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重组人肿瘤坏死因子-α体内外对HL-60细胞作用的研究
为了研究重组人肿瘤坏死因子-α(recombinant human tumor necrosis factor-alpha,rhTNF-α)在体外及体内对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的作用,应用MTT法和集落形成试验测定HL-60细胞的增殖抑制,采用AO/EB荧光染色法、流式细胞术和TdT酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞;利用HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型观察给药后瘤体重量、组织病理的改变,并采用透射电镜以及TUNEL法检测瘤组织细胞的凋亡.结果表明:rhTNF-α对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;AO/EB染色后可见rhTNF-α处理组HL-60细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片,呈现凋亡表象;流式细胞术显示随着rhTNF-α浓度的增加,细胞凋亡阳性率逐渐增高;TUNEL法检测显示,3 200 U/ml rhTNF-α作用于HL-60细胞48小时凋亡阳性率可达37.5%.在体内,rhTNF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率高可达60.33%;病理检查发现,rhTNF-α处理组的瘤组织有程度不等的出血坏死区域;透射电镜及TUNEL法检测表明,处理组的瘤组织可见有较多凋亡细胞.结论:rhTNF-α在体内、外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡.
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腹腔恶性积液首次治疗中重组人肿瘤坏死因子的临床疗效
目的 研究重组人肿瘤坏死因子在腹腔恶性积液首次治疗中的应用效果.方法 选取病历资料完整的腹腔恶性积液患者60例,录入计算机随机对照系统分为观察组和对照组,每组30例,观察组采用重组人肿瘤坏死因子+深部热疗治疗,对照组则采用灌注化疗+深部热疗;比较两组疗程结束后临床效果、生活质量和安全性.结果 观察组首次治疗总有效率为73.33％,对照组首次治疗总有效率为46.67％,组间比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);观察组生活质量评分各项因子均高于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P﹤0.01);两组主要不良反应为恶心呕吐、失眠以及腹泻,观察组不良反应轻于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 重组人肿瘤坏死因子用于腹腔恶性积液治疗中取得显著成效,耐受性高,安全性高,在临床治疗中有广阔前景.
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重组人肿瘤坏死因子隐形纳米粒的制备及其稳定性
目的制备3种不同粒径和表面为3种不同分子量(2 000,5 000和10 000)的单甲氧基聚乙二醇(MePEG)修饰的重组人肿瘤坏死因子隐形纳米粒,考察纳米粒胶体溶液的稳定性.方法合成载体材料聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯(MePEG-PHDCA)和聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PHDCA),用FTIR,1HNMR,13CNMR和GPC技术对其表征.以均匀设计法优化制备各类隐形和普通纳米粒.将纳米粒胶体溶液在2-8℃存放4周,观察粒径变化.结果 FTIR,1HNMR,13CNMR图谱与MePEG-PHDCA和PHDCA的结构相符,GPC表明两类载体材料分子量分布较窄.纳米粒包封率较高,粒径分别约为80,170和240 nm.4周内,纳米粒粒径未见显著变化.结论MePEG-PHDCA和PHDCA合成成功.制备的纳米粒在水溶液中不易发生显著聚集、整体溶蚀或表面溶蚀降解,纳米粒稳定性较好.
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重组人肿瘤坏死因子-NC在肿瘤患者体内的药代动力学研究
目的:研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-NC)在肿瘤患者体内的药代动力学.方法:入选9例患者,单剂量静脉注射rhTNF-NC 1.0×106IU@m.应用酶联免疫反应(ELISA)检测 rhTNF-NC的血药浓度.结果:rhTNF-NC的量-时曲线符合二室模型.主要的药代动力学参数如下:Cmax为(2.273±3 549)ng@L1,AUC(0-t)为(71.43±82 41)ng@min@L1,t1/2 α为(1.62±1.65)min,t1/2 β为(60.94±50.60)min.Cl为(11 22±12 20)Lmin1.结论:本品药代动力学参数的个体差导较大,不同患者应根据药代动力学特性调整给药剂量和间隔时间.
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胸腔置管灌注重组人肿瘤坏死因子治疗肺癌恶性胸腔积液观察
目的 评价重组人肿瘤坏死因子(rmhTNF)与顺铂(DDP)治疗晚期肺癌患者癌性胸腔积液的近期治疗效果及毒副作用.方法 56例晚期肺癌患者,随机分为两组.每组28名患者.观察组采用mTNF 1 500万U加生理盐水20 ml胸腔内注入.对照组采用顺铂60 ml+生理盐水20 ml胸腔内注入.结果 观察组28例病人总有效率82.15%.有3例出现低热,4例轻度胸痛,未经特殊处理自行消失.结论 重组人肿瘤坏死因子治疗癌性胸腔积液缓解率高,副作用较轻.
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重组人肿瘤坏死因子协同脐血CD3AK细胞诱导K562细胞凋亡的实验研究
TNa能杀伤或抑制某些肿瘤细胞,低浓度TNFa的生物学活性主要为抗肿瘤、抗感染和引起炎症反应,若大量TNFα进入血流,可引起全身性反应.我们对TNFa、脐血CD3AK细胞诱导K562细胞凋亡的作用进行了研究.
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重组人肿瘤坏死因子治疗87例中晚期恶性肿瘤
目的:评价重组人肿瘤坏死因子(rnhTNF)对中晚期恶性肿瘤的临床疗效,观察rnhTNF的不良反应.方法:随机分为联合组(A组)48例和单纯化疗组(B组)22例;另设单纯TNF组(C组)17例.A组:化疗同时肌肉注射rnhTNF 400万U/m2,第1～7天和第11～17天.21天为一周期,连用两个周期.B组:仅给予化疗,剂量和化疗周期同A组.C组:仅肌肉注射rnhTNF治疗,剂量和给药方法同A组.结果:A组有效率(CR+PR)为18.75%(9/48),B组为0(0/22),C组为0(0/17);A组与B组治疗前、后KPS评分和治疗前、后KPS评分差值,均无明显变化.A组第1、2周期与TNF有关的不良反应发生率为87.50%(42/48)和91.70%(44/48),C组与TNF有关的不良反应发生率为100%(17/17),但两组差异无显著性.结论:rnhTNF联合化疗治疗肺癌、头颈部癌、消化道癌、泌尿系恶性肿瘤等有一定的疗效,无严重的不良反应.
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甲氨蝶呤联合重组人肿瘤坏死因子治疗类风湿关节炎的疗效观察
目的：研究甲氨蝶呤联合重组人肿瘤坏死因子治疗类风湿关节炎的疗效。方法选取2013年2月—2014年6月于攀枝花市中心医院就诊的类风湿关节炎患者120例，随机分为对照组与观察组，各60例。对照组患者予以甲氨蝶呤治疗，观察组患者在对照组基础加用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体—抗体融合蛋白治疗。观察两组患者治疗前与治疗第2、4、8、12周的临床症状评分、临床疗效及不良反应情况。结果治疗前两组患者关节疼痛、关节压痛指数及关节肿胀度评分比较，差异无统计学意义（ P>0.05），治疗第2、4、8、12周观察组患者关节疼痛、关节压痛指数及关节肿胀度评分低于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05），观察组患者总有效率高于对照组（ P<0.05），两组患者不良反应发生率均为33.3%，差异无统计学意义（ P>0.05）。结论甲氨蝶呤联合重组人肿瘤坏死因子治疗类风湿关节炎的疗效显著，可有效改善临床症状，且不良反应少。
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新型重组人肿瘤坏死因子的临床应用及护理
由中国人民解放军第二军医大学研制的新型重组人肿瘤坏死因子(简称"rhTNF-NC")是一种具有高活性、低毒性的生物制剂,因其能够直接杀伤肿瘤细胞具有较强的抗肿瘤作用而得到人们的重视.
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rhTNF联合环磷酰胺对胶质瘤的靶向作用
目的:探讨重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)联合环磷酰胺(CTX)对胶质瘤的靶向作用,并阐明其作用机制.方法:构建C6胶质瘤大鼠模型,将大鼠分为rhTNF组(n=10)、CTX组(n=10)及rhTNF-Dex-CTX组(n=10).免疫荧光法观察肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)在胶质瘤组织中的表达；利用125I-rhTNF,通过放射配基结合受体分析法检测大鼠脑组织和胶质瘤组织中rhTNF水平；ELISA法检测大鼠脑组织和胶质瘤组织中CTX水平；观察rhTNF、CTX及rhTNF-Dex-CTX偶联物对胶质瘤大鼠生存时间的影响.结果:TNFR1在胶质瘤细胞中的表达明显高于肿瘤血管内皮细胞.rhTNF在胶质瘤组织中与TNFR1的结合量明显高于正常脑组织(P＜0.01).CTX组大鼠脑组织和胶质瘤组织中CTX水平均较低；与CTX组和大鼠正常脑组织比较,rhTNF-Dex-CTX组大鼠胶质瘤组织内CTX的水平明显升高(P＜0.01).与CTX组和rhTNF组比较,rhTNF-Dex-CTX组大鼠的生存时间明显延长(P＜0.01).结论:rhTNF-Dex-CTX可能是通过TNFR1增强CTX对胶质瘤的靶向作用.
关键词： 胶质瘤 重组人肿瘤坏死因子 环磷酰胺 rhTNF-Dex-CTX偶联物 -
重组人肿瘤坏死因子调节端粒酶活性的体外研究
目的研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)对端粒酶活性的调节作用.方法将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1-6细胞,以TRAP-ELISA方法测定其端粒酶活性;采用Lipofect 脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位-端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞,2 h后加入不同浓度的rhTNF,孵育48 h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性.结果在10～1000 IU/ml浓度范围内,rhTNF可抑制端粒酶活性,同时在该浓度范围内,rhTNF可显著抑制hTERT启动子的表达,其抑制作用与rhTNF剂量呈正相关.结论 rhTNF杀伤肿瘤细胞的机制可能与其抑制hTERT的表达有关.
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重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a(rh-TNFαD3a)联合化疗药物治疗晚期恶性肿瘤临床研究
天然肿瘤坏死因子(natural tumor necrosis factor,nTNF)是激活的单核-巨噬细胞所产生的一种细胞素.由于nTNF的用量大和毒性作用强,其在临床的应用受到限制[1],因此国内外学者均广泛应用基因或蛋白工程技术对天然肿瘤坏死因子(nTNF)进行改造构以期降低其毒副作用,增加临床疗效.第二军医大学应用蛋白质工程技术改造nTNF制成的重组改构人肿瘤坏死因子α衍生物3a(rhTNFαD3a)为具有高活性,低毒性的基因工程TNF.根据国家卫生部(98)制申体第09号文件批示,由天津市肿瘤医院临床药理基地组织对常州药业股份有限公司申报的rh-TNFαD3a进行Ⅲ期临床观察.现将我们3家医院研究结果报告如下.
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Lys-2-rhTNFα及125Ser-rhIL-2促进小鼠腹腔
研究了Lys-2-rhTNFα(1)及 125Ser-rhIL-2(2)对小鼠腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤的促进作用.2单用能激活小鼠巨噬细胞对小鼠肥大细胞瘤P815的细胞毒性,1单独无此作用,但与2联合使用能促进2对巨噬细胞的激活作用.腹腔非粘附细胞的存在是2或2联合1激活巨噬细胞活性的重要条件.
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我校获五项上海市优秀发明选拔赛发明壹等奖
在不久前揭晓的上海市2000年优秀发明选拔赛上，我校申报的五项职务发明获得发明壹 等奖。这些项目分别是基础部焦炳华教授的“新型重组人肿瘤坏死因子衍生物及其制法”、 长海医院骨科张春才教授的“镍钛形状记忆接骨器”、石志才主治医师的“碳纤增强聚醚醚 酮螺柱状颈椎内固定器”、长征医院骨科侯春林教授的“医用几丁糖”和消化内科张忠兵教 授的“多功能腹膜检查针”，其中“医用几丁糖”还获得了产品实施金奖。*论 著*
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重组人肿瘤坏死因子逆转慢性髓性白血病细胞耐药机制研究
目的 研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-NC)逆转人慢性髓性白血病耐阿霉素(Dox)细胞株(K562/ Dox)耐药及机制.方法 应用MTT法测定不同浓度rhTNF-NC处理的肿瘤细胞对0～20 μmol/L Dox的敏感性.通过流式细胞仪观察rhTNF-NC对细胞内药物蓄积的影响.半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分析rhTNF-NC处理耐药细胞后对多药耐药基因(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)和拓扑异构酶(TopoⅡα) mRNA、P糖蛋白(P-gp)及蛋白激酶C(PKCα)表达的变化.结果 rhTNF-NC对K562/ Dox的耐药性具有明显的逆转作用.rhTNF-NC在500、2500和5000 U/mL浓度时,其联用的Dox半数肿瘤生长抑制浓度(IC50)分别为2.22±0.34、1.41 ±0.13和1.04±0.09 μmol/L,增强K562/Dox细胞对Dox敏感性的倍数分别为2.51,3.94和5.33,与单用Dox比具有统计学差异(P＜0.05).rhTNF-NC处理细胞1h后,Dox在细胞内蓄积量明显增加,并呈浓度依赖性.rhTNF-NC作用下,MDR1的mRNA和蛋白表达为与时间和浓度相关的显著降低,GST-π和TopoⅡ α的mRNA表达水平分别降低和升高.此外PKCα蛋白表达也被抑制,提示多种机制参与肿瘤多药耐药.结论 rhTNF-NC通过影响MDR1、MRP、GST-π、TopoⅡα及PKCα基因或蛋白的表达促使K562/Dox细胞内药物蓄积,逆转K562/Dox细胞多药耐药.
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MTT法测定三种基因工程细胞生长因子生物学活性方法研究
目的:对MTT法测定重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-α)等基因工程细胞生长因子生物学活性进行方法学研究.方法:分别培养NFS-60、L929、TF-1细胞,用MTT进行染色后,用450型酶标读数仪在570mm处测定OD值.结果:确定了不同细胞株对MTT的佳染色浓度、染色时间和回归关系及线性范围,找出了用MTT法测定rhG-CSF、rhGM-CSF、rhTNF-α等基因工程细胞生长因子生物学活性的灵敏度范围及线性回归关系.结论:为将(k,k)法用于MTT法测定基因工程细胞生长因子生物学活性奠定了基础.
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p16在重组人肿瘤坏死因子诱导的HepG2肝癌细胞凋亡中的作用研究
目的:研究p16在重组人肿瘤坏死因子(rmhTNF)诱导的肝癌细胞凋亡中的作用.方法:用rmhTNF处理肝癌细胞,以流式细胞仪检测细胞周期变化,蛋白免疫印迹检测细胞内p16的表达变化.用siRNA干扰p16的表达后,再予流式细胞仪检测细胞的凋亡变化.结果:rmhTNF可以诱导肝癌细胞HepG2的凋亡,同时也可以诱导p16的表达的增加.干扰p16的表达可以逆转由肿hTNF诱导的肝癌细胞的凋亡.结论:p16在rmhTNF诱导的肝癌细胞的凋亡中发挥着重要的作用.
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益赛普治疗类风湿关节炎49例护理体会
益赛普是我国第一个人源化单克隆抗体药,即重组人肿瘤坏死因子α受体-抗体融合蛋白,于2005年11月上市,在国内应用时间不长.2007年5月～2008年8月,我们应用益赛普治疗类风湿关节炎(RA)49例,现将护理体会报告如下.
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重组人肿瘤坏死因子-α对Lewis肺癌移植小鼠体内肿瘤细胞抑制的作用
目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Lewis肺癌移植瘤小鼠体内肿瘤细胞生长的抑制作用及对细胞增殖与凋亡的影响.方法 建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型18只,按随机数字法分为高浓度TNF-α治疗组、低浓度TNF-α治疗组和对照组,每组6只,分别给予TNF-α18.5×107μmol/L、9.25×107μmol/L和0.2ml等体积的生理盐水,于接种后第7天腹腔内1次给药,观察TNF-α对Lewis肺癌移植瘤体积变化和瘤重的影响.22 d后用流式细胞仪检测细胞凋亡,以免疫组织化学法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)及生存素(Survivin)基因的蛋白表达.结果TNF-α治疗组小鼠的肿瘤生长速度逐渐减缓,高浓度TNF-α组明显受抑,而生理盐水对照组小鼠的肿瘤生长速度较快,各组两两比较,肿瘤平均体积之间差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-α高、低浓度组的抑瘤率分别为56.37％和20.19％,TNF-α高浓度组的抑瘤率明显高于低浓度组,差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-α高、低浓度组的凋亡率与生理盐水对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).bcl-2和Survivin在对照组的表达水平较高,其阳性率为(71.63±10.95)％、(20.57±5.03)％,TNF-α治疗组的bcl-2、Survivin的表达水平明显降低,以高浓度组为显著,其阳性率仅为(29.00±15.00)％、(8.64±3.21)％,两组之间的表达率差异有统计学意义(t=-5.523,P＜0.01;t=-2.802,P＜0.05).结论TNF-α可明显抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长,其机制可能与下调bcl-2及Survivin蛋白的表达促进细胞凋亡有关.
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重组人肿瘤坏死因子α衍生物治疗鼠脑胶质瘤
目的探讨重组人肿瘤坏死因子α衍生物(rhTNF-α)治疗鼠脑胶质瘤的有效性.方法通过改造人肿瘤坏死因子α形成rhTNF-α,体外培养鼠脑胶质瘤细胞,加入不同浓度rhTNF-α,MTT法测定细胞存活率,颅内立体定向种植C6细胞制成鼠脑胶质瘤模型,10天后MRI增强测量肿瘤大小,腹腔注射rhTNF-α,治疗后第8天、15天、21天分别用MRI增强测量肿瘤大小.结果体外实验:加入rhTNF-α 5天后,大部分C6细胞死亡,细胞存活率随rhTNF-α的递增而降低.体内实验,治疗8天后肿瘤即开始缩小,治疗21天后,MRI未见明显肿瘤强化灶.结论 rhTNF-α能有效治疗鼠脑胶质瘤.
