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聚乙二醇安替安吉肽单抗制备及血药浓度检测方法的建立
聚乙二醇安替安吉肽是抗肿瘤多肽安替安吉肽的聚乙二醇修饰产物,为了检测血液中聚乙二醇安替安吉肽含量,利用有限稀释法对分泌安替安吉肽的杂交瘤细胞克隆化并进行筛选,将筛选得到的细胞株制备的单克隆抗体用于建立间接竞争ELISA检测血浆中聚乙二醇安替安吉肽含量.经克隆化筛选出的杂交瘤细胞生长迅速,细胞形态圆润,小鼠腹腔注射细胞数量为5 ×105时,d9能收集腹水,收集腹水体积(7.06±0.56) mL,腹水效价1∶5.0×105.利用方阵法确定理想的包被抗原浓度为1∶4000,一抗工作浓度为1∶32000,该方法可检测线性范围为(25 ~3 200) ng/mL,回归方程为y=0.273x-0.277(R2 =0.998 7),并且具有较好的回收率、准确度、精确度,回收率为(96.75 ~97.23)%,准确度为(94.9~95.89)%;日内相对标准偏差、日间相对标准偏差分别为(1.23 ~2.7)%和(2.94~5.82)%.利用ELISA方法测得聚乙二醇安替安吉肽大鼠体内消除半衰期为(23.585±2.214)h,达峰时间(24±0.629)h.由此表明,利用制备的单克隆抗体建立的间接竞争ELISA方法能够特异、可靠的检测聚乙二醇安替安吉肽血药浓度.