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γδT细胞杀肿瘤细胞过程中溶酶体运动及肌动蛋白纤维、T细胞受体重排特征研究
目的 观察γδT细胞溶解肿瘤靶细胞过程中溶酶体运动特征,了解T细胞受体、肌动蛋白纤维在效应/靶细胞接触区域的分布特征,探讨γδT细胞抗肿瘤生物学活性的可能机理.方法 Lysotracker Red-DND99标记的γδT细胞与人恶性黑色素瘤MeWo细胞共同培养,激光共聚焦显微镜实时观察γδT细胞杀伤肿瘤细胞过程中溶酶体运动过程及其特点.γδT细胞与MeWo细胞共同培养后甲醛固定,以rhodamine phalloidin标记肌动蛋白纤维或anti-TCRδ1-FITC抗体标记T细胞受体,激光共聚焦显微镜观察γδT细胞及肿瘤细胞之间免疫突触形成特征.结果 γδT细胞可快速识别并集聚于肿瘤细胞周围.在与肿瘤细胞直接接触的10 min内,将胞内溶酶体成分"倾吐"于肿瘤细胞后随之离开.肿瘤细胞受大量γδT细胞攻击后约60 min,出现细胞膜皱缩、变圆,约80 min死亡.在上述效应/靶细胞接触作用过程中,肌动蛋白纤维及T细胞受体均匀分布于γδT表面,不出现在效应/靶细胞接触区域富集现象.结论 γδT细胞通过与肿瘤细胞直接接触,释放其细胞内溶酶体内含物直接杀伤肿瘤细胞.与细胞毒性T淋巴细胞不同,γδT细胞与肿瘤细胞之间不形成典型的免疫突触.
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哮喘患者肺部γδT淋巴细胞和受体δ链的多态性
目的 观察哮喘患者肺部γδT淋巴细胞数量、分类、增殖率、所分泌的细胞因子和T细胞受体δ链的多态性,探讨肺部γδT细胞对哮喘患者气道炎症的影响.方法 7例哮喘患者和7例对照者的支气管肺泡灌洗液细胞分类计数,流式细胞术检测γδT细胞,免疫磁珠分选技术纯化γδT细胞,MTT法检测γδT细胞的增殖活性,ELISA法检测γδT细胞分泌细胞因子浓度,RT-PCR技术和基因扫描技术测定γδT细胞δ链的克隆性.结果 哮喘患者组支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的百分率为(6.39±0.71)%,高于对照组的(2.62±0.37)%(P<0.01);巨噬细胞为(81±4)%,低于对照组的(86±2)%(P<0.05);哮喘组γδT细胞的增殖率为(284.2±43.6)%,高于对照组的(217±5±59.5)%(P<0.05).γδT细胞分泌的白细胞介素-4浓度为(18.9±3.1)pg/ml,高于对照组的(14.1±3.0)pg/ml(P<0.05).γδT细胞受体δ1链、δ2链两组差异无显著性.结论 γδT细胞在支气管哮喘患者的肺部明显增多,加剧了Thl/Th2失衡.γδT细胞对抗原的识别是非特异的.
关键词： 支气管哮喘 γδT淋巴细胞 T细胞受体基因多态性 -
小鼠脂多糖急性肺损伤后γδT淋巴细胞与肺巨噬细胞的相互作用
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是临床上常见的危重病,病死率极高,严重威胁着患者的生命.γδT淋巴细胞的数量较少,在外周血中仅占1%～5%.巨噬细胞作为肺部主要免疫防御细胞,在炎症过程中发挥重要的作用.
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NK、NKT和γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤效应研究
目的 比较NK、NKT、γδT等3种淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤作用,为鼻咽癌免疫治疗提供依据.方法 提取鼻咽癌患者外周血单核细胞(PBMC),体外诱导培养NK、NKT、γδT淋巴细胞14d,并用流式细胞术鉴定细胞表型.以鼻咽癌细胞株CNE-1作为靶细胞,表型鉴定正确的3种细胞分别加入CNE-1细胞中,采用实时无标记动态细胞分析(RTCA)实时检测NK、NKT和γδT淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应,比较3种淋巴细胞的杀伤效率.结果 自鼻咽癌患者外周血PBMC培养的NK、NKT、γδT淋巴细胞经流式细胞术证实表型正确;RTCA的结果表明在加入不同效靶比的3种效应细胞后,CNE-1细胞均呈现快速死亡,其中NKT淋巴细胞在1、4、8h对鼻咽癌CNE-1细胞株的体外杀伤率,高于NK和γδT淋巴细胞.结论 NK、NKT、γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞有杀伤作用,NKT细胞的杀伤作用显著,提示具有鼻咽癌临床生物治疗应用的潜力.
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麦考酚酸酯对小鼠肠道γδT淋巴细胞及血浆IL-6、TNF-α表达的影响
目的 探讨麦考酚酸酯对小鼠肠道γδT淋巴细胞变化以及促炎因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响.方法 成年雄性C57BL/6 (C57)小鼠采用SAS 9.1.3软件完全随机化分为2组:生理盐水(NS)组,麦考酚酸酯(MMF)组.MMF组小鼠每天灌胃1次麦考酚酸酯悬浊液,500 mg·kg-1·d-1;NS组小鼠灌胃含有吐温-80及苯甲醇的生理盐水悬浊液,液体体积与MMF组相同.两组均连续灌胃15 d.流式细胞学检测小鼠各段肠道γδT淋巴细胞的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-6和TNF-α浓度变化.结果 MMF组与NS组比较,肠道上皮细胞间淋巴细胞(IEL)中γδT淋巴细胞比例下降,血浆IL-6和TNF-α浓度升高(P＜0.05),免疫组织化学提示MMF组肠道上皮细胞大量分泌IL-6.结论 麦考酚酸酯可以引起肠道IEL中γδT淋巴细胞比例下降,血浆促炎因子IL-6、TNF-α分泌增加.
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TGF-β1对γδT细胞TLR-4受体及IL-2、IFN-γ水平的影响
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对γδT淋巴细胞Toll样受体4(TLR-4)蛋白表达的影响,及TGF-β1对γδT淋巴细胞分泌淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)的影响.方法 从健康志愿者外周血中分离纯化γδT淋巴细胞,并用外源性TGF-β1、脂多糖(LPS)刺激γδT淋巴细胞,分为4组培养:空白对照组、LPS组、LPS+TGF-β1组、TGF-β1组.培养12 d后采用酶联免疫吸附法检测淋巴因子IFN-γ、IL-2的表达,Western blot检测TLR-4蛋白的表达,PCR检测TLR-4基因的转录.结果 与空白对照组相比,LPS组、LPS+TGF-β1组TLR-4蛋白的转录及表达水平升高(P <0.05),淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达增加;TGF-β1组TLR-4蛋白的表达、转录及IL-2的表达降低(P <0.05).与LPS组相比,LPS+TGF-β1组TLR-4蛋白的转录及表达、淋巴因子IL-12和IFN-γ的表达降低(P <0.05).结论 TGF-β1能抑制γδT淋巴细胞TLR-4蛋白的表达,降低γδT淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2淋巴因子的水平.
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双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠上皮γδT淋巴细胞的影响
目的 探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠道上皮细胞损伤的保护作用机制.方法 建立3日龄新生大鼠NEC模型,新生大鼠总共24只,分为正常新生大鼠组(正常组)、正常新生大鼠口服双歧杆菌组(正常口服双歧杆菌组)、NEC组和NEC口服双歧杆菌组,每组6只,在建模72 h后对十二指肠下端至直肠上端肠道组织进行肠道病理评估和肠道γδT淋巴细胞流式细胞学检测.结果 肠道组织病理学结果显示,正常组及正常口服双歧杆菌组的肠道组织结构正常,NEC口服双歧杆菌组肠道组织损伤较NEC组有所改善.同时流式细胞学检测结果显示,正常口服双歧杆菌组γδT淋巴细胞数量较正常组增加,NEC组肠道上皮γδT淋巴细胞数量较正常组明显减少,而NEC口服双歧杆菌组γδT淋巴细胞数量较NEC组增加.结论 双歧杆菌可改善NEC新生大鼠肠道上皮损伤,这种保护作用可能与其能增加肠道上皮yδT淋巴细胞数量有关.
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γδT淋巴细胞及其Vδ2亚群与慢性乙型肝炎患肝损伤和纤化程度的关系
目的 探讨γδT淋巴细胞及其Vδ2亚群在慢性乙型肝炎免疫耐受期(IT)及免疫活化期(IA)患者中的特点及其临床意义. 方法 流式细胞仪检测80例慢性乙型肝炎患者外周血内yδT淋巴细胞及其Vδ2亚群的频率,其中包括20例IT期患者和60例IA期患者.另取22例IA期患者、5例IT期患者以及5例健康对照(HC)肝组织标本用于肝内yδT淋巴细胞亚群分析的流式检测.多组之间使用Mann-Whitney U检验进行比较.相关性分析用Pearson相关分析. 结果 患者外周血频率检测结果显示:IA期患者yδT淋巴细胞比例为6.493％±1.268％,均较HC组的9.870％±1.384％和IT组的8.640％±1.164％明显减低,P值均＜0.01,差异有统计学意义;IA期患者Vδ2 T淋巴细胞频率为5.584％±1.336％均较HC组的8.172％±1.549％,和IT组的6.92％±0.883％显著减低,P值均＜0.05,差异有统计学意义.细胞计数结果显示:IA期患者yδT淋巴细胞数为(9.277±2.013)×107个/L,均较HC组的(19.354土2.117)×107个/L和IT组的(15.917±2.076)×107个/L明显减低,P值均＜ 0.001,差异有统计学意义;IA期患者V δ 2T淋巴细胞数为(8.311±1.817)×10 7个/L,与HC组的(14.420±2.239)×107个/L和IT组的(11.577±1.523)×107个/L比较,明显降低,P值均＜0.05,差异有统计学意义.相关性分析显示,IA组患者肝脏和外周Vδ2T淋巴细胞的频率与ALT水平呈负相关.结论 IA患者Y δ T淋巴细胞及其Vδ2亚群可能负向调节肝脏炎症.
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肝脾γδT细胞淋巴瘤一例并文献复习
目的 分析肝脾γδT细胞淋巴瘤(HSTCL)的病因、诊断、治疗及预后.方法 分析1例HSTCL患者的临床诊疗经过并复习相关文献.结果 该例患者通过脾脏切除病理学确诊,给予DVLD方案(脂质体多柔比星+硼替佐米+左旋门冬酰胺酶+地塞米松)化疗,疗效待评估.结论 HSTCL临床罕见,诊断困难,预后极差,尽早给予高强度化疗联合造血干细胞移植为一种疗效较好的治疗手段.
