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地榆总皂苷对鸡胚血管新生的影响
目的:研究地榆总皂苷对鸡胚血管新生的抑制作用.方法:采用平皿法,观察地榆总皂苷对鸡胚卵黄囊膜( YSM)和绒毛尿囊膜(CAM)血管的作用.结果:给药48h后,空白对照组对鸡胚卵黄囊血管网未见有明显抑制作用,地榆总皂苷高、中剂量组显著抑制鸡胚卵黄囊血管网的发育,使血管走形发生改变,抑制率分别为90％、80％,与空白对照组比均有显著性差异(P＜0.01)；空白对照组CAM新生微血管数目为(56.7±8.6)条,地榆总皂苷高、中剂量组新生微血管数目分别为(13.5±3.7)、(21.7±5.3)条,血管生成受到了明显的抑制,抑制率分别为76.2％、61.7％,与空白对照组比均有显著性差异(P＜0.01).结论:地榆总皂苷能显著抑制鸡胚血管的新生,具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性.
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HPLC-ELSD法测定地榆总皂苷中地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ的含量
目的:建立地榆总皂苷中地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ的含量测定方法.方法:以Agilent ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μ m)分离,流速1.0mL/min,柱温40℃;漂移管温度100℃,气体流速3.0L/min;不分流模式;地榆皂苷-Ⅰ的流动相A为甲醇-乙腈(1∶1),流动B为水,梯度洗脱.地榆皂苷-Ⅱ的流动相A为乙腈,流动B为水,梯度洗脱,测定地榆总皂苷中地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ的含量.结果:以该HPLC-ELSD条件进行分析,得到地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ分别在0.4104-4.1040μg(r=0.9997)、50.42-10.08μg(r=0.9987)范围内呈良好的线性关系;测得平均回收率分别为100.72％(RSD=1.45％)、96.78％(RSD=1.75％),地榆总皂苷中地榆皂苷-Ⅰ的含量为84.39％-85.75％,地榆皂苷-Ⅱ含量为3.440％-4.483％.结论:HPLC-ELSD法简便、准确、重现性好,可用于地榆总皂苷中地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ的含量测定.
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地榆总皂苷对巨核祖细胞增殖分化及相关受体表达的影响
目的:观察地榆总皂苷(DYS)对Baf3细胞和32D细胞的促增殖和分化作用,以及对IL-3受体和干细胞因子受体c-kit表达水平的影响.方法:培养依赖IL-3生长的Baf3细胞和32D细胞,在加或不加IL-3条件下,用质量浓度为5,10,20,30,40 mg·L-1的DYS分别处理细胞24,48,72,96 h后,采用CCK8方法检测细胞增殖;并用Giemsa染色检测细胞分化;另以RT-PCR方法检测DYS对Baf3细胞IL-3受体及对32D细胞c-kit表达水平的影响.结果:DYS单独处理细胞48 h,明显促进Baf3细胞和32D细胞增殖;与对照细胞比较,DYS处理32D细胞呈现成簇生长并形成许多大的细胞团;在加入IL-3的条件下,DYS也能明显增强IL-3的促细胞增殖作用.此外,DYS高浓度单独处理32D细胞可明显诱导多倍体巨核细胞数增加,促进巨核细胞分化.在mRNA水平,DYS单独处理细胞也能明显上调IL-3受体和c-kit的表达.结论:地榆总皂苷单独作用能促使2种巨核祖细胞的增殖和分化,其作用与上调IL-3受体和c-kit表达水平有关.
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地榆总皂苷促造血细胞增殖效应研究
目的 观察地榆总皂苷对3种造血细胞Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60的促增殖效应.方法 分别培养依赖血小板生成素(TPO)、红细胞生成素(EPO)和粒细胞集落生长因子(G-CSF)生长的Baf3/Mp1、UT-7和NSF-60细胞,在加或不加细胞因子条件下,用不同质量浓度地榆总皂苷处理细胞72 h后,采用MTT法检测3种细胞的增殖；采用RT-PCR法检测3种细胞因子受体表达水平的变化.结果 地榆总皂苷单独处理细胞72 h,明显促进Baf3/Mp1细胞和NSF-60细胞增殖,但不影响UT-7细胞生长;在TPO和G-CSF存在条件下,地榆总皂苷能分别增强两种细胞因子的促细胞增殖作用.此外,地榆总皂苷能明显增强Baf3/Mp1细胞TPO受体表达,对NSF-60细胞G-CSF受体表达没有影响.结论 地榆总皂苷具有单独或协同细胞因子的促造血细胞增殖作用,其促增殖作用与上调TPO受体的表达有关.
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应用Box-Behnken设计优化地榆皂苷的闪式提取工艺研究
目的 采用Box-Behnken设计进行丁艺优化,研究地榆皂苷的闪式提取工艺.方法 采用闪式提取法,以溶媒用量、乙醇体积分数、提取时间3个因素为主要影响因素,以总皂苷转移率、地榆皂苷1转移率、总评归一值(OD)为评价指标进行Box-Behnken设计试验,考察佳工艺.结果 佳工艺为溶媒用量9倍、乙醇体积分数75％、提取时间2 min,对佳工艺进行验证,结果实测平均值为总皂苷转移率82.20％、地榆皂苷Ⅰ转移率88.73％,RSD分别为1.59％、2.72％,与模型预测值非常接近,说明该模型比较可靠.结论 本方法科学、合理、可行,为进一步地榆制剂研究奠定基础.
关键词： 地榆 闪式提取 Box-Behnken设计 地榆总皂苷 地榆皂苷Ⅰ -
酸水解地榆总皂苷制备地榆皂苷元的工艺优选
目的 优化地榆总皂苷的酸水解工艺,提高水解产物地榆皂苷元的产量.方法 采用正交试验设计,考察盐酸浓度、料液比、水解温度、水解时间对地榆总皂苷水解过程的影响.结果 影响水解的主次因素依次是盐酸浓度＞水解时间＞料液比＞水解温度,优选的佳工艺为料液比1∶200,盐酸浓度为4 mol/L,水解时间0.5 h,水解温度92℃.结论 采用优化后的水解条件能够得到产量较高的地榆皂苷元,适合工业化生产.
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妇科止血灵中间体中地榆总皂苷含量测定
中药妇科止血灵是由熟地、五味子、白芍、地榆、山药等11味中药材组成,具有补肾敛阴,固冲止血之功效,临床用于妇女功能性子宫出血.为了有效地控制中间体的质量,采用分光光度法对方中地榆的总皂苷进行了含量测定,收到了预期的效果,浅述如下:
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地榆总皂苷对小鼠腹水型H22肝癌的抑制作用及机制研究
目的:探讨地榆总皂苷体内抗肿瘤的作用及其机理.方法:通过腹腔接种H22肝癌细胞建立荷瘤小鼠模型,并按体质量随机分为阴性对照组(0.5％ CMC溶液)、阳性对照组(呋喃氟尿嘧啶,120mg/kg)、地榆总皂苷大(4g/kg)、中(2g/kg)、小(1g/kg)剂量组,连续灌胃给药10天后,观察记录60天内动物死亡时间,计算小鼠生存天数及中位生存时间(MST).再通过上述方法建立荷瘤小鼠模型,用地榆总皂苷灌胃给药,连续10天后,抽取小鼠腹水,采用荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡.结果:各组MST分别为14.51、20.2、19.2、21.0、17.5天,阳性对照及各给药组与阴性对照组MST比值分别为139.3％、132.4％、144.8％、120.7％.荧光显微镜下观察发现阴性对照组细胞核呈蓝色,给药组细胞形态改变,细胞核呈致密浓染,有的细胞核呈碎块状致密浓染,颜色发白.地榆总皂苷大、中、小剂量组细胞凋亡率分别为1.05％、1.14％、0.79％,较阴性对照组明显增高(P＜0.05).各给药组细胞发生不同程度凋亡.结论:地榆总皂苷具有明显的体内抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性机理为诱导肿瘤细胞发生凋亡.
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地榆总皂苷体内抗小鼠肿瘤组织微血管生成的实验研究
目的:探讨地榆总皂苷体内抗肿瘤血管生成作用.方法:构建小鼠移植性S180皮下瘤模型,观察地榆总皂苷对荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用；同时解剖瘤组织,采用免疫组化法(IHC)检测地榆总皂苷对小鼠肿瘤组织微血管VEGF表达水平,染色结果采用半定量分析.结果:地榆总皂苷灌胃给药剂量4g/kg、2g/kg、1g/kg对荷S180肉瘤小鼠肿瘤生长抑制率分别为38.65％、30.81％、24.72％,显微镜下观察,地榆总皂苷作用后各组小鼠肿瘤组织微血管数较阴性对照组明显减少,阴性对照组、地榆总皂苷高、中、低剂量组VEGF蛋白IHC染色综合评分分别为11.72±2.34、1.04±0.02、6.83±0.51、9.82±0.43,经统计分析,地榆总皂苷各剂量组IHC染色综合评分较阴性对照组低,差异均有显著性(P＜0.05).结论:地榆总皂苷具有一定的体内抗肿瘤血管生成作用,其作用与抑制肿瘤组织VEGF表达水平有关.
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地榆总皂苷抗肿瘤作用的实验研究
目的 探讨地榆总皂苷体内外抗肿瘤作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测地榆总皂苷对体外培养的肺癌A549、胃癌SGC-7901、肝癌BEL7402等3种人癌细胞株细胞的生长抑制率,计算其半数细胞抑制浓度(IC50值);观察其对小鼠移植性肉瘤S180和肝癌H22模型的抑瘤率;同时进行急性毒性试验.结果 地榆总皂苷对肺癌A549、胃癌SGC-7901、肝癌BEL7402细胞株IC50 分别为122.05、84.04、104.60 μg/ml;灌胃给药剂量4 g/kg对荷肉瘤S180、肝癌H22小鼠肿瘤生长抑制率分别为44.25%、35.06%,2 g/kg对荷肉瘤S180小鼠肿瘤生长抑制率为30.90%;地榆总皂苷小鼠灌胃大给药量未见明显毒性反应.结论 地榆总皂苷体内外均具抗肿瘤作用.
