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人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制
目的:研究人鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及对肿瘤多药耐药机制.方法:取鼻咽癌细胞株(SUNE),进行细胞的培养、传代及鉴定,采用免疫荧光细胞化学技术联合流式细胞仪检测SUNE中CD133及CD13+细胞体外分化能力.利用免疫磁珠分选技术完成CD133+肿瘤细胞纯化,测定CD133+细胞体外增殖能力,将其与未分选及CD133-细胞进行比较.取顺铂、紫杉醇化疗药物,采用CCK-8法测定CD133+细胞耐药性.取10只4周龄ICR小鼠,皮下注射人鼻咽癌细胞株和普通细胞株,分析耐药性.结果:分离培养的SUNE在含有血清的培养基中呈贴壁生长,并且生长活跃,培养2～3 d后倒置显微镜下显示细胞呈梭形、扁平状,光泽度良好,培养2周左右细胞融合瓶底80.00％;流式细胞仪检测结果显示:约0.35％细胞表面膜存在抗原CD133.免疫细胞化学显示:SUNE细胞贴壁爬行,部分细胞能与SUNE中的CD133-相互结合,荧光显微镜下显示呈现橙红色,球状;向经免疫磁珠分选后的细胞中加入培养基,细胞呈单细胞,球形,悬浮生长.随着培养时间的不断延长,细胞开始出现团状生长,体积增加,细胞数量增多,培养24h后细胞开始贴壁生长,培养7d后呈串状生长;CD133+肿瘤细胞、CD133-肿瘤细胞及未分选细胞随着时间的延长细胞均出现增长,且CD133+肿瘤细胞增殖能力显著高于CD133-肿瘤细胞及未分选细胞(P＜0.05).10只小鼠均可见瘤体形成,种植人鼻咽癌细胞株组的瘤体体积显著大于普通细胞株组(P＜0.05).结论:鼻咽癌干细胞中CD133+对化疗药物的耐药性强.
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锚定蛋白CD59与接头分子Cbp在T细胞上的定位及功能研究
目的 研究CD59、Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)在细胞膜的定位,及其在细胞活化及增殖中的相互作用.方法 应用免疫荧光细胞化学技术,通过荧光显微镜分析系统对CD59、Cbp的定位进行了分析；Jurkat细胞转染pSUPER-siCD59重组质粒,并行RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中CD59的表达及蛋白酪氨酸激酶癌基因家族(fyn)磷酸化水平.利用MTT比色法检测转染各组细胞的增殖效应.结果 CD59、Cbp主要分布在细胞膜上.转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞中CD59表达量减少,磷酸化的fyn含量也随之减少,细胞增殖能力也低于其他各组.结论 CD59是一种膜蛋白,在细胞活化及增殖中与Cbp分子共同发挥作用.
关键词： CD59 CBP Jurkat细胞 免疫荧光细胞化学技术
