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人尿液中8-羟基脱氧鸟苷的超高效液相色谱-串联质谱联用检测方法
目的：建立尿液中8?羟基脱氧鸟苷（8?OHdG）的超高效液相色谱?串联质谱快速检测方法。方法配制浓度为0.01~0.1μg/ml的8?OHdG标准溶液，以7μl/min的速度导入离子源，找出母离子、子离子质荷比，逐步优化每个离子对的解簇电压、碰撞电压和出口电压等质谱参数。以浓度为10.0μg/L的加标尿液做样品，分别用1 mol/L甲酸铵溶液和甲酸体积比为5∶1、4∶1、3∶1、2∶1和1∶1的甲酸?甲酸铵溶液调节样品pH值。分别选用HLB、MCX、MAX 3种不同极性的固相萃取柱进行测试。分别测试甲醇和水比例为90∶10、80∶20、50∶50、20∶80、10∶90的洗脱效果，测试乙腈和水比例为90∶10、80∶20、50∶50、20∶80、10∶90的洗脱效果。以标准系列应用液浓度对应化合物定量离子对峰面积的比值绘制标准曲线。以响应值为3倍信噪比对应的8?OHdG浓度计为检出限，以响应值为10倍信噪比对应的8?OHdG浓度计为定量下限。采用空白尿液加标回收的方式来评价精密度和加标回收率。结果母离子质荷比为284.1，子离子质荷比分别为168.1、140.1、123.0、112.0，定量离子对284.1/168.1的碰撞电压为18 V，284.1/140.1碰撞电压为42 V，284.1/123.0碰撞电压为48 V，284.1/112.0碰撞电压为53 V。由10 ml 1 mol/L甲酸铵溶液、2 ml甲酸、88 ml水混合溶液与样品体积1∶5的比例进行pH调节的方式回收率高，为87.9%～104.3%。用3 ml甲醇和3 ml水活化的HLB柱进行样品提取净化，用1.0 ml甲醇进行洗脱的方式回收率高，为87.9%～104.3%。在1.0~100.0μg/L的浓度范围内，8?OHdG标准应用液检测结果呈良好的线性关系。回归方程y=1.25x+0.74，相关系数r=0.9995。方法的检出限是0.2μg/L，定量下限是0.7μg/L。方法加标回收率范围在87.9%～104.3%，批内精密度在1.5%～3.7%范围内，批间精密度在1.6%～5.4%范围内。结论本研究建立的方法灵敏度高，精密度和准确度好，检测浓度范围较宽。
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基于超高效液相色谱分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分
目的:评价通过超高效液相色谱(UPLC)分析黄连、吴茱萸配伍药对的有效成分.方法:选取4对不同产地的黄连、吴茱萸配伍药对进行研究,采用ACQUITY UPLC BEH C18作为本研究的色谱柱(1.7μm,100 mm×2.1 mm),柱温为40℃;加入2μL10℃的样品后,以乙腈(流动相A)-纯水加0.05％甲酸(流动相B),流速为0.4 mL/min进行梯度洗脱,建立UPLC-质谱(MS)指纹图谱分析方法.结果:在黄连、吴茱萸配伍药对的对照指纹图谱和样品指纹图谱的比较中,相对保留时间标定16个较有特征的共有峰分别与单味黄连药物及单味吴茱萸的指纹图谱特征峰比较,发现9、15和16号共有峰是黄连、吴茱萸都存在的特征峰,而1、2、13、14号共有峰仅吴茱萸方有的特征峰,余下共有峰为黄连药物的特征峰.9、15和16号黄连、吴茱萸配伍药对共有的特征峰,结合质谱分析和化合物质裂解规律,推测出木兰花碱、格陵兰黄连碱和1-甲基-2壬基-4(1H)-奎若酮等3中化合物.结论:采用UPLC-MS技术建立黄连、吴茱萸配伍药对有效成分,为黄连和吴茱萸药材的有效成分和质量评估提供参考.
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超高效液相色谱法测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量
目的:用超高效液相色谱法同时测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量.方法:以ACQUITYUPLC<'R>BEH130C<,18>(2.1mm×100mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-0.01mol/L三乙胺水溶液(45:55,冰醋酸调pH7.0)为流动相,检测波长为245nm,流速0.2mL/min.结果:钩藤碱在0.052-0.309μg具有良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为98.3％,RSD为0.88％,异钩藤碱在0.060μg-0.363μg具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.7％,RSD为1.29％.结论:该方法简便快捷、精密度高、结果准确.可用于钩藤的质量控制.
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UPLC测定益母草颗粒和益母草膏中益母草碱含量
目的:分析不同厂家生产的益母草颗粒及益母草膏中益母草碱的含量,为益母草颗粒和益母草膏的质量标准建立提供参考.方法:采用超高效液相色谱分析,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);甲醇-10 mmol·L~(-1)甲酸铵缓冲液(pH 4.0)为流动相梯度洗脱,检测波长为277 nm.结果:不同企业生产的益母草颗粒和益母草膏中益母草碱介于45.6～193.0μg·g~(-1).结论:该方法操作简便,结果稳定可靠,可用于益母草相关制剂的质量评价.
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铁皮石斛花多糖相对分子质量及其单糖组成的研究
为了明确铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及其单糖组成,该研究采用高效凝胶色谱和柱前衍生UPLC对11个铁皮石斛花样品的多糖进行了相对分子质量及其单糖组成分析,并利用SPSS 19.0软件根据组成的单糖峰面积进行聚类分析,结果表明11个杂交家系铁皮石斛花的粗多糖均分离为三部分(DOP-1,DOP-2和DOP-3),其平均相对分子质量分别为5.53×105,3.49×105和2.12×105.铁皮石斛花多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖5种单糖组成,其中甘露糖组成比例高,其与葡萄糖比值为0.302 ～3.335;不同家系样品多糖中各单糖的相对含量存在一定差异,11个家系按单糖组成及相对含量划分为4类,该研究基本明确了铁皮石斛花中多糖相对分子质量分布及单糖构成,为其资源利用打下基础.
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水中双酚类化合物的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱检测法
目的 建立水中双酚A、双酚B、双酚F三种双酚类化合物固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱同时测定方法.方法 水样经C18小柱富集,乙腈洗脱,串联质谱仪检测,利用Acquity BEH C18色谱柱分离,以乙腈-0.1％氨水溶液为流动相梯度洗脱,流量0.3 ml/min,以双酚A-d16为内标.结果 三种双酚类化合物在1.0～100.0 μg/L线性范围内具有良好的线性关系,r≥0.999;该方法的检出限为0.75～1.0 ng/L,平均回收率为87.0％～106.9％,RSD为1.61％～3.67％.结论 该方法灵敏、准确,适用于水中痕量双酚A、双酚B、双酚F的同时检测.
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大气颗粒物PM2.5中16种多环芳烃的超高效液相色谱测定法
目的 建立大气颗粒物PM25中16种多环芳烃(PAHs)的超高效液相色谱-二极管阵列检测器测定法.方法 空气样品滤膜经乙腈密封超声提取,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,过Waters ACQUITY UPLC(R)BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),超高效液相色谱法测定,反相色谱法梯度淋洗分离后,二极管阵列检测器检测.结果 在10～1 000 μg/L的范围内,所得16种PAHs的回归方程均呈良好的线性关系良好(r＞0.999 9).方法的检出限为0.5～6.0 μg/L,平均回收率为88.9％～119.4％,RSD为0.3％～4.9％.结论 该方法操作简单,灵敏高,分析速度快,适用于空气中16种PAHs的监测.
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饮用水中壬基酚的同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱联用测定法
目的 建立生活饮用水中壬基酚(nonylphenol,NP)的同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱联用(UHPLCMS-MS)测定方法.方法 NP浓度高于1μg/L的水样经滤膜过滤或高速离心后直接进行UHPLC-MS-MS分析；NP浓度低于1 μg/L的水样经固相萃取小柱富集后进行UHPLC-MS/MS分析.结果 当NP浓度高于1μg/L时,在1.0～100.0μg/L线性范围内,所得回归方程为y=0.116 3x+0.037 6,相关系数为0.999 8,检出限为0.15 μg/L,定量下限为0.5 μg/L;当NP浓度低于1μg,/L时,在0.005～1.0 μg/L线性范围内,所得回归方程为y=1.119 5x-0.001 6,相关系数为0.999 4,检出限为0.001 5 μg/L,定量下限为0.005 μg/L.该方法的平均加标回收率为92.5％～102.3％,RSD为0.9％～5.6％.结论 该方法具有准确快速,灵敏度和准确度均较高,线性范围宽等优点,适用于生活饮用水中NP的检测.
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液相质谱联用法同时检测体外生殖培养液中的18种氨基酸
背景:目前,对于体外生殖培养液的质量控制文件或技术标准中,对成分含量指标及检测方法未做明确规定,为保证该类产品的安全有效性,应及早建立质量标准.目的:采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中18种氨基酸指标成分,分析不同用途培养液中18种氨基酸的含量.方法:采用超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法,检测体外生殖培养液中 18 种氨基酸(甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、组氨酸、苏氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、色氨酸、胱氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、精氨酸)指标成分,色谱柱为SUPELCO Discovery HS F5-3(15 cm× 2.1 mm,3 μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.35 mL/min,柱温40 ℃;质谱采用电喷雾离子源,负离子模式扫面,扫描方式为多反应监测.结果与结论:18种氨基酸在0.25-12.5 mmol/L浓度范围内线性关系练好;18种氨基酸的平均加样回收率在86.3%-125.3%之间,精密度实验与重复性实验的相对标准偏差均小于4.7%,说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强,可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据.
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液质谱联用法同时检测体外生殖培养液中的3种能量成分
背景：目前，对于体外生殖培养液的质量控制文件或技术标准中，对成分含量的指标及检测方法未做明确规定，为保证该类产品的安全有效性，应及早建立质量标准。目的：建立采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液中葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠3种指标成分的方法，分析不同用途培养液中3种成分的含量。方法：采用超高效液相色谱三重四级杆质谱联用法，使用SUPELCO Discovery HS F5-3色谱柱(15 cm×2.1 mm，3μm)，流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液，梯度洗脱，流速0.35 mL?min-1，柱温40℃；质谱采用电喷雾离子源，负离子模式扫面，扫描方式为多反应监测。结果与讨论：葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠分别在0.1-10 mg/L(r=0.9998)、0.05-5 mg/L(r=0.9994)、0.1-10 mg/L(r=0.9994)范围线性关系练好；平均加样回收率在96.4%-98.1%之间，相对标准偏差均小于2.8%。说明采用液相质谱联用法检测体外生殖培养液灵敏、快速、准确、专属性强，可为体外生殖培养液的质量标准研究提供依据。
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雪菊花茶的质量评价
目的 综合考察雪菊花茶的质量,建立质量评价方法.方法 采用TLC和UPLC法建立雪菊中异奥卡宁葡萄糖苷的定性鉴别法和含量测定法,测定10批样品中异奥卡宁葡萄糖苷含量及水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物等常规理化试验项目.结果 TLC图谱中,在各样品中均可检视出异奥卡宁葡萄糖苷的斑点;UPLC测定法中,异奥卡宁葡萄糖苷色谱峰分离度好,在5.1～40.8 mg·L-1内线性关系良好,回收率为98.7 ％(RSDl.7％),在10批样品中异奥卡宁葡萄糖苷含量质量分数为0.361～0.681％;常规理化试验项目测定结果表明:各样品中仅酸不溶性灰分值差异较大,其他项目测定值集中分布在平均值±40％区间内.结论 建立的TLC和UPLC分析方法及采用的理化试验项目适宜作为雪菊综合质量评价方法.
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用UPLC法测定银黄含片中8种活性成分含量的效果研究
目的:研究用UPLC法测定银黄含片中8种活性成分含量的效果,以期为该药的质量控制研究提供参考依据.方法:采用UPLC法对银黄含片中绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、黄芩苷、木犀草素、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量进行测定.结果:银黄含片中8种活性成分的线性关系良好,相关系数均>0.9997,加样回收率均在97.3%~102.0%之间,RSD均小于1.2%.结论:用UPLC法测定银黄含片中8种活性成分含量的效果好.可采用该方法对银黄含片进行全面、有效的质量控制.
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用UHPLC-MS/MS法同时测定肾八昧胶囊中6种皂苷的含量
目的:建立超高效液相联用质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定肾八味胶囊中6种皂苷(人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷F1、人参皂苷F2、原人参三醇)的含量.方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),以0.1％甲酸水溶液(A相)-0.1％甲酸乙腈溶液(B相)为流动相梯度洗脱(0～3.2 min,20％～35％B相;3.2～3.4 min,25％～45％B相;3.4～7.0 min,45％～55％B相),流速为0.3 ml/min,柱温20℃,进样量5μl,采用电喷雾离子源(ESI)正离子模式下检测.结果:人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷F1、人参皂苷F2和原人参三醇在相应的线性范围内线性关系良好(r≥0.999 1),日内和日间RSD为0.54％～ 2.92％,平均加样回收率为97.06％～99.76％,重复性和稳定性良好.结论:本研究建立的UHPLC-MS/MS法能够快速、简便、灵敏地测定肾八味胶囊中6种皂苷的含量.主成分分析(PCA)和偏小二乘判别分析(PLS-DA)可对有效期不同的样品进行区分,由此可为肾八味胶囊的质量控制提供科学依据.
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琥珀酸曲格列汀及其有关物质的UPLC Orbitrap HRMS法测定
建立了超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC Orbitrap HRMS)法测定琥珀酸曲格列汀(1)原料药及其中间体2以及位置异构体3.采用Eclipse Plus-C18色谱柱,以0.05 mol/L的乙酸铵缓冲液:乙腈(45:55)为流动相.质谱采用加热电喷雾离子源,正离子扫描模式,扫描范围m/z 200～500,监测离子分别为[M+H] +m/z 358.167±0.003 (1)、[M+H] +m/z 294.044±0.003 (2)、[M+ H] m/z 358.167±0.003 (3).1琥珀酸盐在100～5 000 ng/ml范围内线性关系良好,有关物质2和3在1～50 ng/ml范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.48％、97.51％和97.22％,RSD分别为1.63％、1.94％和2.17％;检测限均为0.01 ng/ml.本法定性可靠,定量准确,灵敏度高.
关键词： 琥珀酸曲格列汀 有关物质 超高效液相 静电场轨道阱高分辨质谱 含量测定 -
柴黄片血清药物化学的初步研究
目的 通过对柴黄片血清药物化学研究方法的建立,探讨柴黄片口服吸收后的入血成分.方法 采用血清药物化学研究方法,在建立柴黄片超高效液相色谱(UPLC)特征图谱的基础上,通过比较柴黄片原药、柴胡给药后含药血清、黄芩给药后含药血清、柴黄片给药后含药血清、空白血清UPLC特征图谱,鉴定柴黄片口服给药后的血中移行成分.结果 口服柴黄片后,从血清中发现20个入血成分,其中6个为柴黄片中原型吸收入血的成分,其余入血成分可能为原型成分的代谢产物.结论 20个入血成分可能是柴黄片的体内直接作用物质,对其进行深入研究将有助于为柴黄片的药效物质基础及药效机制奠定基础.
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UPLC法测定六神曲发酵过程中噻嗪双酮苷及噻嗪二酮含量
目的 建立UPLC法测定六神曲发酵过程中噻嗪双酮苷及噻嗪二酮的含量测定方法,监测六神曲的发酵过程、控制六神曲的质量.方法 采用UPLC法测定不同发酵天数六神曲样品中噻嗪双酮苷及噻嗪二酮的含量.结果 六神曲发酵过程中噻嗪双酮苷含量降低,而噻嗪二酮的含量呈先升高后降低的趋势.噻嗪双酮苷和噻嗪二酮分别在1.40～ 140μg/ml(r=0.999 1)和1.19～119μg/ml(r=0.999 1)内与峰面积成良好线性关系,平均回收率分别为99.5％和101.6％.结论 UPLC法作为测定六神曲发酵过程中噻嗪双酮苷及噻嗪二酮含量的一种手段,方法简便准确、重现性和稳定性较好,适于作为控制六神曲质量的方法,为六神曲的质量评价和控制提供了科学依据.
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槲皮素Pluronic P123/Poloxamer 188混合胶束体外释放和药代动力学研究
目的 考察Pluronic P123/Poloxamer 188槲皮素(quercetin)混合聚合物胶束体外释放结果和大鼠体内药物代谢动力学特征.方法 采用薄膜分散法制备聚合物胶束,通过体外透析法,研究槲皮素胶束在含1％ 吐温-80溶液中的累积释放率,绘制释药曲线,结果 经DD Solver软件进行模型拟合;超高效液相色谱法(UPLC)测定SD大鼠经尾静脉注射给药后血浆药物浓度,绘制药-时曲线,数据经PK Sol-ver药代动力学软件处理.结果 制备的槲皮素聚合物混合胶束包封率为(94.25±2.13)％,载药量为(8.61±0.18)％.混合胶束在含1％ 吐温-80溶液中累积释放量为(52.90±1.08)％,经拟合,槲皮素胶束符合Higuchi动力学方程,拟合方程为:F=6.735·t0.5(Rsqr_adj=0.9604,AIC=75.5840).经计算,槲皮素混合胶束的T 12β、AUC0-t及MRT0-inf分别为槲皮素溶液的1.2、1.5、2.4倍.结论槲皮素混合胶束包封率及载药量高,可改善体外释放行为,延长槲皮素在大鼠体内的时间,明显提高槲皮素的生物利用度.
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超高效液相色谱法测定人血浆水杨酸浓度不确定度评定
目的 评定超高效液相色谱(UPLC)法测定人血浆水杨酸浓度的不确定度.方法 分析UPLC法测定人血浆水杨酸浓度过程中的不确定度来源,计算并进行合成和扩展.结果 水杨酸在低定量下限浓度(0.23 μg·mL-1)和高质控浓度(39.43 μg·mL-1)的扩展不确定度分别为0.014和7.34 μg·mL-1(P=95%,k=2).结论 UPLC法测定人血浆水杨酸浓度不确定度,在低定量下限浓度和高质控浓度时主要由回收率、生物样品配制和重复性引入.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆利伐沙班浓度
目的 建立测定人血浆中利伐沙班浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法.方法 以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品,d4-利伐沙班为内标.色谱柱为Thermo Hypersil Gold C18(2.1 mm×100 mm,1.9μm).流动相为乙腈-水(含0.1％甲酸和5 mmol·L-1醋酸铵),梯度洗脱.质谱条件为电喷雾离子源,正离子模式检测,扫描方式为多反应离子监测.用于定量分析的离子反应分别为m/z 436.1→m/z 145.1(利伐沙班)和m/z 440.2→m/z 145.0(d4-利伐沙班).结果 利伐沙班在1～500 ng·mL-1范围内线性良好,定量下限为1 ng·mL-1,日内日间精密度均<8％,绝对回收率90.09％～95.23％,基质效应93.50％～100.09％.血浆样品室温(20℃)放置4 h,处理后(4℃)放置24 h,冻存(-80℃)50 d以及反复冻融3次稳定性良好,样品浓度均无显著变化.结论 该分析方法灵敏、准确,样品处理简便、快速,能为该药的药物相互作用评价和个体化用药实践提供方法学参考.
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超高效液相色谱指纹图谱快速测定复方丹参片与复方丹参滴丸活性成分
目的 建立复方丹参方指纹图谱,并测定复方丹参片与复方丹参滴丸有效成分的含量.方法 色谱柱:Acquity ODS C18(50 mm×2.6 mm,1.7μm),流动相:0.02％磷酸溶液-0.02％磷酸的80％乙腈,梯度洗脱,柱温:40℃,流速:0.42 mL·min-1,检测波长:203 nm.结果 丹酚酸B进样量为13～ 1300μg线性关系良好(r=0.999 5),滴丸与片剂平均回收率分别为97.76％,99.13％,RSD为1.72％,1.74％(n=6);三七皂苷R1进样量为10 ～ 200 μg线性关系良好(r=0.9992),滴丸与片剂平均回收率分别为95.83％,97.57％,RSD为1.91％,1.75％(n=6);人参皂苷Rg1的进样量为22～220 μg线性关系良好(r=0.999 9),滴丸与片剂平均回收率分别为97.33％,96.45％,RSD为1.13％,2.28％(n=6);人参皂苷Rb1的进样量为12.2～244 μg线性关系良好(r=0.999 9),滴丸与片剂平均回收率分别为98.00％,98.78％,RSD为1.47％,2.03％(n=6);丹参酮IIA进样量为11.2～112 μg线性关系良好(r=0.9995),片剂平均回收率为97.48％,RSD为1.69％(n=6).5批复方丹参片与滴丸相似度分别在0.913～0.982,0.907～ 0.989.结论 建立复方丹参片与复方丹参滴丸5种成分含量检测方法,该方法效率高,重复性、稳定性好,为两种制剂的质量检测提供依据.
