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2014年成都市售常见香辛料霉菌及真菌毒素污染状况
目的 调查成都市售常见香辛料中霉菌及重要真菌毒素污染状况,为控制该污染提供理论依据.方法 2014年3-9月以分层随机抽样法采集120份成都市农贸市场零售香辛料,按照GB 4789.15-2010《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验》进行霉菌计数,酶联免疫反应试剂盒检测黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素总量、赭曲霉毒素A及伏马菌素B1含量.结果 120份香辛料的霉菌计数平均值为(8.4±1.5)×103 CFU/g,仅3个样品霉菌总数＜100 CFU/g.真菌毒素的检出范围分别是黄曲霉毒素B1(＜ LOQ ～ 92.8μg/kg)、总黄曲霉毒素(＜LOQ ～ 172.7μg/kg)、赭曲霉毒素A(＜ LOQ ～ 59.2 μg/kg)以及伏马菌素B1(＜LOQ ～0.83 mg/kg),黄曲霉毒素B1超标率为59.2%.92.5%的样品至少检出一种真菌毒素,31.7%的样品同时检出3种真菌毒素.结论 2014年成都市售常见香辛料受霉菌及真菌毒素污染状况较为严重.
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血中检测SARS冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用
为明确严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用,通过微量中和试验及酶联免疫方法、间接免疫荧光法检测疑似病人恢复期血清(大于28天)中SARS-IgG抗体,确诊SARS患者.同时收集发病不同时期SARS及普通发热病人血清,利用酶联免疫方法检测SARS-CoV N蛋白,并与荧光定量PCR早期诊断方法相比较.共检测:广州地区2003年12月～2004年1月新发4例确诊SARS患者不同时期的血液和咽漱液标本;恢复期血清SARS-CoV中和抗体阳性病人不同时期的血清46份;广州地区2003年1月～4月临床确诊SARS患者159例的血清和56例疑似患者血清;非SARS普通发热病人血清97份;正常人体检血清100份.结果:4例新发SARS患者的不同时期标本中,3例患者急性期血均检出N蛋白,优于常用的荧光定量PCR检测方法.46份SARS-CoV中和抗体阳性的血清标本,N蛋白检出率为100%.159例临床确诊病例中,发病早期5天以内SARS-CoVN蛋白的检出率为92.3%,随后呈现逐步下降的趋势,在发病第18天仍可检出.56例临床疑似患者发病早期也有23.2%检出率.而97例普通发热病人及100份正常人血清中均未能检测出SARS-CoV N蛋白.表明在血清中检测SARS冠状病毒N蛋白的方法敏感性和特异性都好,对SARS实验室早期诊断具有重要作用.
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国产酶联免疫试剂检测登革热效能评价
目的 评价我国研制的酶联免疫试剂检测登革热病毒的效能,推进国产登革热检测剂的研发. 方法 采用我国研制的酶联免疫试剂对已知登革热NS1阳性血清和阴性血清进行检测,对已知阳性血清中检测阴性的血清和已知阴性血清中检测阳性血清进行PCR扩增,以排除假阴性或假阳性.根据检测结果,计算阳性符合率(真阳性率)、阴性符合率(真阴性率),进行配对资料的x2检验,对试剂盒的灵敏度和特异性等进行综合评估. 结果 国产酶联免疫试剂检测已知登革热患者血清108份均阳性,阳性符合率(真阳性率)为100％,假阴性率为0.检测139份已知阴性血清,其中127份阴性,12份阳性(核酸检测为阴性),阴性符合率(真阴性率)为91.37％,假阳性率为8.63％.检测15份干扰标本均阴性,干扰标本符合率为100％.国产酶联免疫试剂与美国NS1试剂盒检测的总符合率为95.14％,两种方法的检测结果差异有统计学意义(x2=4.6,P＜0.05). 结论 国产酶联免疫试剂检测登革热的灵敏度高,但特异性较美国NS1试剂盒差.
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重组人肿瘤坏死因子-NC在肿瘤患者体内的药代动力学研究
目的:研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-NC)在肿瘤患者体内的药代动力学.方法:入选9例患者,单剂量静脉注射rhTNF-NC 1.0×106IU@m.应用酶联免疫反应(ELISA)检测 rhTNF-NC的血药浓度.结果:rhTNF-NC的量-时曲线符合二室模型.主要的药代动力学参数如下:Cmax为(2.273±3 549)ng@L1,AUC(0-t)为(71.43±82 41)ng@min@L1,t1/2 α为(1.62±1.65)min,t1/2 β为(60.94±50.60)min.Cl为(11 22±12 20)Lmin1.结论:本品药代动力学参数的个体差导较大,不同患者应根据药代动力学特性调整给药剂量和间隔时间.
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HIV检测中高频电磁技术的运用
ELISA通常是在37 ℃水溶箱内反应,操作时间较长,而高频电磁技术利用免疫反应中抗原、抗体结果部分形状互补凹腔内氨基酸侧键的位置要有利于产生各种次级键,同时有序施加的高频电磁波能促使离子迁移和偶极子转动引起免疫分子振动的原理,从而使酶联免疫反应时间有原来的几十分钟甚至数小时减少至10 min内完成.
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男性无症状性病高危人群尿沉渣检测沙眼衣原体
目的:研究能否用尿沉渣代替尿道拭子检测沙眼衣原体(Ct).方法:分别用Wellcozymechlamydia法和PCR法对352例男性无症状的性病高危人群首段尿渣进行Ct检测,两法经尿沉渣、尿道拭子配对研究.结果:以尿道拭子Ct培养为金标准,两种方法的敏感性和特异性分别为50.98%(P＜0.05)和100%(P＞0.05)、98.04%(P＞0.05)和96.68%(P＞0.05).结论:结Ct的检测,用Wellcozymechlamydia法时,不宜用尿沉渣代替尿道拭子作标本,而用PCR法时,可用尿沉渣代替尿道拭子作标本.
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环境雌激素ERC-ELISA检测体系建立
实验研究以及流行病学调查结果表明,环境雌激素对动物雌激素、睾酮等生理作用有明显协同或拮抗干扰效应,是近年来生殖系统畸形、发育异常、代谢紊乱以及某些恶性肿瘤发病率增加的原因之一[1-3].因此,建立快速有效的检测方法对于环境雌激素污染的评估和防治十分重要.前期本实验室建立了一套体外评估雌激素类物质生物学效应的ERC(estrogen receptor-DNA probe complex)-PCR方法[4].利用ERC-PCR体系检测环境雌激素,在形成ERC复合物后,还需进行DNA探针的纯化、荧光定量PCR等较复杂的步骤,整个实验需耗时2天.
关键词： 环境雌激素 雌激素受体 配体-受体-探针复合物 酶联免疫反应 -
nm23-H1在急性白血病患儿血浆中表达水平与化疗耐药及预后的关系
目的:探讨分化抑制因子nm23-H1蛋白在急性白血病患儿血浆中的表达水平与预后的关系.方法:采用酶联免疫法测定分化抑制因子nm23-H1蛋白在80例初治急性白血病(AL)患儿及6例复发的AL患儿、14例持续完全缓解的AL患儿和30例健康志愿者血浆中的含量.结果:nm23-H1在初治及复发的AL患儿中明显高于健康志愿者,持续完全缓解的AL患儿nm23-H1血浆浓度与健康志愿者血浆中的含量无显著差异.耐药组nm23-H1血浆浓度明显高于非耐药组.结论:nm23-H1蛋白在急性白血病患儿血浆中不同病期表达水平不同,高表达者预后差.提示nm23-H1血浆蛋白浓度可能是判断急性白血病患儿预后的一种标志.
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可溶性CD40配体酶联检测试剂盒的研制及其运用
目的:建立灵敏、特异和稳定的人可溶性CD40配体(sCD40L)酶联检测试剂盒.方法:采用鼠抗人CD40L单克隆抗体1B1为包被抗体,识别人CD40L不同位点的单克隆抗体4F1经琥珀酰羟基生物素(BNHS)标记后为检测抗体,建立双抗体夹心的人sCD40L酶联检测方法.在此基础上,测定200例健康供血员血清和血浆中sCD40L的含量.结果:成功研制人sCD40L酶联检测试剂盒,灵敏度为0.5 ng/ml.该试剂盒4℃放置3个月,离散度(CV)＜±6.9%,回收率为94.7%～104.8%,提示该检测系统具有良好的灵敏度、稳定性和准确性,与国外商品化试剂盒的分析结果相似.应用该试剂盒测得的健康供血员血清和血浆sCD40L含量分别为9.56±4.71、2.98±1.13 ng/ml.结论:研制成灵敏、特异和稳定的人sCD40L酶标检测试剂盒,能够对血清和血浆中sCD40L进行准确定量分析,并首次证实血清和血浆中sCD40L水平的差异性.
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口腔鳞状细胞癌患者血清中IL-27的表达及临床意义
目的:检测白细胞介素27(IL-27)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者血清中的表达,探讨其与OSCC临床病理因素的相关性.方法:应用酶联免疫反应(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测40例OSCC患者和20例健康体检者血清中的IL-27水平.采用SPSS1O.O软件包对检测数据进行t检验.结果:OSCC患者血清中IL-27水平显著高于对照组(P＜0.05),临床Ⅲ、Ⅳ期OSCC患者血清中IL-27水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P＜0.05);有颈淋巴结转移患者,血清IL-27水平显著高于无转移者(P＜0.05).结论:血清IL-27水平与口腔鳞状细胞癌的病理分级、临床分期及颈淋巴结转移密切相关.
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口腔鳞状细胞癌患者血清IL-8的表达及临床意义
目的:观察免疫趋化因子白细胞介素8(IL-8)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者血清中的表达,探讨其与OSCC临床病理因素的相关性.方法:应用酶联免疫反应(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定27例处于不同临床分期的OSCC患者和10例健康体检者血清中的IL-8水平.检测结果以-x±s表示,应用SPSS 13.0软件包对数据进行t检验.结果:OSCC肿瘤组患者血清IL-8水平显著高于对照组(P<0.01),临床Ⅲ、Ⅳ期OSCC患者血清IL-8水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.01);有颈淋巴结转移的OSCC患者,血清IL-8水平显著高于无转移者(P<0.01).结论:血清IL-8水平与口腔鳞状细胞癌的病理分级、临床分期及淋巴结转移等密切相关,是一种具有应用潜力的OSCC临床检测指标.
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全自动快速免疫诊断法检测男性尿液中沙眼衣原体抗原
为研究能否用全自动快速免疫诊断(vitekimmunoediagnosticassaysystemchlamydia,VIDASCHL)法检测尿液中沙眼衣原体,采用VIDASCHL法检测262例男性患者尿道拭子及尿沉渣中沙眼衣原体.结果与扩大金标准相比,VIDASCHL检测尿道拭子、尿沉渣敏感性分别为89.09%(P>0.05)、81.82%(P>0.05),特异性分别为99.52%(P>0.05)、99.52%(P>0.05).VIDASCHL法具有高度敏感性和特异性,可用来检测男性尿液中的沙眼衣原体.
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聚乙二醇安替安吉肽单抗制备及血药浓度检测方法的建立
聚乙二醇安替安吉肽是抗肿瘤多肽安替安吉肽的聚乙二醇修饰产物,为了检测血液中聚乙二醇安替安吉肽含量,利用有限稀释法对分泌安替安吉肽的杂交瘤细胞克隆化并进行筛选,将筛选得到的细胞株制备的单克隆抗体用于建立间接竞争ELISA检测血浆中聚乙二醇安替安吉肽含量.经克隆化筛选出的杂交瘤细胞生长迅速,细胞形态圆润,小鼠腹腔注射细胞数量为5 ×105时,d9能收集腹水,收集腹水体积(7.06±0.56) mL,腹水效价1∶5.0×105.利用方阵法确定理想的包被抗原浓度为1∶4000,一抗工作浓度为1∶32000,该方法可检测线性范围为(25 ～3 200) ng/mL,回归方程为y=0.273x-0.277(R2 =0.998 7),并且具有较好的回收率、准确度、精确度,回收率为(96.75 ～97.23)％,准确度为(94.9～95.89)％;日内相对标准偏差、日间相对标准偏差分别为(1.23 ～2.7)％和(2.94～5.82)％.利用ELISA方法测得聚乙二醇安替安吉肽大鼠体内消除半衰期为(23.585±2.214)h,达峰时间(24±0.629)h.由此表明,利用制备的单克隆抗体建立的间接竞争ELISA方法能够特异、可靠的检测聚乙二醇安替安吉肽血药浓度.
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重组蛋白A在大肠杆菌中的分泌表达及活性测定
利用大肠杆菌表达系统表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白A的基因序列进行密码子优化,在N端加入L-门冬酰胺酶( L-AsPsII)信号肽简并基因序列使其分泌表达,将全合成的蛋白A基因片段插入到pET-28a载体中,转化人BL21( DE3).乳糖诱导使其表达,其中80％以上目的蛋白位于胞外,表达量达到375 mg/L,剩余目的蛋白位于周质.将胞外目的蛋白超滤浓缩,通过DEAE阴离子交换剂,一步纯化后得到的蛋白,在SDS-PAGE上显示为约32 k的单一条带,纯度达95％以上.利用酶联免疫吸附试验( ELISA)检测重组蛋白A活性较高,能与小鼠、兔及羊IgG抗体高效结合,且沸水煮10 min后仍能保持同IgG结合的活性.
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5种国产抗-HCV ELISA试剂血清盘考核结果分析
为选择适合本站使用的酶联免疫试剂,每年对该试剂公开招标.由质管科对投标试剂使用卫生部临检中心或中国药品生物制品检定所生产的临床科研血清盘对不同厂家酶联免疫试剂的各项指标进行考核,依据考核结果选择初、复检试剂.现将2011年5个不同厂家(国产)抗-HCVELISA试剂血清盘考核结果报告如下.
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丹参酮Ⅱ-A对抗炎症因子IL-10的调节作用时效关系
IL-10被称为细胞因子合成抑制因子,为体内重要的免疫抑制因子,主要由T细胞产生,其主要的生物学特性是抑制IL-2、IFN-γ、IFN-β的产生,此外也可促进细胞毒性淋巴细胞的诱导,增强B细胞的增殖与分化,产生免疫球蛋白,抑制单核-巨噬细胞抗原传递功能.IL-10是一种研究较为清楚的抗炎症因子［1～3］,可以抑制巨噬细胞中(ROI)和(RNI)的表达［4,5］.它通过反控调节抑制了许多免疫活性细胞因子,间接的参与了Th1反应,从而限制并终抑制了炎症反应［6］.动物模型或临床治疗均表明,利用IL-10对炎症的治疗都有不错的疗效,它可以维持自身免疫系统的稳定,从而保护宿主不被炎症感染.本实验检测了丹参酮Ⅱ-A在刺激RAW264.7细胞过程中,IL-10的含量变化,进而揭示丹参酮Ⅱ-A对IL-10的作用关系.
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PCR-微孔板杂交-ELISA法检测巨细胞病毒感染
建立PCR-微孔板杂交-ELISA法检测人血清标本中巨细胞病毒DNA.将5'端标记生物素的PCR扩增产物与5'端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃ 2min,55℃,1min杂交.杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合显色.本试剂检测灵敏度为2.5×104 copies/mL,比传统PCR和ELISA敏度性高,特异性强,与单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型,风疹病毒、EB病毒、腺病毒核酸无交叉反应,批内CV为8.9%,批间CV为10.5%.该法可用于定性和定量检测HCMV DNA.
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几种常见花生病毒血清学关系的研究
花生是世界上重要的经济作物,中国也是个花生消费大国,但是常有8种重要的花生病毒危害,包括花生斑驳病毒(PMV)、花生条纹病毒(PStV)、花生丛簇病毒(GRV)、花生丛矮病毒(PCV)、蕃茄斑萎病毒(TSWV)、花生芽枯病毒(BNN)、花生矮化病毒(PSV)和黄瓜花叶病毒(CMV).70年代以来在全国各地多次爆发花生病毒病,并引起大面积减产,经济损失巨大,因而花生病毒的检测和转基因花生抗毒株的选育变得尤为重要[1～3].本研究应用免疫双扩散和酶联免疫法(ELISA)对几种花生病毒的血清学关系进行了研究.
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HBsAg ELISA试剂质量抽检结果分析
血液安全主要依靠对献血者的筛选和采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对血液中输血相关病毒抗体和/或抗原的检测[1].为选择适合本血站使用的酶联免疫试剂,使用卫生部临检中心或中国药品生物制品检定所生产的临床科研血清盘对不同厂家酶联免疫试剂的各项指标进行检测,依据检测结果选择初、复检试剂.现将参与招投标的5个不同厂家(国产)HBsAg ELISA试剂血清盘考核结果报告如下.
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成人特发性膜性肾病血清抗M型磷脂酶A2受体抗体与病情的相关性研究
目的 通过研究成人特发性膜性肾病(IMN)血清抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)抗体的阳性滴度与其他实验室指标的相关性,进一步探讨抗PLA2R抗体对IMN诊断及病情评估的作用.方法 选取B超引导下肾穿刺活检证实为IMN患者55例,追踪观察6个月,同时选取15例健康体检者为对照组,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清抗PLA2R抗体,同时对IMN患者24h尿蛋白定量、血清总蛋白、血清白蛋白、血清总胆固醇、血清肌酐进行检测.结果 经过3和6个月治疗后,血清抗PLA2R抗体较治疗前降低(P＜0.05).55例IMN患者治疗前血清抗PLA2R抗体阳性患者47例,阳性率为85.45％;治疗3个月后血清抗PLA2R抗体阳性患者36例,阳性率为65.45％,治疗6个月后血清抗PLA2R抗体阳性患者25例,阳性率45.45％.且治疗前血清抗PLA2R抗体滴度与尿蛋白定量呈正相关,与血清白蛋白、总蛋白呈负相关;治疗6个月后血清抗PLA2R抗体滴度与尿蛋白定量呈正相关,与血清白蛋白、总蛋白呈负相关.结论 血清抗PLA2R抗体可作为IMN血清学诊断的指标之一,血清抗PLA2R抗体滴度下降与尿蛋白的减少密切相关,与疾病预后、病情转归也可能相关.
关键词： 特发性膜性肾病 酶联免疫反应 抗M型磷脂酶A2受体抗体
