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不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量分析
目的：研究不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量。方法应用HPLC测定8个不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱含量，采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm34.6 mm，5μm)，流动相为甲醇-0.01 mol/L醋酸铵缓冲液(pH 8.0)(60∶40)，柱温25℃，进样体积20μl，流速1.0 ml/min，检测波长246 nm。结果不同产地及不同采收期的钩藤中异钩藤碱含量不同，其中含量高的地区为宁明县；含量高的采收时间为每年9月至次年2月。结论不同产地钩藤药材异钩藤碱的含量不同，每年9月至次年2月采收的钩藤中异钩藤碱含量较高。
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钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用分析
目的：：探讨钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用。方法：采取水煎液以及甲醇提取液的方式对钩藤中的钩藤碱及异钩藤碱进行提取,并使用高效液相色谱系统分别对其提取的含量进行测定。结果：在2．5~80μg/mL的范围内钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=76．7170X-0．0727(r=0．9998),RSD<8．7%；在2．0 ~80μg/mL的范围内异钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=87．4729X-0．3666(r=0．9997),RSD<7．3%。甲醇提取液的方式所提取钩藤碱和异钩藤碱的含量高于水煎液的方式,并且使用二十倍质量的甲醇量,24 h的冷侵时间以及60 min的超声时间合适。结论：使用甲醇进行提取在用于钩藤中钩藤碱及异钩藤碱中作用优异,对其质量的控制性好,重复性高,操作方法简单,可提高预后,值得在临床上应用推广。
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RP-HPLC检测大鼠大血管中异钩藤碱的含量
目的:建立测定大鼠大血管中异钩藤碱含量的方法.方法:Wista大鼠灌胃钩藤水煎液后取出大血管,液氮研磨,用乙醇沉淀组织匀浆中的蛋白质,取上清液用氮气吹干,加甲醇复溶后取上清液直接进样,用高效液相色谱仪测定.RP18WatersTM色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相甲醇-水(70∶ 30),三乙胺调pH 8.0,流速0.8 mL· min-,检测波长254 nm,异钩藤碱保留时间约为12 min,柱温30℃.结果:大血管中异钩藤碱的质量浓度在0.04～20.0 mg·L-1,大鼠峰面积之比Y与异钩藤碱的质量浓度X具有较好的线性关系,回归方程为Y=4.644 1X +0.161 2(R2 =0.999 2);平均提取回收率为99.34％,RSD＜8.0％.结论:方法简便、稳定、易行,可以用于测定大鼠大血管中异钩藤碱的含量.
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正交试验法优选止颤汤提取工艺
目的:优选复方止颤汤的提取工艺.方法:采用HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱、芍药苷含量；以钩藤碱、异钩藤碱、芍药苷提取率为指标,通过L9(34)正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对提取工艺的影响.结果:佳提取工艺条件为加10倍量水提取2次,每次1h.结论:优选的止颤汤提取工艺稳定可行,提取率高.
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异钩藤碱ESI-MS裂解规律及其在代谢产物鉴定中的应用
目的:分析异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径及产物.方法:异钩藤碱按剂量37.5 mg· kg-1给药后,收集血浆,在正离子模式下,采用UPLC-Q-TOF-MS分析异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径,流动相0.1％甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱.结果:通过与空白生物样品和对照品的提取离子色谱图、质谱碎片裂解信息比对,共鉴别出13个成分,其中1个原型,12个代谢产物,包括Ⅰ相代谢产物11个,Ⅱ相代谢产物1个.结论:异钩藤碱在大鼠体内的代谢途径为氧化、立体异构、羟基化、脱氢、水解及葡萄糖醛酸化等,丰富了吲哚类生物碱的ESI-MS裂解规律,为此类化合物的质谱解析提供参考.
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钩藤与天麻配伍前后异钩藤碱在SHR大鼠肝脏和肾脏的分布
目的:观察钩藤与天麻配伍前后异构藤碱在SHR大鼠肝脏和肾脏的分布变化,探讨药物配伍前后对其归经的影响.方法:采用原发性高血压大鼠(SHR),钩藤组给予钩藤水煎液,天麻钩藤组给予钩藤天麻配伍后水煎液,空白组给予生理盐水,给药剂量为1.172g·kg-1,用高效液相色谱法测定钩藤与天麻配伍前后其效应成分异钩藤碱在SHR大鼠肝脏和肾脏中的含量;色谱条件:色谱柱:WatersTM (4.6 mm ×250 mm,RP 18.5μm );流动相甲醇-水(70:30) pH 8.0;流速为0.8 mL·min-1检测波长254 nm;柱温30℃;进样量20μL.结果:异钩藤碱对照品在肝脏和肾脏组织中在0.08～16.0 mg·L-1具有较好的线性关系;钩藤与天麻配伍前后在肝脏和肾脏的异钩藤碱的分布具有显著的差异性(P<0.05).结论:中药配伍与归经之间有着密切的相关性.
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天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收动力学研究
目的:研究天钩降压胶囊中有效成分钩藤碱、异钩藤碱的大鼠离体小肠吸收动力学.方法:采用外翻肠囊法,用HPLC测定不同取样时间肠内液钩藤碱、异钩藤碱的含量并计算累计吸收量,以钩藤碱、异钩藤碱的累计吸收量对时间作线性回归分析,计算吸收动力学参数.结果:钩藤碱回归方程为Y=0.000 9X-0.008 5(r =0.908 6),Ka=9.0 ×10-4(μg· min-1·cm-2),t1/2=12.8 h,异钩藤碱回归方程为Y=0.008 6X-0.178 2(r =0.909 0),Ka=8.6×10-3(μg· min-1·cm-2),t1/2=1.34h.结论:天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程.
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天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱大鼠在体肠吸收动力学研究
目的:研究天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠肠道的吸收动力学.方法:采用大鼠在体肠灌流试验,利用HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱的含量KROMASIL C18色谱拄(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相乙腈-水(含0.01 mol· L-1三乙胺,冰醋酸调pH7.5)(45∶55),流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量20 μL,用紫外-可见分光光度法在560nm测定酚红的含量.结果:钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.331 7X-0.771 8(r =0.998 5),Ka=0.331 7(h-1),t1/2=2.09(h)；异钩藤碱吸收动力学方程为Y=-0.687 0X-0.150 4(r =0.985 2),Ka=0.687 0(h-1),t1/2=1.01(h).结论:天钩降压胶囊中钩藤碱、异钩藤碱在大鼠在体小肠的吸收呈一级动力学过程.
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九味熄风颗粒生物碱类成分指纹图谱建立及其多指标成分定量分析
目的:建立九味熄风颗粒的指纹图谱,并同时测定其中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱.方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇-0.1％三乙胺为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长246nm.对10批九味熄风颗粒进行了指纹图谱及含量测定研究,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”(2004A)进行分析.结果:得到分离度、重复性均较好的九味熄风颗粒指纹图谱,共标示出13个共有峰,各批次样品相似度＞0.96;通过对照品比对,确定了4个成分,分别为钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱,并对其进行定量分析.结论:该方法快速、简便、准确,可作为全面评价该制剂质量的有效方法之一.
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超高效液相色谱法测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量
目的:用超高效液相色谱法同时测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量.方法:以ACQUITYUPLC<'R>BEH130C<,18>(2.1mm×100mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-0.01mol/L三乙胺水溶液(45:55,冰醋酸调pH7.0)为流动相,检测波长为245nm,流速0.2mL/min.结果:钩藤碱在0.052-0.309μg具有良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为98.3％,RSD为0.88％,异钩藤碱在0.060μg-0.363μg具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.7％,RSD为1.29％.结论:该方法简便快捷、精密度高、结果准确.可用于钩藤的质量控制.
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反相HPLC法测定大鼠组织中异钩藤碱含量
目的 建立测定大鼠组织中异钩藤碱的方法 .方法 应用甲醇沉淀蛋白,然后氮吹仪吹干甲醇复溶后用反相HPLC法直接测定.以WatersTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,前置保护柱为Wondasil C18(4.0 mm×10mm,5μm),甲醇-水(70:30)含0.03%的三乙胺为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm.卡马西平做内标.结果 异钩藤碱在大鼠组织中的含量标准曲线方程为:Y=48.558X+0.207 6(n=6),r=0.999 6,在0.16～16.0μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.66%,RSD-1.56%.结论 该方法 灵敏、快速、简便,专一性和重复性好.
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HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨
目的:探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法.方法:采用RP-HPLC,对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察,同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况.结果:钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好,精密度良好；当样品采用同流提取时,平均加样回收率87.51％～88.83％,提取回收率12.60％；当样品采用超声提取时,平均加样回收率99.48％ ～ 103.2％,提取回收率47.08％.异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好,精密度良好；当样品采用回流提取时,平均加样回收率107.9％～113.9％,提取回收率40.00％,当样品采用超声提取时,平均加样回收率97.00％～99.59％,提取回收率51.03％.质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱,有一小部分转化为未知成分；异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid4种成分.结论:HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法,并应注意同收率问题.
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钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡／增殖及FN、LN的影响
目的 研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin,FN)的影响.方法 选择8周龄雄性SHR 40只,随机分为模型组、卡托普利组( 17.5 mg/kg)、异钩藤碱组(5.0 mg/kg)、钩藤碱组(5.0 mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0 mg/kg),每组8只.另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组.模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水.各组给药容积为每次10 mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量.采用Annexin VFITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率；免疫组化法检测胸主动脉VAF Bcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达；原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)mRNA表达.结果 与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高,Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1 mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1mRNA差异无统计学意义(P＞0.05)；胸主动脉VAF凋亡率升高,Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)；钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)；异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1 mRNA表达途径抑制SHR胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压.
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反相HPLC法测定兔血浆异钩藤碱浓度及其药物代谢动力学
用ODS柱分离,甲醇-水(95∶5)为流动相,检测波长UV 254 nm,建立了兔血浆异钩藤碱浓度的HPLC测定方法.结果显示,血药浓度在0.016～16 μg*ml-1范围内呈线性关系,血浆低检测浓度为0.016 μg*ml-1,绝对回收率为80.5%～85.1%.兔iv IRHY 2及5 mg*kg-1,药代动力学过程符合二室开放模型,T1/2β分别为1.32 h和1.25 h.兔经十二指肠给2及5 mg*kg-1后,T1/2β分别为1.75 h和1.26 h.生物利用度为42.4%～69.4%.此法简便、快速.IRHY在兔体内吸收迅速,消除也较快.
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论钩藤的带钩率与质量控制
目的 论钩藤的带钩率与质量的关系,建立钩藤的显微鉴定和异钩藤碱的高效液相含量测定.方法 采用中药材粉末显微鉴定法,寻找钩藤药材在显微镜下的常见的特征性细胞与带钩率的关系;用高效液相法测定不同带钩率的钩藤药材提取物的异钩藤碱含量.结果 显微鉴定:特征性细胞与带钩率不同有关联;含量测定方法:操作简单,准确,异钩藤碱在1.0943～70.0350 μg之间呈良好的线性关系,异钩藤碱的回收率为 97.83%.结论 本实验用定性、定量方法来检验不同带钩率的钩藤药材与提取物的质量,对药材的进一步开发利用提供了科学依据.并对传统用药习惯进行论证.
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异钩藤碱对人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药的逆转作用
目的:探讨异钩藤碱对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/DDP耐药的逆转作用及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度异钩藤碱对A549细胞和A549/DDP细胞的增殖抑制效应;MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对A549,A549/DDP细胞增殖的抑制作用及加用异钩藤碱时的变化;流式细胞仪检测钩藤碱对VCR引起细胞凋亡的影响,采用电感耦合等离子质谱法检测细胞内顺铂蓄积浓度.结果:1.5 mg·L-1及更低浓度的异钩藤碱对A549和A549/DDP细胞无明显细胞毒性作用.A549/DDP对VCR,VP-16,ADM和DDP的耐药倍数分别为19.58,11.97,21.74和24.29.加入0.5,1.0和1.5 mg·L-1异钩藤碱后,A549/DDP对VCR,VP-16和DDP的耐药逆转倍数均成倍增加.加入1.5 mg·L-1异钩藤碱后,A549/DDP对上述化疗药物的凋亡率提高更明显.1.5 mg·L-1异钩藤碱可明显提高DDP在A549/DDP细胞内的蓄积.结论:异钩藤碱可以逆转A549/DDP细胞的多药耐药,逆转效果与药物浓度有关,逆转机制可能与增加细胞内化疗药物蓄积和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.
关键词： A549/DDP细胞株 异钩藤碱 多药耐药 逆转 凋亡 -
异钩藤碱对猫的心血管作用与血药浓度的关系
目的用麻醉猫研究异钩藤碱(Iso)的心血管药理效应与血药浓度的关系.方法异钩藤碱粉末,分别临用时配制(FPI)和配好后室温放置1周备用(DPI).以RM-6000八道生理仪记录猫的收缩压、舒张压和心率的变化,相应时间点取血1.0 mL.用反相高效液相色谱法测定血药浓度.结果 Iso的降压及负性频率效应与其给药剂量及血药浓度呈明显的量-效关系,同剂量的DPI和FPI给药,FPI的起效时间、疗效维持时间及大效应均强于DPI.结论 Iso的降压及负性频率效应与其给药剂量及血药浓度呈明显的量-效关系; Iso的溶液剂型不稳定,室温放置1周后可降低其心血管药理效应.
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异钩藤碱体外对家兔血小板聚集和胞浆游离钙离子浓度的影响
目的 研究异钩藤碱对血小板内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探讨其抗血小板聚集作用的可能机制.方法 比浊法测定家兔血小板聚集功能；双波长Fura-2荧光法测定血小板胞浆[Ca2+]i.结果 异钩藤碱 0.33～1.30 mmol·L-1体外给药对ADP和凝血酶引起的血小板聚集有浓度依赖性的抑制作用.存在细胞外钙时,异钩藤碱对基础状态血小板的[Ca2+]i和ADP及凝血酶诱导的[Ca2+]i水平有浓度依赖性的降低作用,而无细胞外钙存在时,则均无明显影响,表明其可抑制血小板的外钙内流,对内钙释放无明显抑制作用.结论 异钩藤碱可抑制血小板聚集,其作用机制可能与其抑制血小板胞浆[Ca2+]i升高有关.
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HPLC法测定安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量
目的:建立安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量测定方法.方法:用高效液相色谱法Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm);甲醇-0.2％氨水溶液(60:40)为流动相;检测波长为245 nm,流速为1 mL·min-1,柱温25℃.结果:钩藤碱进样量在0.028 5～0.713 3μg(r =0.999 9)与峰面积线性关系良好;异钩藤碱进样量在0.016 6～0.416 μg(r =0.999 8)范围内线性良好,钩藤碱的平均回收率为98.61％,RSD为1.56％,异钩藤碱的平均回收率为97.49％,RSD为1.27％.结论:本法灵敏、准确,专属性强,能简便有效的控制安乐片中钩藤碱和异钩藤碱的含量.
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高效液相色谱梯度洗脱法测定八宝惊风散中钩藤碱、异钩藤碱、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量
目的 采用多波长高效液相色谱(HPLC)梯度洗脱法建立同时测定八宝惊风散中钩藤碱、异钩藤碱、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的方法 .方法采用C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm);流速为0.7 ml/min;以乙腈-甲醇(1:4)为流动相A,以0.1%三乙胺溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长:254nm,柱温为30℃.结果 钩藤碱、异钩藤碱、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷质量浓度分别在5.10~102.00μg/ml(r=0.9994)、5.95~119.00μg/ml(r=0.9996)、6.10~122.00μg/ml(r=0.9999)、5.65~113.00μg/ml(r=0.9998)时与其峰面积呈良好的线性关系;钩藤碱、异钩藤碱、升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的平均加样回收率分别为97.66%、96.72%、98.99%、99.16%,RSD(n=6)分别为1.32%、0.52%、0.78%、1.56%.结论 该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可作为八宝惊风散的含量控制方法.
关键词： 八宝惊风散 钩藤碱 异钩藤碱 升麻素苷 5-O-甲基维斯阿米醇苷
