鼠血清,分别采用MTT法和NaOH法检测细胞增殖及合成黑素的情况.结果 补骨脂高、中、低剂量含药血清组较空白血清组有明显促增殖作用,在20%的添加浓度时,高、中、低3个剂量含药血清组随着剂量的增加,黑素含量也明显升高(P＜0.01).结论 补骨脂含药血清有促进A375黑素瘤细胞增殖作用,并使A375人黑素瘤细胞合成黑素增加.
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中药调控酪氨酸酶活性的现状分析
酪氨酸酶是黑素生成途径中的主要限速酶[1],体现在酪氨酸生成多巴和多巴醌的过程均需酪氨酸酶的参与.近年来,色素性皮肤病防治的研究热点趋向于中药对酪氨酸酶的抑制或激活作用,并有望通过这一途径取得突破性的进展.现对目前国内外有关中药调控酪氨酸酶活性的实验报道分析如下.1 酪氨酸酶与色素性皮肤病色素性皮肤病可分为色素减退和色素增加两大类,分别表现为皮肤颜色变白和变黑.白癜风是常见的色素减退性皮肤病[2],发病率为0.5%～2%[3],发病原因复杂.而其发病机制则是由于人体皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶的活性减低或消失,导致黑素体生成的进行性减少或消失而引起的局限性或泛发性脱色素病变[4].补骨脂素是目前国内外治疗白癜风的有效药物之一[2],用药后能增强紫外线的作用,使酪氨酸酶活性增加,从而增加黑素合成.
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N-乙酰氨基葡萄糖对小鼠B16黑素瘤细胞凋亡的影响
目的 研究N-乙酰氨基葡萄糖对体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞增殖和凋亡、酪氨酸酶活性及黑素生成的影响.方法 采用MTT法,流式细胞仪技术和投射电镜方法测定N-乙酰氨基葡萄糖对培养的小鼠B16黑素瘤细胞的增殖抑制作用和细胞的凋亡,体外氧化DOPA反应方法测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素生成量.结果 25mM、50mM和100mMN-乙酰氨基葡萄糖明显抑制B16黑素瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡并抑制黑素生成,50mM和100mM N-乙酰氨基葡萄糖明显抑制酪氨酸酶活性,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 N-乙酰氨基葡萄糖抑制培养的小鼠B16黑素瘤细胞的黑素生成,可能具有开发成为美白产品的前景.
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血清药理学方法研究复方中药对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响
目的运用血清药理学方法研究复方中药白斑一号对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响.方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,运用血清药理学、细胞学的方法,测定药物对B16黑素瘤细胞增殖情况,对酪氨酸酶活性调节作用及黑素含量的影响.结果复方中药白斑一号能促进黑素合成和激活酪氨酸酶,从而阐明了该方在白癜风治疗中的机制.
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复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响
目的 研究复方木尼孜其颗粒对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 培养小鼠B16黑素瘤细胞,采用MTT法测定不同浓度复方木尼孜其颗粒对细胞增殖的影响,采用L-DOPA氧化法测定其对细胞酪氨酸酶活性的影响,采用NaOH裂解法检测细胞黑素含量.结果 复方木尼孜其颗粒高剂量组能明显抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,但是对酪氨酸酶活性无影响.结论 复方木尼孜其颗粒能抑制小鼠B16黑素瘤细胞黑素的合成,在治疗色素性皮肤病中有一定前景.
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白细胞介素-17对人黑素细胞合成黑素功能的影响
目的 研究细胞因子白细胞介素(IL)-17对体外培养的人黑素细胞合成黑素功能的影响.方法 不同浓度的细胞因子IL-17A作用于体外培养的人黑素细胞48 h,用L-DOPA法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性,NaOH溶解法检测黑素合成量.荧光定量PCR检测高浓度IL-17A对黑素细胞酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1和MITF等基因mRNA表达的影响,Annexin V/PI双色标记法结合流式细胞术检测高浓度IL-17A诱导黑素细胞凋亡的比例.结果 不同浓度的细胞因子IL-17A对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素的合成具有一定的抑制作用.高浓度的IL-17A可抑制酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1和MITF基因mRNA的表达,但无明显诱导黑素细胞凋亡的作用.结论 IL-17可通过抑制黑素合成关键基因mRNA的表达而在一定程度上抑制黑素细胞合成黑素,可能参与了白癜风黑素细胞的损伤.但因其无直接诱导黑素细胞凋亡的作用,推测并非是导致白癜风黑素细胞丢失的主要原因.
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疏肝活血中药复方对B16小鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响
目的探讨疏肝活血中药复方治疗黄褐斑的作用机制.方法以系列浓度的疏肝活血中药复方水煎剂作用于体外培养的B16小鼠黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸活性、黑素含量和细胞增殖率,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果疏肝活血中药复方水煎剂能剂量依赖性抑制体外培养的B16小鼠瘤细胞酪氨酸活性和黑素合成,抑制细胞增殖,但无细胞凋亡发生.结论疏肝活血中药复方可直接作用于黑素细胞,抑制细胞黑素合成,但无细胞毒作用,可用于治疗黄褐斑.
关键词： B16小鼠黑素瘤细胞 黑素合成 黄褐斑 疏肝活血中药汤剂 -
墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响
目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶-酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因[TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA]表达的影响.方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数.培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达.结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P＜0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P＜0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2 mRNA的表达无明显作用.结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景.
关键词： 墨旱莲 白癜风 豚鼠 小鼠B16黑素瘤细胞 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白1/2 -
积雪草甙对酪氨酸酶活性的抑制作用及对Cloudman S91黑素瘤细胞黑素合成的影响
目的探讨积雪草甙外用脱色素的作用机制.方法体外观察积雪草甙对蘑菇酪氨酸酶活性的作用并进行酶促反应动力学分析.进一步以系列浓度的积雪草甙作用于体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞,测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率.结果积雪草甙能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性,酶促动力学分析提示积雪草甙为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂.进一步研究发现,积雪草甙能抑制体外培养的Cloudman S91黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成,但对细胞增殖无明显影响.与氢醌相比,积雪草甙抑制酪氨酸酶活性低于相同浓度的氢醌.结论积雪草甙可直接作用于黑素细胞,抑制黑素合成,是一种无细胞毒性的皮肤脱色剂.
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驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素的分离及其对人A375黑素瘤细胞黑素合成作用的影响
目的 分离纯化驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素,初步探讨这两种化合物对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成作用的影响.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化紫铆素、紫铆花素;分别采用MTT法、酶学法及NaOH法测定这两种化合物对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.结果 分离得到化合物紫铆素、紫铆花素,在0.50 ～10.00 μg· mL-1内紫铆素、紫铆花素促进A375细胞增殖,且紫铆花素促增殖作用强于紫铆素(P＜0.05);在0.10～1.00 μg·mL-1内两种化合物均上调酪氨酸酶活性;在0.50～5.00μg· mL-1内,紫铆花素促进黑素合成,紫铆素抑制黑素合成.结论 紫铆素、紫铆花素可能是驱虫斑鸠菊的药效成分;紫铆花素促进A375细胞的增殖,且使A375细胞黑素合成增加,紫铆素轻度抑制黑素合成.
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Rab23分子对中波紫外线诱导人黑素细胞系PIG1细胞黑素合成的调控效应
目的 探究Rab23是否参与调控中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导的黑素细胞黑素合成.方法 分别用25 mJ/cm2、50 mJ/cm2、100 mJ/cm2 UVB照射人黑素细胞系PIG1细胞,Western印迹检测Rab23及小眼畸形相关转录因子(micro-phthalmia-associated transcription factor,MITF)的蛋白表达水平.用50 mJ/cm2 UVB照射正常人表皮黑素细胞(PIG1)后,分别于0.5 h、1h、2h、6h、12 h提取细胞蛋白,Western印迹检测Rab23及黑素合成相关蛋白MITF、gp100的表达水平.在PIG1细胞中构建Rab23的RNA干扰细胞系(siRNA),使用50 mJ/cm2 UVB处理细胞,继续培养6h后采用Western印迹检测黑素合成相关蛋白MITF、gp100的表达水平.结果 Rab23及MITF表达量随UVB剂量增大而增大;50 mJ/cm2 UVB照射黑素细胞,培养时间越长,Rab23表达水平越高,MITF和gp100表达水平也越高;使用50 mJ/cm2 UVB照射Rab23的RNA干扰细胞系继续培养6h后,细胞中的MITF和gp100表达水平较Rab23正常表达组明显降低.结论 UVB可剂量和时间依赖性上调Rab23及黑素合成相关蛋白表达水平,下调Rab23表达可降低UVB诱导的MITF和gpl00表达.
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阿魏酸调节C-KIT/MITF蛋白表达影响黑素生成的实验研究
目的 探讨不同浓度阿魏酸对UVB诱导的A375细胞黑素生成的影响及其作用机制.方法 常规体外培养A375细胞,分为空白组、模型组、阿魏酸低浓度(10 μmol/L)组、阿魏酸高浓度(100 μmol/L)组和阳性对照组,除空白组外,各组均以UVB 20 mJ/cm2照射,阿魏酸高低浓度组加含阿魏酸的培养液、阳性对照组加入含熊果苷的培养液作用24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;采用多巴氧化法研究酪氨酸酶活性的变化;比色法测定黑素含量,免疫印迹法测定C-KIT和MITF蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组细胞酪氨酸酶活性和黑素含量明显增加,阿魏酸低、高浓度组和阳性对照组均可抑制UVB诱导的A375细胞酪氨酸酶活性增高和黑素生成,其机制可能是通过下调C-KIT和MITF蛋白表达而实现的.结论 高浓度阿魏酸可明显下调C-KIT/MITF蛋白表达,进而抑制酪氨酸酶活性和黑素生成.
关键词： 阿魏酸 C-KIT/MITF 黑变病 黑素合成 -
马拉色菌对角质形成细胞分泌黑素合成相关细胞因子的影响
目的 探讨引起花斑癣不同临床色素表现的马拉色菌与角质形成细胞共培养,导致与黑素合成相关的细胞因子的变化.方法 MTT法筛选不同比例的马拉色菌对角质形成细胞增殖率的影响;用色沉和色减区分离的马拉色菌与角质形成细胞共培养,在不同时间段收集上清液,ELISA法测定碱性成纤维细胞因子(b-FGF)、内皮素-1 (ET-1)、神经生长因子-β(NGF-β)、白介素-1α(IL-1α)、白介素- 6(IL- 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干细胞因子(SCF)的动态变化.结果 角质形成细胞与马拉色菌在1∶10比例以下,角质形成细胞的生长状况不受马拉色菌的影响(P＞0.05).当比例提高至1∶20以上时,角质形成细胞的生长受到显著抑制(P＜0.01).马拉色菌刺激角质形成细胞分泌IL-1α、IL- 6、TNF-α、ET-1增加(P＜0.01).未检测到b-FGF、NGF-β和SCF的产生(P＞0.05).色沉区马拉色菌刺激产生的ET-1显著高于色减区(P＜0.01).结论 马拉色菌刺激角质形成细胞分泌黑素合成相关因子的能力不同.ET-1在花斑癣色素沉着中可能起了一定作用.
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黄褐斑的治疗
黄褐斑也称妊娠斑、肝斑等,中青年女性多见,好发于面颊、前额和上唇部等,呈不规则的棕色或浅灰棕色的色素沉着,日晒后加重.由于黄褐斑具有顽固和复发的特点,故其治疗较困难.治疗的目的通常包括在发生副作用可能性小的条件下,减轻复发的程度,减少受累面积,改善美容上的缺陷并缩短清除所需的时间[1].治疗原则包括避免紫外线照射、抑制黑素细胞活性或黑素合成、破坏清除黑色素小体[2].
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皮肤美白剂的作用原理及其存在的卫生问题
近年来,美白化妆品的种类和数量在不断的增加,人类使用各种天然的、合成的物质美白皮肤,其中包括以涂盖而达到美白效果的化妆品和减少皮肤色素沉着的化妆品.随着社会的发展,人类更加追求皮肤的自然美白,不愿皮肤被涂上厚厚的化妆品,这就为抑制黑素合成,降低肤色,进而达到皮肤美白效果的各种增白剂提供了广阔的发展前景,使这类化妆品的生产和使用不断增加,但它在满足人类追求皮肤美白的同时,也对人体皮肤或全身产生了一些不良影响.
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日本刺参胶原肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响
目的:研究不同分子量日本刺参胶原肽A1(6 000U＜Mr＜10 000U)、A2(Mr＜6 000U)对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成、酪氨酸酶活性及酪氨酸酶基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶mRNA表达.结果:不同分子量日本刺参胶原肽均能显著促进B16细胞增殖,抑制B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性,下调酪氨酸酶mRNA表达,且剂量效应关系明显.结论:不同分子量日本刺参胶原肽均具有显著抑制B16黑素瘤细胞黑色合成的作用.其中,A1的抑制效果较A2显著.
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不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响
目的 研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2) mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达.结果 90％高良姜素浓度为1.0～10.0 μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P＜0.01),而在浓度为20.0 μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P＞0.05),浓度为0.5～20.0 μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P＜0.05、0.01),浓度为1.0～20 μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P＜0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99％高良姜素浓度在0.5～20.0 μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P＜0.01),而对黑素合成无促进作用(P＞0.05).90％高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0 μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P＜0.05);99％高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响.结论 99％高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90％高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90％高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的.
关键词： 高良姜素 黑素合成 酪氨酸酶 酪氨酸酶相关蛋白-1 酪氨酸酶相关蛋白-2 -
滋补肝肾方含药血清对B16黑素细胞活性黑素含量及cAMP水平的影响
目的:通过对含滋补肝肾中药大鼠血清对黑素细胞(B16)活性、黑素含量和cAMP水平影响的研究,探讨滋补肝肾方治疗白癜风的机制.方法:体外培养小鼠B16细胞,于对数生长期加不同浓度含滋补肝肾中药的大鼠血清培养后,分别采用MTT法、NaOH法和放免法检测细胞活性、黑素含量和cAMP水平.结果:与空白对照组比较,滋补肝肾方含药血清各剂量组对B16增殖均没有明显促增殖活性;但20%含药血清可明显促进B16合成黑素量(P<0.05),并提高细胞内cAMP水平(P<0.05).结论:滋补肝肾方可能通过提高黑素细胞cAMP的水平,从而促进B16细胞合成黑素的功能.
