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驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素的分离及其对人A375黑素瘤细胞黑素合成作用的影响
目的 分离纯化驱虫斑鸠菊中紫铆素、紫铆花素,初步探讨这两种化合物对人A375黑素瘤细胞增殖及黑素合成作用的影响.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析分离纯化紫铆素、紫铆花素;分别采用MTT法、酶学法及NaOH法测定这两种化合物对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.结果 分离得到化合物紫铆素、紫铆花素,在0.50 ～10.00 μg· mL-1内紫铆素、紫铆花素促进A375细胞增殖,且紫铆花素促增殖作用强于紫铆素(P＜0.05);在0.10～1.00 μg·mL-1内两种化合物均上调酪氨酸酶活性;在0.50～5.00μg· mL-1内,紫铆花素促进黑素合成,紫铆素抑制黑素合成.结论 紫铆素、紫铆花素可能是驱虫斑鸠菊的药效成分;紫铆花素促进A375细胞的增殖,且使A375细胞黑素合成增加,紫铆素轻度抑制黑素合成.
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紫铆素人工抗原的合成与鉴定
目的 人工合成紫铆素(butin)的完全抗原并进行鉴定.方法 采用氯乙酸钠(SMCA)与紫铆素中的羟基反应形成羧甲基醚衍生物(紫铆素-SMCA),再通过羧基与载体蛋白(BSA、OVA)偶联形成完全抗原,以TLC法鉴别是否偶联产生新的大分子化合物,并以紫外扫描分析完全抗原的偶联比率,将得到的免疫原紫铆素-BSA按免疫程序免疫Balb/c小鼠.结果 TLC显示已经形成新的大分子化合物;紫外扫描法测定紫铆素-BSA的偶联比为6∶1,紫铆素-OVA的偶联比为5∶1.采用间接酶联免疫测定,产生的抗血清的稀释度可以达到1∶4 000.结论 经过TLC法、紫外扫描法和免疫方法鉴定,成功合成了紫铆素人工抗原.
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HPLC法同时测定维药驱虫斑鸠菊中4个黄酮类成分含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定维药驱虫斑鸠菊中圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素含量的方法,为完善驱虫斑鸠菊质量标准提供依据.方法:以圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素为对照品,采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,0.2％磷酸水溶液为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长310 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温25℃,测定驱虫斑鸠菊药材中这4个黄酮类成分的含量.结果:本法中圣草酚、紫铆查耳酮、紫铆素和异鼠李素的选样量分别在13.44～107.52、30.24～241.92、9.60～76.80、6.25～49.97 ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,r分别为0.9998、0.9999、0.9991、0.9997,平均加样回收率(n=9)在99.70％～100.56％,RSD小于2.0％.结论:本法简单、快速、重现性好,可为评价驱虫斑鸠菊药材的质量提供依据.
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驱虫斑鸠菊中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT增殖及细胞分泌因子的影响
目的:研究驱虫斑鸠菊(VW)中紫铆素对人永生化角质形成细胞株HaCaT的增殖及细胞分泌因子的影响,初步探讨VW中紫铆素治疗白癜风的机制.方法:采用MTT法测定0(空白对照)、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后的细胞存活率;采用酶联免疫吸附法测定0.5、1.0、5.0μg/mL紫铆素作用于HaCaT细胞48 h后培养液中细胞分泌因子内皮素1(ET-1)、ET-3、黑素细胞刺激素(MSH)、干细胞因子(SCF)、碱性纤维细胞生长因子(bFGF)的含量.结果:与空白对照比较,0.1~5.0μg/mL紫铆素作用48 h后细胞存活率均有不同程度升高,而10.0μg/mL紫铆素作用后细胞存活率降低;0.5、1.0、5.0μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-1、SCF、bFGF含量均显著增加(P<0.01),1.0、5.0μg/mL紫铆素作用48 h后培养液中ET-3、MSH含量显著增加(P<0.01).结论:紫铆素可促进HaCaT细胞的增殖,其作用机制可能与促进细胞分泌因子ET-1、ET-3、MSH、SCF、bFGF的分泌有关.
关键词： 驱虫斑鸠菊 紫铆素 人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞 增殖 细胞因子 -
HPLC法测定驱虫斑鸠菊中紫铆素的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定驱虫斑鸠菊中紫铆素含量的方法.方法:色谱柱为Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸溶液(40:60),检测波长为280 nm.结果:紫铆素进样量在0.01～0.5mg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率为93.6%,RSD=2.89%(n=9).结论:本法简单、准确,可用于驱虫斑鸠菊的质量控制.
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维药驱虫斑鸠菊药材质量标准的研究
目的 对驱虫斑鸠菊药材的质量标准进行研究.方法 采用薄层色谱法对驱虫斑鸠菊药材中的黄酮进行鉴别,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量.结果 建立驱虫斑鸠菊药材薄层色谱鉴别方法以及总黄酮含量测定方法,通过对不同年份生产驱虫斑鸠菊药材的测定,其总黄酮平均含量为89.0mg·g-1.结论 该方法简单,稳定,可靠.
