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凉血活血胶囊含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响
目的 探讨凉血活血胶囊含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管抑制作用的机制.方法 在8日龄鸡胚CAM上植入凉血活血胶囊空白血清、含药血清,以及生理盐水、不完全1640制备的明胶海绵药膜,孵化72 h.解剖显微镜下放大10倍计数给药组和对照组载体周围5 mm范围内的大、中、细小血管数目,观察药物对CAM血管新生的影响.结果 CAM正常状态的血管呈非特异性的贯穿、包绕、叶脉样、平行生长.解剖显微镜下放大10倍计数载体周围5 mm范围内的大、中、细小血管数目.实验结果显示:不同浓度的给药组均出现无血管区或血管断裂现象,与生理盐水组、不完全1640组比较差异有统计学意义(分别P<0.01);凉血活血胶囊含药血清对CAM大血管生成未显示明显抑制作用(分别P>0.05);但3个浓度对CAM中血管均有一定的抑制作用(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01);对CAM细小血管均有明显的抑制作用(分别P<0.01);不同浓度给药组总血管数与其相应浓度空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 凉血活血胶囊含药血清对CAM血管新生有显著的抑制作用.
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复方芪红颗粒的提取工艺研究及对促血管新生作用的研究
目的:确定复方芪红颗粒的佳提取工艺条件并验证其对促血管新生的作用.方法:以黄芪甲苷、红景天苷的含量作为提取工艺的考察指标,采用L9(34)正交设计优选提取工艺;通过CAM研究,考察复方芪红颗粒对血管新生治疗的作用.结果:佳提取工艺条件为提取时间2h,加12倍量的水,提取2次;BXW组CAM上血管数比生理盐水组明显增加.结论:该提取工艺稳定、可行,且BXW能促进CAM的血管生成.
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益气生骨冲剂对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 探讨益气生骨冲剂对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响.方法 取9日鸡胚24枚建立CAM模型,随机分为实验组和空白组,每组12枚.实验组加药益气生骨冲剂于无血管区的载体上,空白组加生理盐水.每日上下午各加药1次.3 d后检测CAM载体周围1.5 cm的血管数目.结果 实验组小血管数目和血管总数均多于空白组,两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 益气生骨冲剂可以促进血管内皮生长因子及其受体表达,促进血管内皮细胞的增殖可能是促进血管生成的原因之一.
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云南白药抑制新生血管生成活性部位筛选
目的:探讨云南白药不同提取部位对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,分别以生理盐水和苏拉明为空白和阳性对照,以小血管个数为主要观察指标,比较云南白药不同提取部位抑制新生血管生成作用.结果:云南白药的乙酸乙酯部位和95％,80％,60％乙醇部位小血管个数与空白组比较有极显著差异(P＜0.01).结论:云南白药的乙酸乙酯部位、乙醇部位(95％,80％,60％)对CAM新生血管有抑制作用.
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当归注射液、黄芪注射液不同配比促鸡胚绒毛尿囊膜模型血管生成的实验研究
目的:探讨当归、黄芪注射液不同配比对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membmne,CAM)血管生成的影响.方法:种蛋在37.8℃孵育7 d后制备CAM模型,当归、黄芪注射液不同配比滴加于CAM表面的载体上,继续孵育3d,观察鸡胚存活状况,然后制备鸡胚CAM标本,解剖显微镜下计数新生毛细血管数目.结果:当归、黄芪注射液不同配比均具有促进鸡胚CAM血管生成作用,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P<0.05),除当归黄芪1:5,其他各组药效低于表皮生长因子(EGF)(P<0.05).结论:当归、黄芪注射液不同配比具有显著促进鸡胚CAM血管生成作用,其可能的机制是血管内皮细胞的增殖与迁移.
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复方三黄胶囊抑制肿瘤血管生成的活性部位筛选
目的:筛选出复方三黄胶囊抑制肿瘤血管生成的活性部位.方法:采用鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)法进行在体血管抑制实验.结果:①7 d时,将钴60照射过的超微粉碎的复方三黄胶囊粉用不同浓度的乙醇混悬,用20μm的移液枪加到直径5 mm大的紫外线照射的明胶海绵2 d后,明胶海棉周围出现明显的、似"轮辐状"的微细毛细血管,血管数量少于生理盐水对照组(P<0.05),紫杉醇阳性对照组与生理盐水空白对照组没有显著性差异.②将同样处理过的复方三黄胶囊粉用乙酸乙酯提取,再用pH梯度法萃取过的不同部位,做同样的鸡胚绒毛尿囊膜药理实验,明胶海绵周围走行的辐射微血管明显减少,与生理盐水对照组比较(P<0.05),苏拉明阳性对照组与生理盐水空白对照组有显著差异(P<0.01).结论:对比2种不同的提取方式和选用2种不同阳性对照药,乙酸乙酯不同萃取部位的药理实验结果重复性好,实验操作难度小,苏拉明阳性对照组的结果比较稳定(P<0.05).选择乙酸乙酯提取部位和苏拉明做阳性对照具有可操作性和可行性.
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地榆总皂苷对鸡胚血管新生的影响
目的:研究地榆总皂苷对鸡胚血管新生的抑制作用.方法:采用平皿法,观察地榆总皂苷对鸡胚卵黄囊膜( YSM)和绒毛尿囊膜(CAM)血管的作用.结果:给药48h后,空白对照组对鸡胚卵黄囊血管网未见有明显抑制作用,地榆总皂苷高、中剂量组显著抑制鸡胚卵黄囊血管网的发育,使血管走形发生改变,抑制率分别为90％、80％,与空白对照组比均有显著性差异(P＜0.01)；空白对照组CAM新生微血管数目为(56.7±8.6)条,地榆总皂苷高、中剂量组新生微血管数目分别为(13.5±3.7)、(21.7±5.3)条,血管生成受到了明显的抑制,抑制率分别为76.2％、61.7％,与空白对照组比均有显著性差异(P＜0.01).结论:地榆总皂苷能显著抑制鸡胚血管的新生,具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性.
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疏肝活血方含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的:探讨疏肝活血方含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响.方法:取孵育9d的种蛋制成CAM模型,加入低、中、高浓度的疏肝活血方及其拆方的含药血清,继续孵育3d,制备CAM标本,解剖显微镜下计数新生毛细血管数目.结果:与生理盐水对照组比较,疏肝活血方及其拆方的含药血清均能明显增加CAM的一二级血管数量,其中以高浓度组的作用为显著(P＜0.01).结论:疏肝活血方具有较好地促进CAM血管生成的作用.
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黄芪、当归配伍后促鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的药效比较研究
目的:探讨黄芪、当归不同配伍对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane, CAM)新生血管生成的影响.方法:制备CAM模型,观察应用黄芪与当归5∶1配比的含药血清后CAM血管生成的情况.结果:黄芪与当归合用后,在血管生成表现以及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组及其他配比组.结论:黄芪与当归按5∶1配伍具有较好的促进CAM新生血管生成的作用,表明当归补血汤原方配比为佳组合,提示中医自古倡导的方剂配伍原则具有一定的科学内涵.
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柑橘类黄酮诺必擂停对K562裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:观察柑橘类黄酮诺必擂停对K562裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其在抑制肿瘤血管生成方面的作用与机制.方法:构建l(562裸鼠移植瘤模型,25只裸鼠分为模型组、诺必擂停低、中、高剂量组和阳性对照组(n=5).造模24 h后分别给与1%羧甲基纤维素钠溶剂、诺必擂停(12.5,25,50 mg·kg~(-1))和环磷酰胺(20 mg·kg~(-1)),连续给药18 d,处死,取肿瘤称重计算抑瘤率;免疫组化法检测药物对肿瘤组织VEGF表达及MVD的影响;鸡胚绒毛尿囊膜实验测定药物对血管新生的作用.结果:诺必擂停可显著抑制K562裸鼠移植瘤的生长,抑瘤率达36%～58%,与模型组比较有显著差异(P<0.01);能显著降低肿瘤组织内微血管生成:诺必擂停低、中、高剂量组CD34表达均低于模型组(中、高剂量组分别P<0.05,P<0.01);抑制VEGF的表达:诺必擂停低、中、高剂量组VEGF均低于模型组(分别P<0.05,P<0.01和P<0.01);抑制CAM血管新生:2,4 μg作用下CAM微血管数显著低于对照组(P<0.01).结论:诺必擂停可以抑制K562裸鼠移植瘤的生长以及肿瘤血管的生成,其作用机制可能与下调肿瘤组织VEGF的表达有关.
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龙葵抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的研究
目的:探讨龙葵对血管新生的影响.方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型进行研究,在鸡胚培养的第7天,分别给予高、中、低3个剂量(2.5,2.0,1.5 mg·μL-1)的龙葵水提物.培养至第9天收集数据进行评估.结果:龙葵给药组血管新生面积明显小于对照组(P<0.001).病理形态学分析表明,给药组载体下CAM新生组织中新生血管数显著减少,并可见大血管结构破坏迹象.周围CAM组织中仅见少量新生血管.而对照组的载体下组织及周围CAM中均见大量新生血管.结论:龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生.
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巴戟天寡糖促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成研究
目的:探讨巴戟天寡糖(MOO)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响.方法:运用血清药理学的方法制备含药血清.60只鸡胚随机分为MOO低、中、高剂量组及生理盐水(NS)阴性对照组、空白血清对照组、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)阳性对照组,每组10只.孵育7 d后建立CAM模型,将NS、空白血清、bFGF(2 500 U·mL~(-1))、MOO 3种剂量含药血清分别加在CAM表面的载体上,继续孵育3 d后制备cAM标本,观察血管生成表现,并进行新生血管计数.结果:MOO各剂量组与bFGF组血管生成表现明显优于NS组与空白m清组.MOO各剂量组新生血管数目较空白血清组均明显增加(P<0.05),但药效均弱于bFGF组(P<0.05).与MOO低剂量组相比,中、高剂量组新生血管数显著增加(P<0.05),但两者之间无显著性差异.NS组与空白血清组新生血管数目之间无显著性差异.结论:MOO可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生,具有一定的促血管新生作用.
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原儿茶酸衍生物的合成及活性研究
目的:探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)及其衍生物体外清除DPPH自由基活性及对鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)血管新生的影响.方法:利用苄基保护及苄酯水解等相关反应,得到PCA系列衍生物PCA-1,PCA-2,PCA-3,结构经1H,13C-NMR及MS验证,并采用DPPH自由基体外抗氧模型、CAM对PCA及其衍生物的活性进行筛选.结果:PCA及含有邻二酚羟基的PCA-1的体外清除DPPH自由基活性较强；PCA,PCA-3对新生血管有一定的抑制作用,而PCA-2则能促进血管的新生(P＜0.001).结论:PCA分子结构中的邻二酚羟基为体外清除DPPH自由基的活性部位；不含邻二酚羟基,同时有羧基时能增强其促血管新生活性,但需要进一步的实验验证.
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活血化瘀中药对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的观察常用活血化瘀中药赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及复方当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等对鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)新生血管生成的影响.方法制备CAM模型,分别应用赤芍、当归、红花、川芎、丹参、黄芪及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊的含药血清,观察CAM血管生成的情况,同时,设立生理盐水对照组、空白血清对照组、空白对照组及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)阳性对照组.结果所选药物及bFGF皆有促进CAM新生血管生成的作用,其中,丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊等复方在血管生成及血管计数方面,均明显优于生理盐水对照组、空白血清对照组及空白对照组,与阳性对照药bFGF的作用相当;中药复方的作用优于丹参之外的其他单味中药.结论活血化瘀中药丹参及当归补血汤、血府逐瘀汤、芎芍胶囊具有较好的促进CAM新生血管生成的作用.本实验从一个侧面阐明了活血化瘀中药及方剂治疗缺血性疾病的作用机理,同时,研究也体现了中药复方应用的科学依据.
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参麦注射液对血管生成影响的研究
目的:探讨参麦注射液(简称参麦)对血管生成的影响.方法:采用MTT法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞、人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响;琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞迁移的影响.利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察参麦对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.结果:参麦能明显抑制牛内皮细胞增殖,与SMMC-7721比较,差异有显著性;参麦能抑制牛内皮细胞迁移;并可抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成.结论:参麦能抑制血管生成;抑制内皮细胞增殖和迁移可能是参麦抗血管生成的机理之一;同时也说明参麦是一种特异性血管生成抑制剂.
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柴胡皂甙-d对鸡胚血管形成抑制作用的研究
目的 观察柴胡皂甙-d(saikosaponin d, SSd)对鸡胚新生血管形成的作用,并探讨其作用的机制.方法 制备鸡胚绒毛尿囊膜 (chorioallantoic membrane, CAM)模型,86个制备成功,鸡胚开窗后,随机分为4组:SSd大剂量(20 μg/mL)组,16个;SSd中剂量(10 μg/mL)组,19个;SSd小剂量(5 μg/mL)组, 25个;对照(PBS,0.01 mol/L)组,26个.将药物或试剂20 μL置于CAM表面的载体上.3天后,用数码照相机照像记录血管生长情况;HE染色,普通光镜下观察炎性细胞计数;Leica图像分析系统计算血管生成反应阳性率.结果 胚龄第6天时,CAM血管生长呈叶脉状,以载体为中心呈放射状生长,可见血管辐轴,贯穿于载体.加样后SSd各剂量组血管生成明显减少,明胶海绵周围放射状走行的微血管极不明显,可见血管截断、缺如现象.显微镜下SSd各剂量组明胶海绵内及周围CAM间充质内微血管数目及炎性细胞浸润数目均较对照组减少.SSd对中、小血管形成的抑制作用明显(P<0.05, P<0.01),而对大血管形成的抑制作用较弱,和对照组比较(5.06±1.89 vs 5.56±2.38),差异无统计学意义(P>0.05).相关分析显示CAM大血管生成数目与炎性细胞浸润程度未见明显的相关关系(r=0.117,P>0.05);随着炎性细胞浸润数目的 增加,CAM小血管生成明显增多,两者呈显著正相关(r=0.971,P<0.01).结论 SSd能够抑制鸡胚生理性血管生成,对中、小血管生成的抑制作用明显,而对大血管形成未见明显的抑制作用,其机制可能与SSd抑制白细胞的游走、活化作用密切相关.
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麝香保心丸对鸡胚绒毛尿囊膜及培养的血管内皮细胞的促血管生成作用
目的:探讨麝香保心丸在鸡胚绒毛尿囊膜模型及培养的微血管内皮细胞系统中的促血管生成作用.方法:分别以重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,贝复济)和生理盐水为阳性和阴性对照,作用于绒毛尿囊膜(chrioallantoic membrane, CAM),通过一级、二级血管计数,初步评价麝香保心丸的促血管生成活性;并通过观察它对培养的牛肾上腺微血管内皮细胞增殖及管腔结构形成的影响,验证其促血管生成效应;同时检测麝香保心丸作用于培养的人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达及其上清液中VEGF、bFGF含量,初步探索其作用机理.结果:麝香保心丸组CAM上血管数比生理盐水组明显增加;麝香保心丸组内皮细胞及管腔数目均较生理盐水组明显增多,前者细胞表达VEGF和bFGF mRNA明显增高,上清液中VEGF和bFGF含量明显增多.结论:麝香保心丸能促进CAM及培养的微血管内皮细胞的血管生成.
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土鳖虫含药血清对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响
目的 探讨土鳖虫抗肿瘤的可能作用机制.方法 将56枚鸡胚制备成鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,随机分为空白组和土鳖虫含药血清高、中、低剂量组;每组14枚.空白组不处理,土鳖虫含药血清高、中、低剂量组分别加入经灌胃含土鳖虫生药11g/ (kg· d)、8g/ (kg·d)、5.5g/ (kg·d)剂量取得的大鼠土鳖虫含药血清,继续孵育72h后,观察各药物组鸡胚的存活情况、CAM模型的形态变化、CAM模型血管生成数量.结果 加药72h后,各组鸡胚存活率相当.存活鸡胚可见胚胎活动活跃,CAM透明,分布清晰且血管颜色鲜红.死亡鸡胚CAM血管颜色变浅,脉络不清,胚胎活动消失.土鳖虫含药血清高、中、低剂量组新生血管数量均少于空白组(P＜0.05);土鳖虫含药血清高剂量组新生血管数量少于土鳖虫含药血清中、低剂量组(P＜0.05);而土鳖虫含药血清中、低剂量组间新生血管数量比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 土鳖虫抗肿瘤作用可能与其抑制CAM血管生成有关,且大剂量效果更佳.
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青蒿琥酯对新生血管生长与成型影响的实验研究
目的通过观察新生血管生长发育与成型过程的形态学变化,研究青蒿琥酯对新生血管形成的影响.方法采用鸡胚绒毛尿囊膜模型、大鼠主动脉环无血清培养及人脐静脉内皮细胞体外培养,检测青蒿琥酯在新生血管形态发育过程中的作用.结果青蒿琥酯可影响血管内皮生长与实心条索形成,使血管生长期明显滞后,抑制血管生长.结论青蒿琥酯能通过干扰血管生长发育与成型而抑制血管生成.
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血小板衍生膜微粒对鸡胚绒毛尿囊膜血管新生的影响
本研究探讨血小板衍生膜微粒(platelet-derived membrane mieropartieles,PMP)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影响.用凝血酶激活血小板释放出PMP,再经高速离心分离出PMP,用流式细胞仪检定PMP,并用BCA法测定PMP的含量.将PMP接种于鸡胚绒毛尿囊膜上,观察PMP对CAM血管生成的影响.结果显示:当PMP的浓度为80 μg/ml时,孵育72小时后混合纤维素滤膜周围可见到放射状密集生长的血管网,血管分支数为112.5±11.31,血管面积为(6.19 ±1.29)%,而在对照组无特异性密集血管生成,血管分支数为82.6±8.05,血管面积为1.78±0.33,二组比较有显著性差异(p＜0.05);而与VEGF组比较,后者的血管分支数为128.4±10.02,血管面积为7.44±1.36,二组比较差异无显著性.结论:PMP对CAM新生血管的生成有促进作用.
