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人乳腺癌细胞化疗敏感性与相关基因表达的关系
目的 探讨人乳腺癌细胞化疗敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系.方法 MTT法检测5株人乳腺癌细胞株Bcap37、MCF-7、T47D、MDA-MB-231和MDA-MB-435对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性.流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-GP)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和凋亡调控基因FAS、BCL-2、P53和P16的表达.结果 不同人乳腺癌细胞株对同一药物敏感性差异较大.相关分析表明,细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达呈正相关(P＜0.01),对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关.结论 人乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性与P16表达有关.
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X线照射对人鼻咽癌细胞株MRP基因和MRP表达的影响
化疗药物可以诱导肿瘤细胞多药耐药相关基因(MRP基因)及其蛋白(MRP)的过度表达,从而产生多药耐药,导致化疗疗效降低[1-2].放疗也能引起肿瘤细胞的MRP基因和MRP表达增强[3],但照射后肿瘤细胞MRP基因和MRP表达随时间的变化情况,目前少见报道.本研究采用体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞株,检测照射前、后细胞MRP基因和MRP的表达随时间变化情况以及细胞对顺铂(DDP)敏感性的变化,从而探讨照射与鼻咽癌多药耐药性的关系.
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耐药相关基因与肿瘤药敏试验对反映小细胞肺癌治疗效应的意义
目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)多药耐药(MDR1)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达与肿瘤药敏试验之间的相关性及其临床指导意义.方法:56例NSCLC(已手术)进入研究,药敏方法采用磷脂结合蛋白V(annexin V)联合碘化丙啶(PI)双参数法,耐药基因MDR1、GST-π、MRP采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果:各抗癌药物的平均抑瘤率分别为:紫杉醇(14.6±12.3)%,顺铂(21.7±12.2)%,去甲长春花碱(8.3±13.2)%,丝裂霉素(11.3±15.2)%,鬼臼乙叉甙(10.7±18.1)%,双氟胞苷(13.2±10.8)%,长春碱酰胺(6.6±11.3)%,长春新碱(7.4±7.7)%.耐药基因阳性率分别为MDR1 64.3%,MRP 42.8%,GST-π 46.4%.耐药基因MRP、GST-π阳性和阴性表达与病理类型和期别间未见明显相关;腺癌MDR1阳性表达组明显高于阴性表达组(P＜0.05).MDR1耐药基因阳性和阴性表达与肿瘤的药敏未见相关性.MRP阳性表达者对去甲长春花碱、长春碱酰胺、长春新碱和丝裂霉素的肿瘤抑制率显著低于阴性表达组(P＜0.05).耐药基因GST-π阳性表达者对顺铂、去甲长春花碱、丝裂霉素的抑瘤率显著低于阴性表达组(＜0.05).结论:肺癌耐药基因GST-π、MRP表达阳性与部分化疗药物的肿瘤药敏存在相关性,其对临床化疗药物的选择具有一定指导作用.
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热疗对胃癌细胞株化疗敏感性的影响
目的：探讨热疗时胃癌细胞株对紫杉醇（paclitaxel ，TAX）敏感性的变化。方法：用对TAX敏感的胃癌细胞株MKN-45经浓度梯度递增法建立胃癌 TAX耐药细胞株，命名为 MKN-45/TAX。采用免疫细胞化学染色法检测 MKN-45/TAX和MKN-45细胞中多药耐药相关基因（multi-drug resistance gene ，MDR1）的表达；采用CCK-8法检测不同温度和不同 TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率；采用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction ，RT-PCR）法、蛋白质印迹（Western blotting）法检测经靶向siRNA处理前后MDR1 mRNA和P糖蛋白（P-glycoprotein ，P-gp）的表达。结果：成功建立MKN-45/TAX。MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。随着紫杉醇浓度的增加，其对MKN-45及MKN-45/TAX的增殖抑制率增加；42℃时紫杉醇对MKN-45/TAX的增殖抑制率降低，而对MKN-45的增殖抑制率则升高。转染MDR1 siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降。结论：热疗联合化疗可增强耐药胃癌细胞株对TAX的耐药性，而增强敏感胃癌细胞株对TAX的敏感性，其机制可能与MDR1表达有关。
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人肺癌细胞株化疗敏感性与基因表达的关系
目的探讨人肺癌细胞株对化疗药物的敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系.方法采用MTT法检测5株肺癌细胞SPCA1、NCI-H446、 SH-77、95C和95D对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性.流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和Fas 、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达.结果不同肺癌细胞株对同一药物敏感性有较大差异.相关分析显示,肺癌细胞株对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达呈负相关,P值分别为0.040和0.030,GST-π和bcl-2的表达水平较高者,MMC的IC50较高,敏感性较低;对DDP的敏感性与p53蛋白表达水平呈负相关(P=0.036);对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关(P>0.05).结论人肺癌细胞株对不同化疗药物敏感与否有不同的机制,对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达有关,对DDP的敏感性与p53的表达有关.
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肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因的克隆与鉴定
目的：克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法：将肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）作为实验方，肺腺癌细胞（SPC-A-1）作为对照方，应用抑制消减杂交技术，构建实验方特异表达cDNA消减文库；用斑点杂交法初步筛选cDNA消减文库后，将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析（Genbank），对新的cDNA序列进行Northern blot杂交验证。结果：建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）特异表达cDNA消减文库，斑点杂交法初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDDP特异表达cDNA片断，测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列，其余cDNA片断与已知基因有93％～100％的同源性，Northern blot杂交结果表明2个新的cDNA片断来自SPC-A-1/CDDP细胞。结论：2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列；抑制消减杂交法是克隆特异表达基因的有效方法。
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应用抑制消减杂交（SSH）克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因
目的 克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法 将肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）作为实验组，肺腺癌细胞（SPC-A-1）作为对照组，应用抑制消减杂交技术，构建实验组特异表达cDNA消减文库；用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后，将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析（Genebank）。结果 建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（SPC-A-1/CDDP）特异表达cDNA消减文库，斑点杂交初步筛选显示23个克隆中有SPC-A-1/CDDP特异表达cDNA片断，测序和同源性分析表明2个cDNA片断为新序列，其余cDNA片断与已知基因有96%～100%的同源性。结论 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列；抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。
