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MG132和DDP联合应用对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡影响及其机制的探讨
目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂(DDP)联合应用对人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞凋亡的影响,观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bad表达的变化.方法:体外培养的CNE-1细胞分别暴露于MG132和DDP、单独MG132或者DDP,24 h后,流式细胞术(FCW)检测CNE-1细胞的凋亡率,蛋白质印迹法测定CNE-1细胞中Bcl-2和Bad蛋白的表达情况.结果:流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药组CNE-1细胞凋亡率(53±3.2)％较单独应用MG132组(20±1.7)％、DDP组(18±2.3)％的凋亡率显著增加.蛋白质检测结果显示,与MG132组、DDP组比MG132和DDP组Bcl-2的表达减少约3倍,而Bad的表达增加约2倍.结论:MG132和DDP联合应用可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导CNE-1细胞的凋亡.因此,我们可以认为MG132能够增强DDP对CNE-1细胞凋亡的作用.
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CNE-1细胞高剂量X线常规分割照射后MDR1与PECAM1表达情况观察
本实验采用体外培养的人鼻咽癌CNE-1细胞系高剂量X线照射后,初步探讨高剂量照射引起血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM1) 改变与CNE-1细胞产生多药耐药(multiple drug resistance,MDR)的可能的相关性。
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X线照射对人鼻咽癌细胞株MRP基因和MRP表达的影响
化疗药物可以诱导肿瘤细胞多药耐药相关基因(MRP基因)及其蛋白(MRP)的过度表达,从而产生多药耐药,导致化疗疗效降低[1-2].放疗也能引起肿瘤细胞的MRP基因和MRP表达增强[3],但照射后肿瘤细胞MRP基因和MRP表达随时间的变化情况,目前少见报道.本研究采用体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞株,检测照射前、后细胞MRP基因和MRP的表达随时间变化情况以及细胞对顺铂(DDP)敏感性的变化,从而探讨照射与鼻咽癌多药耐药性的关系.
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微核法研究青蒿素和蒿甲醚对人鼻咽癌细胞的放射增敏作用
青蒿素( artemisinin)是从黄花蒿中提取的一种含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物,在临床上治疗恶性疟疾和脑型疟疾有显著疗效.近年发现,青蒿素及其衍生物对肿瘤细胞有显著的杀伤作用及放射增敏作用[1-4].但是,有关青蒿素的另一个衍生物蒿甲醚的放射增敏作用,目前国内外相关报道较少.本研究以人鼻咽癌CNE-1细胞为实验对象,采用胞质分裂阻滞微核法(cytokinesis-block micronucleus method,CBMN)研究青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响.Fenech和Morley[5]提出了胞质分裂阻滞微核法比常规法更敏感,检测染色体断片的效率更高,能较为精确、快速、简便地衡量染色体损伤程度[6],故本实验采用胞质分裂阻滞微核法来研究青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响.
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X线照射对鼻咽癌细胞hMSH2和hMLH1表达的影响
目的:研究X线照射对鼻咽癌细胞中错配修复基因hMSH2和hMLHI表达的影响,探讨放射损伤后肿瘤细胞的DNA错配修复机制.方法:将鼻咽癌CNE-1细胞分为实验组和对照组,对2组细胞进行X线分次外照射.实验组每次照射剂量为2 Gy,总剂量为10 Gy.对照组每次照射剂量为0 Gy.应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot方法,检测照射终止后不同时间点细胞hMSH2和hMLH1的表达.结果:实验组细胞在照射后hMSH2 mRNA和蛋白的表达均显著强于对照组(P＜0.01);hMLH1 mRNA及蛋白表达与对照组比较无显著差异(P＞0.05).结论:放射可以诱导鼻咽癌细胞hMSH2表达;hMSH2对放射造成的DNA损伤可能有修复作用,这可能是临床上鼻咽癌放疗敏感性降低的原因之一.
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X线照射对人鼻咽癌细胞株耐药基因及其蛋白表达的影响
[目的]检测X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白基因(MRP基因)及其编码产物多药耐药相关蛋白(MRP)的表达随时间变化的情况.[方法]对CNE-1细胞进行X射线照射,总剂量10Gy/(5d·5f).利用RTPCR检测照射前、照射开始后第7、14、21、28和35d细胞的MDR1、MRP基因的表达;Westernblotting检测照射前后P-gp、MRP的表达;MTT法检测照射前后顺铂(DDP)对细胞的半数抑制率(IC50).[结果]CNE-1细胞X射线照射前MDR1、MRP基因、P-gp和MRP呈弱表达;照射后35d内耐药基因及蛋白表达均显著增高(P＜0.05).[结论]CNE-1细胞X射线照射后耐药基因(MDR1、MRP)及其蛋白(P-gp、MRP)表达显著增强,同时CNE-1细胞对顺铂产生抵抗.
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NK、NKT和γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤效应研究
目的 比较NK、NKT、γδT等3种淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤作用,为鼻咽癌免疫治疗提供依据.方法 提取鼻咽癌患者外周血单核细胞(PBMC),体外诱导培养NK、NKT、γδT淋巴细胞14d,并用流式细胞术鉴定细胞表型.以鼻咽癌细胞株CNE-1作为靶细胞,表型鉴定正确的3种细胞分别加入CNE-1细胞中,采用实时无标记动态细胞分析(RTCA)实时检测NK、NKT和γδT淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应,比较3种淋巴细胞的杀伤效率.结果 自鼻咽癌患者外周血PBMC培养的NK、NKT、γδT淋巴细胞经流式细胞术证实表型正确;RTCA的结果表明在加入不同效靶比的3种效应细胞后,CNE-1细胞均呈现快速死亡,其中NKT淋巴细胞在1、4、8h对鼻咽癌CNE-1细胞株的体外杀伤率,高于NK和γδT淋巴细胞.结论 NK、NKT、γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞有杀伤作用,NKT细胞的杀伤作用显著,提示具有鼻咽癌临床生物治疗应用的潜力.
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蟛蜞菊提取物对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和细胞周期的影响
目的 通过体外实验研究蟛蜞菊提取物(WE)对人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞的增殖抑制作用,并进一步研究其作用机制.方法 蟛蜞菊70％乙醇提取物,通过硅胶柱梯度洗脱,100％甲醇洗脱部位即为WE.采用噻唑蓝(MTT)比色法测定WE对CNE-1细胞生长增殖的影响；采用Hoechst33528染色观察WE对细胞凋亡的影响；采用流式细胞仪技术检测WE对CNE-1细胞周期及细胞凋亡的影响；采用p38特异性抑制剂SB203580干预的方法检测p38活性与WE处理后CNE-1细胞周期变化的关系.结果 随着WE质量浓度的增加和作用时间的延长,CNE-1细胞存活率显著降低(P＜0.05).随着WE质量浓度的增加,CNE-1细胞出现明显的G2/M期阻滞.形态学观察可见WE处理CNE-1细胞48h后细胞数量减少,部分细胞细胞核发生皱缩.p38特异性抑制剂SB203580干预后,CNE-1细胞周期分布恢复正常.结论 WE通过p38蛋白使CNE-1细胞发生G2/M期阻滞,从而抑制CNE-1细胞的增殖.
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重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究
目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应.方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应.结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%.阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%.结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性.
关键词： 重组TFAR19蛋白 CNE-1细胞 细胞凋亡
