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抗-SSA/Ro抗体三种检测方法的比较
目的 比较酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫双扩散(ID)和免疫印迹(IB)3种方法检测抗-SSA/Ro抗体,评价3种方法的符合度,同时提高IB检测相对分子质量52 000条带的认识.方法 采用ELISA法、IB法及ID法检测以下3组对象的抗-SSA/Ro抗体水平:正常献血员血清122份;实验室常规检测血清7736份;诊断明确结缔组织病血清166份.结果 (1)正常献血员122份血清ELISA、ID和IB检测抗-SSA/Ro抗体全部阴性;(2)实验室常规检测的7736份血清,IB检测相对分子质量52 000阳性1085例,其中抗核抗体和其他抗-ENA抗体均阴性的有92份,该组病人经过ID和ELISA两种方法检测全部阴性;(3)结缔组织病组166例,ELISA、ID和IB检测抗-SSA/Ro抗体的阳性率分别是76.5%(127/166),65.1%(108/166),49.4%(82/166);(4)结缔组织病166份血清中,ELISA和ID两种方法检测的符合率88.6%(147/166),两种方法的比较,χ2=17.1,P＜0.001;ID和IB两种方法检测的符合率为75.9%(126/166),两种方法的比较,χ2=15.6,P＜0.001;(5)ELISA和ID进行Spearman等级相关分析,相关系数为0.828,P＜0.001.结论 (1)ELISA和ID特异性优于IB.(2)IB特异性较差,但如果同时ANA和或抗-ENA其他条带阳性,特异性会显著提高.(3)ELISA敏感性优于ID,ID敏感性优于IB.(4)ELISA和ID结果在数值上存在显著的正相关关系.
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高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定
目的 制备高效价的抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)兔血清.方法 分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径(肌肉、皮下、腹腔)免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性.结果 未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶108,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1:2000稀释后荧光强度＞++时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～ 1280652 U/ 0.2ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高.结论 获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件.
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免疫双扩散与免疫印迹检测抗Sm抗体对系统性红斑狼疮诊断价值的比较
目的：比较免疫双扩散(ID)与免疫印迹(IRT)法检测抗Sm抗体对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法：抗Sm抗体阳性的228份病例分为3组：①ID法阳性组；②IBT法阳性组；③2种方法均阳性组。分别计算和比较它们与SLE临床诊断的符合率。结果：①ID法检测阳性131例，111例(85％)为SLE，20例(15％)为其他结缔组织病(CTDs)。②IBT法检测阳性150例，53例(35％)为SLE，66例(44％)为其他结缔组织病(CTDs)；3l例(21％)为非结缔组织病。③ID和IBT检测结果均阳性53例，诊断全部是SLE，2种方法阳性符合率23．2％。④ID法检测抗Sm抗体阳性组与IBT法出现Mr为28000，29000，13 500蛋白条带组，两组间比较SLE所占百分率差异有显著性(P<0．001)。结论：ID法较IBT法检测抗Sm抗体更具特异性，2法结合检测抗Sm抗体较为可靠。
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几种常见花生病毒血清学关系的研究
花生是世界上重要的经济作物,中国也是个花生消费大国,但是常有8种重要的花生病毒危害,包括花生斑驳病毒(PMV)、花生条纹病毒(PStV)、花生丛簇病毒(GRV)、花生丛矮病毒(PCV)、蕃茄斑萎病毒(TSWV)、花生芽枯病毒(BNN)、花生矮化病毒(PSV)和黄瓜花叶病毒(CMV).70年代以来在全国各地多次爆发花生病毒病,并引起大面积减产,经济损失巨大,因而花生病毒的检测和转基因花生抗毒株的选育变得尤为重要[1～3].本研究应用免疫双扩散和酶联免疫法(ELISA)对几种花生病毒的血清学关系进行了研究.
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免疫印迹法检测可提取核抗原多肽抗体的评价
目的评价免疫印迹法(IB)检测可提取核抗原(ENA)多肽抗体的性能.方法以检测抗ENA抗体中的抗U1RNP抗体为研究对象,用免疫印迹法(IB)和免疫双扩散法(ID)分别进行检测,以高特异的ID法检测结果为对照,统计IB法的符合率.结果用IB法检测抗U1RNP抗体有7种不同的蛋白质排列组合,其中以73,32,17.5 kDa三条蛋白带同时出现与ID法的符合率高(84.1%),而32 kDa的符合率低(30.7%),这两组的差异显著(P＜0.01).结论单独采用IB法检测抗ENA抗体尚欠可靠,须结合其它方法,取长补短,提高ENA抗体检测的敏感性、特异性.
关键词： 免疫印迹 可提取核抗原多肽抗体 免疫双扩散 抗U1RNP抗体 -
SIgA分泌片分离、纯化研究
为了研究SIgA分泌片(Secretory component,SC)分离、纯化及鉴定方法,以SC存在游离和结合两种形式,本研究应用凝胶过滤和盐析法直接从初乳中分离纯化游离SC,并进行鉴定.分离纯化获得蛋白溶液12.4ml,蛋白含量0.85 mg/ml,免疫双扩仅与抗SC多克隆抗体(PcAb)反应,分子量约75 kD,免疫印迹实验与抗SC单克隆抗体(McAb)和PcAb特异反应,表明纯化蛋白为SC.该SC的分离纯化和鉴定处于不断完善之中,其方法的改进有利于获得更纯的SC,值得粘膜免疫研究者借鉴.
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免疫双扩散和免疫印迹法检测抗Jo-1抗体对肌炎诊断价值的比较
目的比较免疫双扩散(ID)及免疫印迹(IBT)法检测抗Jo-1抗体对多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)的诊断价值.方法抗Jo-1抗体阳性的33份病例分为三组:①ID法阳性组;②IBT法阳性组;③两种方法均阳性组.分别计算和比较它们与PM/DM临床诊断的符合率,并对抗Jo-1抗体阳性PM/DM的临床特点作简要描述.结果①ID法检测阳性20例,17例(85%)为PM/DM,其中12例(60%)为PM,5例(25%)为DM;3例(15%)为其他结缔组织病( CTDS ).②IBT法检测阳性20例,7例( 35 %)为PM/DM,其中4例( 20% )为PM,3例( 15% )为DM;7例( 35% )为其他结缔组织病( CTDS );6例( 30% )为非结缔组织病.③ID和IBT检测结果均阳性7例,诊断全部是PM/DM,其中4例(57.1%)为PM,3例(42.9%)为DM.④ID法检测抗Jo-1抗体阳性组与IBT法出现55KD蛋白条带组,两组间比较,PM/DM所占百分比有非常显著性差异(P=0.0012).结论 ID法较IBT法检测抗Jo-1抗体更具特异性,两法结合检测抗Jo-1抗体较为可靠.
