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化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的机理研究
为探讨中药化痰散结方诱导人肺癌细胞(SPC-A1)凋亡的作用及其对正常人胚肺细胞的毒性作用,通过血清药理学方法,选择不同浓度的含药兔血清与人肺癌细胞共同孵育处理,并以正常人胚肺细胞(HEL)作对照.结果:人肺癌细胞经含中药兔血清作用,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增强;荧光镜下可见细胞核破碎,裂解为大小不等的凋亡小体;流式细胞仪检测显现典型的细胞凋亡峰,以5%含药血清作用48 h凋亡峰为明显,凋亡率为42.8%;出现S期细胞阻滞;而该含药血清对人胚肺细胞无诱导凋亡作用.化痰散结方通过血清药理学方法诱导人肺癌细胞的凋亡,可能是其抗肿瘤的分子学机制之一.
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人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性
目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性.方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化.结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL.结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12.
关键词： 人突变K-ras基因 肺癌细胞株 生物学特性 -
榄香烯对人肺腺癌细胞A549作用机理的初步研究
目的:研究榄香烯对体外培养的人肺腺癌细胞株A549的作用及其机制.方法:采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期变化以及电镜观察细胞的形态变化.结果:榄香烯能明显抑制肺腺癌细胞A549的生长,其半数生长抑制剂量为124.61μg/ml;流式细胞术证实榄香烯能阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2/M期:透射电镜超微结构可见细胞浆内脂滴增多和坏死细胞明显增多的形态变化.结论:榄香烯能抑制肺腺癌细胞的生长,并阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2/M期.
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抗原致敏DC联合LAK细胞对肺腺癌细胞杀伤作用的研究
目的:观察抗原致敏树突状细胞(DC)联合淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞对肺腺癌细胞的杀伤作用.方法:采用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC),常规诱导出DC、LAK细胞.倒置显微镜观察细胞的形态和增殖情况;应用流式细胞仪(FCM)测定细胞表型上变化鉴定这两种细胞.流式细胞仪检测DC经抗原冲击和未经抗原冲击后其表型变化;利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法把DC-LAK细胞和DC-LAK-A549细胞作为效应细胞,肺腺癌A549细胞作为靶细胞,进行杀伤试验.结果:①体外诱导单个核细胞培养出DC和LAK细胞.②共培养后DC-LAK细胞的免疫表型表达增加.抗原致敏DC联合LAK细胞(DC-A549-LAK)组的免疫表型表达与对照组相比更有显著性意义.③共培养细胞在增殖倍率上有显著意义.④MTT显示共培养后的LAK细胞杀伤肿瘤细胞活性增强.抗原致敏后DC-A549-LAK(抗肿瘤效应增强更显著.结论:从外周血单个核细胞中诱导出具有典型形态和免疫表型的DC和LAK细胞.DC和LAK细胞共培养细胞,增殖活性、免疫表型、杀伤活性方面高于单纯培养的LAK细胞.抗原致敏后DC-A549-LAK抗肿瘤效应增强更显著.
关键词： 树突状细胞 淋巴因子激活的杀伤细胞 外周血单个核细胞 肺癌细胞株 抗肿瘤效应 -
肿瘤相关基因启动子甲基化在非小细胞肺癌细胞株中的作用研究
目的探讨基因甲基化在肺癌发生中的作用.方法南京医科大学附属南京第一医院呼吸科、复旦大学附属中山医院肺科和上海市肿瘤研究所于2004年10月至2005年12月应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RT-PCR检测甲基化的发生和mRNA的转录水平.结果肺癌细胞株A549部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、RASSF1a和CDH1等,完全甲基化的靶点包括MGMT、CDH13等;SH-77部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、WT1和CDH1等,完全甲基化的靶点包括RASSF1a和MGMT;SPC-A1部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、CDH1、MYOD1和CDH13等,完全甲基化的靶点包括WT1和RAR-β.RASSF1a、WT1、MYOD1、MGMT和RAR-β等5个基因发生甲基化的细胞株其mRNA的转录水平均低于未发生甲基化的细胞株甚至完全不转录.结论NSCLC细胞株中抑癌基因经常发生启动子CpG岛的甲基化,并且甲基化可能与抑癌基因mRNA转录水平下降相关.
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应用seldi-TOF MS技术分析高低转移肺腺癌细胞株差异表达蛋白
目的分析体外培养的高低转移肺癌细胞株蛋白质表达差异.方法采用表面增强激光解吸离子化(SELDI)蛋白质芯片技术检测了两种肺癌细胞株(肺腺癌细胞高转移株Anip973和肺腺癌细胞低转移株AGZY)的蛋白质谱.分析不同细胞株之间的蛋白质表达差异.每种细胞用WCX2和IMAC3两种芯片检测.采用PBSⅡC型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的数据采用Ciphergen公司的Proteinchip Software 3.2.1软件分析.结果获得WCX2和IMAC3两种蛋白芯片上Anip973和AGZY细胞株蛋白质谱图谱;在对两种肺癌细胞株的蛋白质谱比较时发现,有14个蛋白质在两种肺癌细胞株中出现明显的变化,其中9个差异蛋白在Anip973细胞中高表达,5个差异蛋白在Anip973细胞中低表达.结论高低转移肺腺癌细胞之间蛋白质谱表达比较时有差异蛋向.
关键词： 蛋白质芯片 肺癌细胞株 差异蛋白 表面增强激光解吸离子化 -
全反维甲酸对人肺癌细胞株A549细胞间黏附分子-1表达及体外侵袭力的影响
细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的表达在肿瘤的诊断、判断病程进展、转移潜能与预后方面有很大的潜在价值,受到众多学者关注.ICAM-1高表达的肿瘤细胞可能更易于脱离瘤体,随淋巴细胞游走而发生转移[1].流行病学、动物实验及临床研究均已证实全反式维甲酸(ATRA)类可用于肺癌的化学预防及治疗[2].我们研究了ATRA对肺癌细胞株A549体外增殖、侵袭力及ICAM-1、sI-CAM-1表达水平的影响,旨在阐明ATRA对肿瘤转移潜能的影响及ICAM-1分子在肿瘤侵袭中的作用,探讨ATRA对肿瘤的化学防治作用的可能机制.
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川芎嗪逆转肺癌细胞株多药耐药性的研究
目的探讨中药川芎嗪(TMP)逆转肺腺癌SPCA-1细胞株耐药性的作用.方法人肺腺癌SPCA-1细胞株,以阿霉素诱导耐药至终浓度为0.4μg/ml,MTT比色法测定TMP对耐药细胞的耐药性逆转作用.结果100mg/L和320mg/L TMP对细胞的抑制率均小于5%,两者无显著差异.100mg/LTMP加丝裂霉素(MMC)组与相应浓度MMC组比较,细胞抑制率有显著性差异(P＜0.05).加入320mg/L TMP的阿霉素(ADM)、长春地辛(VDS)、MMC组与相应浓度各药物组比较,其细胞抑制率均有显著性差异(P＜0.05),其中1PPC VDS+TMP、1PPC MMC+TMP组与相应药物组比较,差异非常显著(P＜0.01).顺铂(C-DDP)加TMP组与相应浓度C-DDP组比较,细胞抑制率均无显著性差异(P＞0.05).结论无明显细胞毒浓度的TMP可显著逆转SPCA-1人肺腺癌细胞株对ADM、VDS、MMC的耐药性,但对CDDP介导的耐药无影响.
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肺癌细胞株EGFR和MRP基因mRNA表达相关性研究
目的研究肺癌细胞株表皮生长因子受体基因(EGFR gene)mRNA与多药耐药性相关蛋白基因-MRP基因(MRP gene)mRNA表达相关性.方法原位分子杂交技术检测耐药性/非耐药性肺癌细胞株EGFR、MRP基因mRNA表达.结果耐药性/非耐药性肺癌细胞株均有不同程度EGFR、MRP基因mRNA表达,其表达与肺癌细胞株耐药性相关,且EGFR和MRP基因mRNA表达有明显相关性.结论 EGFR基因与MRP基因密切相关并影响肺癌细胞耐药性.
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扶正消积胶囊对人肺癌细胞株A549增殖抑制及凋亡的影响
目的:研究扶正消积胶囊在体外对人肺癌细胞A549增殖抑制及凋亡的影响.方法:应用MTT法检测扶正消积胶囊对A549细胞增殖的影响,应用流式细胞仪检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡的影响,应用Western bolt检测扶正消积胶囊对A549细胞凋亡相关基因表达的影响.结果:与空白组比较,扶正消积胶囊作用A549细胞24h后,能显著抑制A549细胞的增殖,且这种抑制成浓度依赖关系.Annexin-V/PI双染法结果显示扶正消积胶囊能诱导A549细胞的凋亡,且呈现浓度依赖关系.Western bolt结果显示,扶正消积胶囊能上调Bax表达,下调Bcl-2表达,激活caspase-3、caspase-9、PARP的活性.结论:扶正消积胶囊能有效抑制人胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase家族蛋白酶活性以及上调Bax、下调Bcl-2表达而实现的.
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香菇多糖诱导CIK细胞对肺癌A549细胞杀伤作用的研究
目的：明确香菇多糖对CIK细胞（细胞因子诱导的杀伤细胞）体外增殖及抗肿瘤活性的影响，为临床应用香菇多糖提高CIK细胞过继免疫治疗疗效提供理论数据。方法：于CIK细胞培养第11天加入不同浓度香菇多糖，诱导培养72h后比较细胞密度，流式细胞仪检测CIK细胞CD3、CD56双阳率，CCK8法检测比较经不同浓度香菇多糖诱导后的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率。结果：诱导72h后，加入5、25、50μg/mL香菇多糖的CIK细胞密度虽有上升但与未加入香菇多糖的空白对照组比较无统计学差异（P＞0.05）。经5μg/mL香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率与空白对照组相当（P＞0.05）；而经25、50及75μg/mL香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率较空白对照组明显升高（P＜0.05），以50μg/mL香菇多糖诱导组的差异为明显。经5μg/mL香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率与空白对照组相当（P＞0.05）；而经25、50及75μg/mL香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌细胞杀伤率明显高于空白对照组（P＞0.05），以50μg/mL香菇多糖诱导组对肺癌细胞的杀伤率高。结论：香菇多糖对CIK细胞的体外增殖无促进作用，高浓度香菇多糖反而抑制CIK细胞增殖；适当浓度的香菇多糖处理CIK细胞能使CD3、CD56双阳性率上升，同时可提高CIK细胞对肺癌A549细胞株杀伤率。香菇多糖诱导CIK细胞的适浓度在50μg/mL。
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nm23-H1基因转染对肺癌细胞 MMP-9和 TIMP-1表达的影响?
目的：探讨 nm23?H1基因转染对肺癌细胞株基质金属蛋白酶9（MMP?9）和金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP?1）表达的影响。方法利用脂质体介导的基因转染技术，将 nm23?H1基因转染入肺癌细胞株 L9981；利用半定量 RT?PCR 技术检测 nm23?H1基因转染前后 L9981肺癌细胞株 TIMP?1、MMP?9基因的 mRNA 表达；利用流式细胞仪技术检测 nm23?H1基因转染前后 L9981肺癌细胞株 TIMP?1、MMP?9基因的蛋白表达。结果 nm23?H1基因转染后肺癌细胞株 TIMP?1 mRNA 及蛋白表达上调，MMP?9 mRNA 及蛋白表达下调。结论 nm23?H1基因对 L9981肺癌细胞株 TIMP?1 mRNA 与蛋白表达具有正向调控作用，对 MMP?9 mRNA 与蛋白表达具有负向调控作用。
关键词： nm23-H1 肺癌细胞株 基质金属蛋白酶9 金属蛋白酶组织抑制物1 -
联合应用γ-干扰素与维拉帕米对人肺癌细胞株LRP表达的影响
目的探讨联合应用γ-干扰素与维拉帕米对人肺癌细胞株HTS-56R多药耐药及对肺耐药蛋白(LRP)表达的影响.方法采用MTT比色法来研究钙通道阻止剂维拉帕米和人类重组γ-干扰素对顺铂(DDP)细胞毒性在人类肺癌细胞侏HTB-56R上的影响.用流式细胞仪测量该细胞的LRP表达.结果γ-干扰素与维拉帕米能部分恢复HTB-56R对DDP的敏感性.LRP的表达能被γ-干扰素和维拉帕米降低,联合两者也有同样的效果,降低的程度与浓度呈正比.但将两者单独使用与联合使用相比无显著性差异(P>0.05).结论γ-干扰素与维拉帕米能逆转HTB-56R的耐药性,而且联合使用有更好的效果,其逆转可能是通过降低LRP的表达来实现的.
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CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究
目的观察激发CD40分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响.方法以肺癌细胞株A549和SPC-A-1为研究对象,以可溶性CD40配体(sCD40L)及激发型CD40单克隆抗体5C11处理A549和SPC-A-1细胞,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD40激发前后化疗药物顺铂(DDP)或丝裂霉素(MMC)对细胞增殖的影响,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD40分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用.结果激发CD40分子可增强DDP及MMC对CD40 表达肺癌细胞株A549增殖的抑制率(P＜0.05)以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应(P＜0.05);而CD40不表达细胞株SPC-A-1经sCD40L或5C11处理不能产生类似的作用.结论激发CD40信号可引起CD40 表达肺癌细胞A549对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值.
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γ-干扰素与维拉帕米联合逆转人肺癌细胞系的多药耐药
目的探讨逆转人肺癌耐药系HTB-56R耐药性的可行性.方法采用MTT比色法研究钙通道阻滞剂维拉帕米和人类重组γ-干扰素对DDP细胞毒性在人类肺癌细胞系HTB-56R上的的影响.结果γ-干扰素与维拉帕米能部分恢复HTB-56R对顺铂(DDP)的敏感性.当维拉帕米浓度＞4mg/L时,能明显增加DDP的细胞毒性,耐药株的抑制率＞19.0%(P<0.05).γ-干扰素浓度＞4.0×106U/L时,也能达到此效果,细胞抑制率＞36.9%(P<0.05).联合两药比单独使用有更好的效果,维拉帕米为2mg/L、γ-干扰素为2.0×106U/L时,细胞抑制率就达36.9%(P<0.01).不论单独使用还是联合使用逆转效果均呈剂量效应.结论γ-干扰素与维拉帕米能逆转HTB-56R的耐药性,而且联合使用有更好的效果.
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紫杉醇对人肺癌细胞株耐药性的作用
目的 探讨紫杉醇对人肺癌细胞株耐药性的影响及可能机制.方法 紫杉醇作用于肺癌细胞株H1975、H820、A549和PC-9 48 h后,采用细胞计数试剂盒8与流式细胞术分别检测细胞增殖的抑制率与凋亡率,Western blot法检测紫杉醇对肺癌细胞中MET、p-AKT、生存素蛋白表达的影响,RT-PCR检测紫杉醇作用前后miR-1表达的变化.结果 紫杉醇对4株肺癌细胞生长有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡.紫杉醇能抑制H1975、PC-9和H820细胞中MET、p-AKT、生存素蛋白表达,而上调miR-1基因的表达.结论 紫杉醇上调H1975、PC-9和H820细胞miR-1的表达,从而可能导致MET、p-AKT、生存素表达水平的降低.
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CD137L在肺癌细胞株的表达及其生物学功能
目的 研究人CD137配体(CD137L)在人肺癌细胞株的表达及其生物学功能.方法 采用RT-PCR及流式细胞术检测人CD137L在肺癌细胞株A549、H460、A2、SK-MES-1、SPC-A1的表达水平.用细胞计数试剂盒8检测A2细胞在PBS(A组)、IgG1-FC(B组)或CD137-FC(C组)包被处理后的增殖情况,并用Annexin V/PI双染方法检测其凋亡率.结果 CD137L mRNA及蛋白在多种肺癌细胞株上均有表达.C组细胞增殖较A、B组明显增加(P＜0.05),但三组间细胞凋亡率差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CD137L在各种肺癌细胞株上均有表达,CD137L介导的逆向信号能促进肺癌细胞增殖,可能在肺癌发生、进展中起重要作用.
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Survivin反义寡核苷酸协同Taxol诱导肺癌细胞株凋亡
[目的]研究Survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)单独或联合Taxol对肺癌细胞株Survivin mRNA和蛋白表达,细胞凋亡,生长抑制率的影响.[方法]Survivin ASODN经脂质体介导转染人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,用RT-PCR法、Western blot法检测Survivin表达;Survivin ASODN单独、联合Taxol作用NCI-H446细胞后,用MTT法检测细胞生长抑制率,台盼兰拒染实验检测细胞死亡率,流式细胞仪检测细胞凋亡并计算两药相互作用指数(CDI).[结果]Survivin ASODN转染NCI-H446细胞后,Survivin mRNA表达和蛋白表达明显下调,其中SurvivinASODN 500nM作用72h时Survivin mRNA抑制率达62.72%,效果佳;Survivin ASODN单独或联合Taxol作用NCI-H446细胞后发现Survivin ASODN联合Taxol作用的效果明显优于两药单独应用(P＜0.01).其联用时细胞凋亡率达73.3%,而单用时分别为43.6%和23.8%.其联用时细胞生长抑制率达80.1%,而单用时抑制率分别为50.4%和30.5%(P均＜0.01).两药联用组细胞死亡率达69.9%,高于两药单用时的41.4%和24.8%(P均＜0.01);CDI值为0.43,表明两药具有显著协同作用.[结论]Survivin ASODN能够抑制肺癌细胞株Survivin mRNA和蛋白表达并诱导肺癌细胞凋亡;Survivin ASODN能够增加Taxol的敏感性.
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Rho GTP酶在姜黄素抑制人肺癌细胞增殖和转移中的作用
目的 探讨姜黄素对人肺癌细胞株(A549)增殖和转移的影响,并通过检测姜黄素对细胞内Rho GTP酶蛋白表达及细胞骨架重组的影响,揭示Rho GTP酶在姜黄素抑制肺癌转移中的作用.方法 应用MTT法观察姜黄素对A549增殖能力的影响,体外侵袭实验和迁移实验观察姜黄素对肺癌细胞转移的影响.Western blot和半定量RT-PCR法分别检测姜黄素对与细胞骨架重组相关的RhoA,Rac1,Cdc42蛋白和mRNA表达的影响.免疫荧光细胞化学法标记微丝,激光共聚焦扫描显微镜观察姜黄素对细胞骨架重组的影响.结果 姜黄素能抑制A549细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加.与对照组比较,2.5,5μmol·L-1的姜黄素处理24 h后的A549细胞增殖抑制率较低,但体外侵袭和迁移能力均显著下降(P＜0.01).姜黄素能显著下调RhoA,Rac1,Cdc42蛋白和mRNA表达(P＜0.01),并能明显影响细胞内微丝骨架的结构和分布.结论 姜黄素可通过下调Rho GTP酶基因表达,调控肺癌细胞微丝骨架结构,进而抑制体外增殖和转移能力.
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肺癌细胞株肺癌相关基因差异表达分析
目的通过芯片技术检测肺癌细胞株基因差异表达探讨肺癌的发病机制,并尝试寻找可能用于肺癌的预防、诊断和治疗的基因.方法对四株肺癌细胞(PGCl3、PAa、H1299、NiS成瘤)作肺癌相关基因的芯片检测,分析其与对照组永生化细胞株(16HBE)之间的表达差异.从检测结果中选取了三个基因作RT-PCR鉴定.结果H1299有89个基因表达改变,PAa有59个基因表达改变,PGCL3有93个基因表达改变,NiS成瘤有78个基因表达改变.经RT-PCR鉴定的三个基因:L6A在各肿瘤细胞株中呈高表达,RXRB在各肿瘤细胞中呈低表达,vimentin除在无恶性转移株PAa中无显著差异外,在其他肿瘤细胞株中均呈高表达,结果与芯片结果一致.结论肿瘤的发生发展是多基因多阶段相互作用的结果,L6抗原可能作为肿瘤的特异性标记物,vimentin可能与肺肿瘤的转移有关,RXRB的表达水平可能与肿瘤细胞的分化相关.
