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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡配体的凋亡效应
目的 研究重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的生物学活性.方法 应用RT-PCR方法检测TRAIL受体(DR4和DR5)表达;细胞数目分析采用CCK试剂盒;细胞凋亡应用PI染色并经流式细胞仪检测;线粒体膜电位观察采用JC-1荧光染料.结果 重组可溶性TRAIL抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;凋亡过程中出现线粒体膜电位的降低.结论 此重组可溶性TRAIL具有诱导细胞凋亡的生物学活性.
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抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞的研究
目的:探讨抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞株的可行性.方法:构建c-FLIPL序列特异性siRNAs表达载体并转染A549细胞抑制c-FLIPL基因表达,化学抑制剂他莫昔芬抑制c-FLIPL蛋白表达.RT-PCR和Western blot法检测c-FLIPL 的mRNA和蛋白表达的变化.Western blot法检测caspase-8的活化情况.流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,MTT法检测联合应用RNAi+rhTRAIL和他莫昔芬+rhTRAIL对A549细胞的杀伤活性.结果:特异性siRNA片段能显著降低A549细胞中c-FLIPL的mRNA水平和蛋白水平.他莫昔芬可以显著抑制c-FLIPL蛋白的表达.两者均可以实现caspase-8的活化,并促进rhTRAIL对A549细胞诱导凋亡作用,凋亡率从2.52%提高到64.5%和59.2%(P<0.05),他莫昔芬和siRNA均可显著促进rhTRAIL蛋白对A549细胞的增殖抑制作用,抑制率分别提高到73.2%和69.5%(P<0.05).结论:靶向抑制FLIP蛋白表达能增加A549细胞对rhTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的研究应用.
关键词： 重组TRAIL蛋白 凋亡抑制基因FLIP A549细胞株 非小细胞肺癌 -
Akt磷酸化在A549细胞抵抗rsTRAIL蛋白诱导细胞凋亡的研究
目的：研究Akt磷酸化抵抗rsTRAIL蛋白诱导肺癌A549细胞株凋亡的作用机制。方法：rsTRAIL蛋白和哌立福新单独和联合作用于细胞株A549，Western blot检测A549细胞中Akt磷酸化水平变化、c-FLIPLL表达水平变化、caspase-8蛋白活化变化情况。流式细胞术进行细胞凋亡检测。 MTT法检测A549细胞增殖率。结果：Western blot结果显示，rsTRAIL蛋白可以导致A549细胞中Akt磷酸化水平的增加，哌立福新能够抑制A549细胞中Akt的磷酸化水平及c-FLIPLL表达水平，增强A549细胞中caspase-8的活化。哌立福新能提升rsTRAIL蛋白诱导A549细胞的细胞凋亡率至（76．5±3．02）％和杀伤活性到（83．2±2．54）％。结论：Akt磷酸化是导致A549细胞对抵抗rsTRAIL 诱导细胞凋亡的重要原因，抑制其活性可以促进rsTRAIL蛋白发挥抗NSCLC的活性。
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顺铂通过抑制RIP活性增强rhTRAIL杀伤肺癌A549细胞
目的 探讨顺铂(DDP)通过抑制受体相互作用蛋白(RIP)增强肺癌细胞 A549 对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的分子机制.方法 Western印迹检测顺铂、Nec-1作用A549细胞后RIP的蛋白表达.MTT法检测联合应用DDP+rhTRAIL和Nec-1+rhTRAIL作用后A549细胞的生长抑制率.Western印迹检测DDP+rhTRAIL和Nec-1+rhTRAIL对 A549 凋亡相关蛋白 caspase-8 的活化情况.流式细胞仪检测DDP+rhTRAIL和Nec-1 +rhTRAIL作用后对A549细胞凋亡的影响.结果 DDP和Nec-1能显著降低A549细胞中RIP的蛋白水平,DDP、Nec-1联合rhTRAIL可以实现caspase-8的活化,促进rhTRAIL对A549细胞的杀伤作用,凋亡率从(5.9 ±4.93)%提高到(60.5 ±4.93)%和(64.1±5.17)%(P<0.01).抑制率分别提高到(65.5±4.93)% 和(76.3±9.52)%(P<0.01).结论 抑制RIP蛋白活性能增加 A549 细胞对 rhTRAIL 诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的应用.
