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X线照射对人鼻咽癌细胞株MRP基因和MRP表达的影响
化疗药物可以诱导肿瘤细胞多药耐药相关基因(MRP基因)及其蛋白(MRP)的过度表达,从而产生多药耐药,导致化疗疗效降低[1-2].放疗也能引起肿瘤细胞的MRP基因和MRP表达增强[3],但照射后肿瘤细胞MRP基因和MRP表达随时间的变化情况,目前少见报道.本研究采用体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞株,检测照射前、后细胞MRP基因和MRP的表达随时间变化情况以及细胞对顺铂(DDP)敏感性的变化,从而探讨照射与鼻咽癌多药耐药性的关系.
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EGCG通过上调MnSOD表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡
目的:探讨表没食子儿茶素没食酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用、以及这个过程中MnSOD的表达变化特点.方法:应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR法检测这个过程中MnSOD mRNA的表达变化.结果:EGCG可以诱导CNE-2细胞凋亡、抑制其生长,而且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有MnSODmRNA的表达上调.结论:EGCG能通过上调MnSOD mRNA表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌细胞株 凋亡 锰超氧化物歧化酶 -
X线照射对不同放射敏感性鼻咽癌细胞中ATM mRNA表达的影响
[目的]研究X线照射对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的影响.[方法]采用逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,以β-actin为内参照,测定10Gy X线照射前后CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的变化.[结果]在X线照射前,CNE1中ATM mRNA基础水平与CNE2相似:在X线照射后,CNE1中ATM mRNA水平在照射4h后明显升高,12h后恢复;CNE2中ATM mRNA水平在照射后12h内无显著变化.[结论]在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中,ATM mRNA表达的基础水平相似,在经X射线处理后,CNE1和CNE2中ATM mRNA水平变化规律不同.这种ATM mRNA表达差异可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一.
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土贝母皂苷对人低分化上皮样鼻咽癌细胞(CNE-2Z)微管的作用
目的:探讨土贝母皂苷(皂苷)对人低分化上皮样鼻咽癌细胞株(CNE-2Z)微管的影响.方法:采用细胞免疫荧光法观察皂苷处理的CNE-2Z细胞微管的变化,蛋白免疫印迹法分析皂苷处理的CNE-2Z细胞中聚合和未聚合微管蛋白含量的变化.结果:免疫荧光图像结果表明,皂苷作用的CNE-2Z细胞丧失正常的微管网络,蛋白免疫印迹结果证实皂苷使CNE-2Z细胞未聚合的微管蛋白比例增加,而且这一作用与剂量和时间呈正相关.结论:皂苷能抑制CNE-2Z细胞内微管的聚合,提示皂苷是一种有效的抗微管剂.
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放射线诱导hEgr-1-CD对鼻咽癌CNE放射增敏作用的研究
目的 研究放射线诱导hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株放射增敏作用.方法 将pcDNA3.1(+)Egr-1-CD利用脂质体转染的方法转染入鼻咽癌细胞株,给予不同剂量的X线照射观察基因表达与放射的剂量效应关系,观察不同的放射线及不同剂量的前药对鼻咽癌细胞的杀伤效应.结果 电离辐射可诱导增强自杀基因阳性鼻咽癌CNE细胞株中CD基因的表达,电离辐射与前药5-Fc的联合应用大大增强了对自杀基因阳性细胞的杀伤作用,其杀伤作用大于单独自杀基因前药系统和单独照射.结论 hEgr-1-CD自杀基因前药系统对鼻咽癌CNE细胞株有放射增敏作用,其与放射联合应用对CNE细胞有明显的协同杀伤作用.
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稳恒磁场照射对人鼻咽癌CNE-2细胞生长与凋亡的影响
目的 研究稳恒磁场对体外培养的人鼻咽癌细胞(CNE-2)生长抑制与凋亡作用的影响.方法 利用磁感应强度为7 mT的自制稳恒磁场对体外培养的CNE-2细胞进行照射,经1、3、9、12、24、36、48、60、72 h不同时间照射处理后,采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,MTT法检测细胞生长活性,HE染色观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡情况.结果 从照射9h起细胞生长受到显著抑制(P＜0.05),生长曲线结果与MTT实验具有良好的一致性.经72 h照射处理后,MTT法、HE染色观察细胞出现形态学改变,但琼脂糖凝胶电泳检测未见细胞DNA断裂现象.结论 7 mT稳恒磁场照射对体外培养的CNE-2细胞生长有显著的抑制作用,而对诱导细胞凋亡的效果有待进一步研究.
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已建株鼻咽癌细胞的PLUNC基因启动子区序列多态性分析
目的 检测人类标准鼻咽癌细胞中是否存在已知的PLUNC基因启动子-437 bp～+87 bp区域的单核苷酸多态性(SNP).以便进一步探索SNP与鼻咽癌的关系.方法 采用PCR产物直接测序的方法,对7株体外培养的鼻咽癌细胞基因组DNA的PLUNC基因启动子区进行序列分析.结果 发现7株PLUNC基因的启动子区皆存在已知的3个SNP位点(1 888、2 128和N2)和未知一个突变位点(N1),其测观杂合度分别为85.7 %、100 %、100 %和28.6 %.其中3个已知SNP位点在筛查的细胞株中均存在T→C的突变,而且SUNE-1鼻咽癌细胞株的1888位点基因型为突变纯合子CC型.结论 体外培养的标准鼻咽癌细胞株中存在已知的3个SNP位点(1 888、2 128和N2)的突变现象,且突变率为100 %;1 888位点鼻咽癌易患型(CC型)已在体外稳定建株;首次发现启动子-195 bp区域N1突变位点.
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表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调存活素表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡的实验研究
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用以及这个过程中存活素(survivin)的表达变化特点.方法 应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR法检测这个过程中survivin mRNA的表达变化.结果 EGCG诱导CNE-2细胞凋亡,对其生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有survivin mRNA的表达下调. 结论EGCG能诱导CNE-2细胞凋亡,明显抑制其生长,这种诱导凋亡的能力通过下调survivin mRNA的表达实现.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌细胞株 凋亡 存活素 -
人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制
目的:研究人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及对肿瘤多药耐药机制.方法:取鼻咽癌细胞株(SUNE),进行细胞的培养、传代及鉴定,采用免疫荧光细胞化学技术联合流式细胞仪检测SUNE中CD133及CD13+细胞体外分化能力.利用免疫磁珠分选技术完成CD133+肿瘤细胞纯化,测定CD133+细胞体外增殖能力,将其与未分选及CD133-细胞进行比较.取顺铂、紫杉醇化疗药物,采用CCK-8法测定CD133+细胞耐药性.取10只4周龄ICR小鼠,皮下注射人鼻咽癌细胞株和普通细胞株,分析耐药性.结果:分离培养的SUNE在含有血清的培养基中呈贴壁生长,并且生长活跃,培养2～3 d后倒置显微镜下显示细胞呈梭形、扁平状,光泽度良好,培养2周左右细胞融合瓶底80.00％;流式细胞仪检测结果显示:约0.35％细胞表面膜存在抗原CD133.免疫细胞化学显示:SUNE细胞贴壁爬行,部分细胞能与SUNE中的CD133-相互结合,荧光显微镜下显示呈现橙红色,球状;向经免疫磁珠分选后的细胞中加入培养基,细胞呈单细胞,球形,悬浮生长.随着培养时间的不断延长,细胞开始出现团状生长,体积增加,细胞数量增多,培养24h后细胞开始贴壁生长,培养7d后呈串状生长;CD133+肿瘤细胞、CD133-肿瘤细胞及未分选细胞随着时间的延长细胞均出现增长,且CD133+肿瘤细胞增殖能力显著高于CD133-肿瘤细胞及未分选细胞(P＜0.05).10只小鼠均可见瘤体形成,种植人鼻咽癌细胞株组的瘤体体积显著大于普通细胞株组(P＜0.05).结论:鼻咽癌干细胞中CD133+对化疗药物的耐药性强.
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茶多酚对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤生长的抑制作用
背景与目的:许多研究报告表明,茶多酚(TP)有防癌和抗癌作用,但对鼻咽癌细胞作用的报道很少.我们近研究证明TP对人鼻咽癌CNE2细胞有抗增殖和诱导凋亡的作用.为进一步了解TP对人鼻咽癌细胞的作用,进行TP对多种鼻咽癌细胞和人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长影响的实验研究.方法:以MTT法检测TP对NPC/HK1、CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、SUNE1和Fadu7种人鼻咽癌细胞株的生长抑制作用.以人鼻咽癌细胞株(CNE2)裸鼠移植瘤为模型,作体内抑瘤试验.结果:在体外抗癌细胞增殖试验中,TP对NPC/HK1、CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、SUNE1和Fadu的IC50分别为55.83、98.43、119.21、127.74、158.07、160.72μg/ml和163.59μg/ml.在TP对人鼻咽癌细胞株(CNE2)裸鼠移植瘤的抑瘤试验的3批实验中,5mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为12.7%,P>0.05;10mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为31.0%,P<0.01;20mg·(kg·d)-1TP作用18天的平均抑瘤率为38.5%,P<0.01.结论:TP对7种人鼻咽癌细胞株均有不同程度的生长抑制作用,对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤的生长有一定的抑制作用.
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鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因序列的测定
目的： EB病毒 (Epstein-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如 LMP1基因）。 BamHI A区右向框 0（ BamHI A rightward fram0, BARF0）是在鼻咽癌 (Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个 EB病毒基因，对其变异性的研究尚未见报道，本研究是为了明确广东鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因的序列及其变异。方法：应用 PCR技术从 20例鼻咽癌组织中，扩增 EBV基因 BARF0，并对它们的序列进行测定。结果：与标准株 B95-8相比，鼻咽癌组织中 EBV-BARF0均有 4个位点发生突变： 160473（ G→ T）、 160545（ C→ T）、 160701（ C→ A）、 160707（ G→ C），并导致相应的氨基酸的改变： 2（ Ala→ Ser）、 26（ Leu→ Phe）、 78（ Arg→ Ser）、 80（ Ala→ Pro）。结论：由于 EBV的 BARF0基因在鼻咽癌细胞株及活检组织中 100％表达，在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达，本研究首次报道鼻咽癌组织中 EBV-BARF0的序列分析，与 B95-8相比存在变异，并导致了蛋白质的一级结构的改变，推测该基因很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。
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薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞体外增殖的影响
薏苡仁配合放射治疗晚期鼻咽癌(NPC)已取得较好的近期和远期效果[1].但单独使用薏苡仁能否抗NPC还值得深入研究.本文在既往研究的基础上,探讨薏苡仁的有效成分薏苡仁酯(CXL)对人NPC细胞增殖的影响及其可能的作用机理.
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紫杉醇对低分化鼻咽癌细胞株CNE-2生长凋亡的影响及Survivin mRNA的表达变化
目的:探讨紫杉醇对低分化的鼻咽癌细胞株CNE-2生长抑制率、凋亡的影响以及凋亡抑制基因Survivin的变化.方法:通过MTT法计算紫杉醇作用CNE-2细胞后的生长抑制率,通过流式细胞仪检测紫杉醇对CNE-2细胞凋亡及细胞周期的影响并应用One Step RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化.结果:观察到CNE-2细胞对紫杉醇具有时间和剂量的依赖性.10-9～10-7 mol·L-1的紫杉醇作用后,随着时间的增加,细胞的凋亡率也明显增加.低浓度的紫杉醇(10-9～10-8 mol·L-1)作用细胞后,并没有出现G2/M期的累积.而当浓度达到10-7 mol·L-1作用24 h后便出现明显的G2/M期阻滞,但48 h后这种阻滞又出现下降.CNE-2细胞被高浓度的紫杉醇(10-7～10-6 mol·L-1)作用24 h后,Survivin mRNA的表达反而显著增加(P＜0.05),低浓度紫杉醇则对Survivin mRNA的表达无影响.10-7 mol·L-1紫杉醇作用CNE-2细胞后,Survivin mRNA表达明显增加并持续到48 h,72 h后则又降至对照组水平.结论:紫杉醇作用CNE-2细胞后可以出现早期明显的G2/M期累积,这种现象可能与Survivin基因表达上调有一定关系.
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MnSOD在EGCG诱导鼻咽癌细胞株CNE-1凋亡中的表达变化
CNE-1细胞生长受到明显抑制,并诱导其凋亡,这种诱导凋亡的能力与MnSOD mRNA的表达上调相关.
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IL-2协同肿瘤坏死因子对移植性鼻咽癌的抗瘤作用
目的:研究重组人肿瘤坏死因子(rhTNF-α)与重组白介素-2(rhIL-2)协同体内抗鼻咽癌效应及抗瘤机理.方法:利用我室建立的鼻咽癌细胞株(CNE3)制成裸鼠鼻咽癌模型,用rhTNF-α或与rhIL-2联合瘤内注射以观察抑瘤效应及荷瘤组织细胞的病理学、超微结构的改变,探讨其作用机理.结果:鼻咽癌裸鼠移植瘤经rhTNF-α治疗后肿瘤出现坏死、体积缩小、甚至消失.rhIL-2能增强rhTNF-α的抗瘤作用.组织病理学及超微结构观察发现,大多数癌细胞出现粗面内质网扩张;核碎裂、核溶解而消失.结论:rhIL-2增强rhTNF-α的抗瘤机理可能与IL-2诱导癌细胞表达TNF受体作用有关,本研究为临床在鼻咽镜下进行肿瘤局部注射TNF进行治疗提供实验依据.
关键词： 重组人肿瘤坏死因子-α 白介素-2 鼻咽癌细胞株 裸鼠 抑瘤效应 -
小檗碱对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用
目的 观察小檗碱对人鼻咽癌CNE2细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用.方法 以人鼻咽癌细胞株CNE2作体外试验,以MTT法检测小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2生长抑制作用.结果 在体外抗癌细胞增殖试验中,小檗碱对CNE2的浓度分别为600 μg/ml、400 μg/ml、200 μg/ml、100 μg/ml,作用72 h后以MTT法进行检测,对CNE2增殖抑制率分别为85.0%、74.4%、67.3%、59.0%.结论 小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE2有生长抑制作用,与药物浓度有依赖性.
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X射线对不同辐射敏感性鼻咽癌细胞株细胞周期分布的影响
目的探讨X线对不同辐射敏感性鼻咽癌细胞株(CNE1、CNE2)细胞周期分布的影响.方法采用流式细胞仪检测不同X线剂量及照射后不同时间点CNE1、CNE2细胞周期的变化.结果 X线照射后,CNE1,辐射相对抗拒株,主要表现为G2期阻滞,且有时间剂量效应;CNE2,辐射相对敏感株,未见明显G2期阻滞;CNE1、CNE2均未见G1期阻滞.结论鼻咽癌细胞株(CNE1、CNE2)内在的辐射敏感性的差异原因之一可能与其在经电离辐射后发生的G2期阻滞程度不同有关.
